简介：目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针，并标记生物素，利用微孔板Southern杂交技术，使探针与模板DNA杂交，再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应，通过酶标仪检测杂交结果，以确定近交系小鼠的基因型。结果57BL／6和C57B：／10为H-2^b型；DBA／2和Scid为H-2^d型；615和C3H为H-2^k型；NCPC／2、TA1、TA2和T739均为H-2^b型。结论通过Southern杂交检测可以确定近交系小鼠的基因型。该检测方法简便、易行，检测结果客观，可以应用于近交系小鼠的遗传检测。

简介：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种重要的慢性呼吸系统疾病,主要包括慢性支气管炎和肺气肿,患病人数多,病死率高,由于其缓慢进行性发展,严重影响患者的劳动能力和生活质量.为此,国内外许多学者近年来对COPD的发病机制进行了大量的研究工作,但是到目前为止,COPD的研究进展仍然十分缓慢,其主要原因是COPD病因太多,发病机制复杂.本文旨在将国内外有关COPD的实验动物模型进行一次总结,并对各种模型的优缺点给予客观的评价.

简介：[目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。

简介：目的观察全身垂直振动、跑台运动和金雀异黄酮对去卵巢骨质疏松大鼠子宫重量指数和组织形态学以及糖原合成激酶3β（GSK-3β）蛋白表达的影响。方法将72只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组（12只）和去卵巢组（60只）。去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组和雌激素组（每组8~10只）,并开始进行不同干预处理。干预处理8周时,于末次处理结束36~48h内,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平称量大鼠子宫的重量,用HE染色方法观察子宫形态学的变化,用Westernblot方法检测子宫GSK-3β和P-GSK-3β蛋白表达的变化。结果与去卵巢组比较,雌激素组大鼠子宫重量指数显著增加,而振动组、跑台组、金雀异黄酮组大鼠子宫重量指数均无显著变化;与去卵巢组比较,雌激素组、跑台组和振动组大鼠子宫P-GSK-3β/GSK-3β蛋白的比值均显著增加,而金雀异黄酮组无显著变化。结论全身垂直振动和跑台运动均能刺激去卵巢骨质疏松大鼠子宫GSK-3β蛋白的磷酸化,而金雀异黄酮无此效应。

简介：目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础.方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoRV酶切获得转基因所用的外源基因.结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoRV酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DNA片段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因.结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因.

简介：目的应用快速心室起搏的方法制备扩张型心肌病心力衰竭犬模型,并对其方法学进行改进.方法6只成年健康杂种犬麻醉后先通过射频消融希氏束致Ⅲ度房室传导阻滞,再经静脉植入心内膜起搏电极,脉冲发射器为技术处理后的人用永久起搏器.起搏频率为250次/min,起搏时间持续(23.6±2.57)d.结果除有相应症状、体征外,所有动物均成功制备为扩张型心肌病心力衰竭模型;B超和病理解剖检查证实有心脏扩大、心室壁变薄以及肝瘀血、肺瘀血;病理切片显示心肌细胞空泡变性、肝窦扩张充血、肺泡内含铁血黄素沉积.结论改进后的快速心室起搏制备充血性心力衰竭动物模型的方法更为安全、可靠、实用.

简介：目的通过研究三种不同＂二次打击＂急性呼吸窘迫综合征（acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS）动物模型的特点,寻找较为理想的ARDS动物模型。方法将48只大鼠随机分为4组,每组12只。对照组（Control组）：尾静脉先注射生理盐水（normalsaline,NS）2.5mL/kg,30min后注射NS2.5mL/kg;油酸＋油酸组（OA＋OA组）：尾静脉先注入OA0.05mL/kg,30min后继续注射OA0.5mL/kg;内毒素＋内毒素组（LPS＋LPS组）：尾静脉先注入LPS2.5mg/kg,30min后继续注射LPS2.5mg/kg;油酸＋内毒素组（OA＋LPS组）：尾静脉先注入OA0.05mL/kg,30min后注射LPS2.5mg/kg。5h后处死动物采集标本,检测动脉血气,支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中白细胞总数、多形核白细胞百分比（polymorphonuclearleukocyteratio,PMN%）、肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactorα,TNF-α）水平、总蛋白含量,肺干湿重比（lungwet-dryweightratio,W/D）,观察肺组织病理改变并进行肺损伤评分。结果与control组比较,LPS＋LPS组、OA＋OA组及OA＋LPS组的氧分压（PaO2）下降（P〈0.05）、二氧化碳分压（PaCO2）、BALF中白细胞总数、PMN%、TNF-α、总蛋白含量,W/D、肺损伤评分均升高（P〈0.05）。OA＋LPS组总蛋白含量、W/D均高于LPS＋LPS组,差异有显著性（P〈0.05）,而与OA＋OA组比较则差异无显著性;OA＋LPS组BALF中白细胞计数、PMN%、TNF-α较OA＋OA组高（P〈0.05）,而与LPS＋LPS组比较则差异无显著性;OA＋LPS组肺病理改变最典型,肺损伤评分最高。结论OA＋OA、LPS＋LPS和OA＋LPS复合打击法均可建立＂二次打击＂ARDS大鼠模型,其中OA＋LPS复合打击法所复制的ARDS模型与临床ARDS特点更为接近,有利于研究ARDS的病理生理过程,是一种较为理想的＂二次打击＂ARDS动物模型。

简介：小型猪在解剖、生理和营养代谢等方面与人类相似，是人类医学研究的理想模型动物。然而，由于小型猪（尤其是我国自行培育的小型猪）在实验操作过程中不配合，成为限制其应用的主要因素之一，另一方面，由于实验操作的不规范，也常常引发动物的应激反应，并造成实验数据变异增加。以下结合本实验室的应用经验，介绍小型猪的基本实验操作技术。

简介：目的探讨制作兔VX2肝癌模型的新技术、新方法。方法将新西兰兔30只随机等分为3组,分别为嵌插组、改良嵌插组和经皮穿剌组。分别按不同方法建立肝癌模型,于建模后第1、2、3周分别进行CT扫描,评估肿瘤大小。3周后处死动物进行解剖,观察肝脏成瘤及转移情况,比较各组转移率,并行常规病理组织学检查。结果30只动物建模成功28只,成功率93%,经皮穿剌组有2只肝脏未见种植灶,嵌插组和改良嵌插组全部种植成功。改良嵌插组腹壁转移率显著低于嵌插组和经皮接种组。结论改良嵌插法3周内不会形成接种部位腹壁以及远处的转移,是一种理想的移植性肝癌模型建模方法。

简介：目的探索一种在无线遥测和刺激技术基础上的兔房颤模型的制作。方法新西兰兔皮下植入自主研发的植入式遥测刺激器,植入式遥测刺激器的制作是以TI公司（德州仪器）的MSP单片机和TI公司的RF无线收发芯片CC2250为核心开发设计。优化植入系统设计以满足新西兰兔房颤模型建立的探索实验;植入子植入新西兰兔腹部皮下,采集电极留置于左上肢和右上肢腋下皮下,两个刺激电极分别缝合于左心耳和左心房上,通过无线收发采集和刺激信号;实现利用Powerlab生理记录仪连续监测体表I导联心电信号,并通过专用计算机程序刺激软件,发放间歇（刺激2s,暂停2s）高频（频率20Hz）阈上（强度2mA,脉宽1ms）刺激,若间歇期内出现房颤,则人为干预中止刺激,若转为窦性心律,则继续刺激。结果植入式遥测刺激器在体内可稳定工作（包括采集模拟心电信号和发放刺激）30d,植入新西兰兔体内刺激3周后可诱导出房颤,持续时间〉48h。结论用新西兰兔代替比格犬建立基于无线遥测和刺激基础上的房颤模型是完全可行的,同时也体现了动物福利优化和替代原则。

简介：本研究以羔羊卵巢母细胞为材料，把体外受精技术应用到绒山羊育种工作中，观察了羔羊体外受精卵的体外发育及移植产羔的效果，以便探讨通过体外受精技术缩短绒山羊育种周期的技术途径。对406枚羔羊体外受精卵用M199+hcG、M199+LH和M199+hcG+EGF三种培养基进行体外发育培养。结果是，2-4细胞期胚的发育率平均分别为40．0％、43．6％和49．6％；桑椹胚和囊胚的发育率平均分别为17．5％、15.8％和18．8％。将49枚Fl代羔羊2-8细胞期胚移植给31只受体母羊，结果有11只妊娠(35．5％)并产羔12只(F2代)；将24枚F2代羔羊2～4细胞期胚移植给15只受体母羊，结果有2只妊娠(13．3％)并产F3代羔羊2只。

简介：目的(1)建立RT-PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA-PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA.(3)检验DNA-PCR和RNA-PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性.方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT-PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性.结果DNA-PCR和RNA-PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段.9只实验猴感染SIV后7d,RNA-PCR结果为7/9阳性,DNA-PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有5/9阳性;此后一直到感染后的42d,RNA-PCR和DNA-PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到4/9,到42d时下降为零.结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高.尤其是DNA-PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期--血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性.这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感.

简介：目的(1)建立RT-PCR方法，定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA，比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性；(2)建立DNA-PCR方法，检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA．PCR和RNA-PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴，定期采血，从血浆中提取病毒RNA，以RNA为模板通过RT-PCR法扩增，凝胶电泳定性；从感染猴PBMC中提取带有整合的SIC前病毒DNA的细胞基因组DNA，巢式PCR扩增，凝胶电泳定性。结果DNA-PCR和RNA-PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带，测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d，RNA-PCR结果为7／9阳性，DNA-PCR结果为100％阳性，而血浆病毒分离只有5／9阳性；此后一直到感染后的42d，RNA-PCR和DNA-PCR的结果一直为100％阳性，而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到4／9，到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA-PCR，既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞，又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞，所以在感染的早期和中后期——血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段。它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。

简介：目的建立多重PCR技术鉴定选育剑尾鱼RR-B系的方法.方法根据可明显鉴定剑尾鱼RR-B系的6对特异性微卫星引物Msa012、Msa014、Msa033、Msb025、Msd003、Msd051,采用不同的组合方式对RR-B系剑尾鱼和红眼红体的非选育剑尾鱼进行多重PCR扩增.结果引物组合1（Msa014、Msb025、Msd003）和组合2（Msa012、Msa033、Msd051）两个三重PCR反应体系能清楚的扩增各个微卫星座位,且各目的片段之间无干扰,易于识别,引物组合1的排除概率为99.98%,引物组合2的排除概率为99.96%,能准确鉴定剑尾鱼RR-B系.结论本检测方法具有较高的稳定性,可快速准确鉴定剑尾鱼RR-B系.

简介：目的：探讨PCR技术在鼠肺支原体检测中的应用，希望能建立一种可行、快速、敏感的检测方法。方法使用支原体通用引物及鼠肺支原体特异性引物对14份大鼠喉气管拭子洗液和拭子支原体培养液进行PCR扩增，2％琼脂糖电泳鉴定。另设M53和ATCC19612二株标准鼠肺支原体菌株作阳性对照。结果通用引物对大鼠喉气管拭子洗液检出率8／14，拭子支原体培养液检出率14/14，鼠肺支原体特异引物FCR扩增对大鼠喉气管拭子洗液检出率0/14，拭子原体培养液3/14。通用引物扩增M53和ATCC19612二株标准株均呈现阳性，而鼠肺支原体特异引物扩增M53和ATCC19612，只有M53呈现阳性。结论PCR通用引物检测比普通分离培养省时省力，而我们采用国外某学者认为对鼠肺支原体有特异性的引物，是否可用于鼠肺支原体的特异性PCR检查仍需进一步探讨。

简介：目的建立一种高效的应用TaqMan探针荧光定量PCR技术对Leprdb/+小鼠子代基因分型的方法。方法提取228例Leprdb/+小鼠子代鼠尾DNA,针对Lepr基因的突变位点(rs1801133)设计1对PCR引物和2条TaqMan探针。设定条件进行实时荧光PCR扩增,用SDS软件对SNP位点进行分型。通过2月龄动物的肥胖表现型验证并进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果用建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法对228份样本进行检测,其中GG基因型64份,基因型频率为0.1929;GT基因型123份,基因型频率为0.5395;TT基因型41份基因型频率为0.2807。TaqMan探针荧光定量PCR方法分型结果与通过肥胖表现型分型结果比较,灵敏度为97.56%,特异度为99.47%。结论应用TaqMan探针荧光定量PCR技术可实现对Leprdb/+小鼠子代基因位点的早期分型检测,方法简便,高效。

简介：目的基于Masquelet诱导膜技术,比较内固定钢板、髓内针和外固定架三种固定方式建立的大鼠胫骨大段骨缺损(MTBD)模型及诱导膜形成特点,从而选择较优的模型构建方法。方法60只10周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为3组:内固定钢板组(IFP)、髓内针组(IMP)和环形外固定架组(CEF)。在右侧胫骨中段构建4mm骨缺损模型,分别应用自制六孔不锈钢钢板、直径1mm克氏针、自制环形外固定架固定。记录造模用时、出血量及肢体肿胀持续时间;行X线检查,观察骨水泥、固定装置稳定情况;诱导膜行HE染色,观察组织形态结构特点。结果在造模用时、出血量及模型成功率方面,IMP和CEF两组明显优于IFP组(P<0.05)。②CEF组肿胀时间最短,但三组之间肿胀持续时间差异无显著性(P>0.05)。③IFP组出现1例螺钉松动和3例骨水泥松动,CEF组出现1例骨水泥松动,而IMP组固定良好。④在感染方面,IFP组出现3例钢板外露,IMP组出现2例脓性包块,而CEF组无感染发生。⑤诱导膜组织厚度在460~520μm,三组差异无显著性(P>0.05)。结论三种方式均可成功构建MTBD模型,但综合考虑CEF为模拟Masquelet技术构建大鼠MTBD模型较优的方式。

简介：目的建立泰泽氏病原体（Ty）纯化方法，获得纯的菌体供抗原研究，为ELISA诊断抗原的制备提供依据；并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被磁珠，从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty；用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty的蛋白和抗原图谱；同时用免疫磁珠分离技术（IMS）直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内的Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化的Ty单克隆抗体M5以0．5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合的磁珠4h，可最大效率地富集Ty；分离反应进行1h，敏感性达到1矿菌体／mL；吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于磁珠上的细菌；抗原分析表明，IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分，纯化的TvRJ株具有3个免疫优势的抗原成分，相对分子质量（Mr）分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3；此外，IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生的Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty，并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查的候选方法。

简介：目的建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌的快速检测方法--PCR法.方法根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列,设计并合成一对特异性的引物,利用PCR技术扩增nuc基因片段.对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增.结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现668bp的特异性DNA扩增片段,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性.将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释,测定此PCR体系的敏感性,结果显示,该PCR体系能检出3pg金黄色葡萄球菌DNA,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需4h.结论本研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测,适合应用于实验大小鼠的监测.

简介：对活体鼠肾脏局部分散的血清蛋白进行免疫组化分析通常很难用传统的方法来实现。为此，日本Yamanashi大学的ZhouD等人创造了体内冷冻技术（invivocryotechnique）。他们使用该技术结合冷冻置换法，检测了牛血清蛋白（bovineserumalbumin，BSA）过载鼠肾脏中的血清蛋白，并与传统方法获得的数据进行了对比。他们每天给小鼠注射BSA，连续2天，小鼠出现明显的蛋白尿，并可在其肾脏的Bowman’s间隙和肾小管观察到免疫组化方法定位的BSA，这些部分也可以观察到其它内源性小鼠血清蛋白。