简介:摘要目的构建hIL-10基因的酵母表达载体,为hIL-10在毕赤酵母高效表达和生物学功能研究奠定基础。方法采用PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增hIL-10基因,以内切酶EcoRI/XbaI对hIL-10基因和质粒pPICZαA进行酶切,将酶切产物进行连接,纯化连接产物并电转化E.coliDH5α,用含Zeocin的LB培养基筛选重组大肠杆菌并抽提质粒进行酶切和DNA测序鉴定;以重组质粒电转化感受态毕赤酵母,以不同浓度Zeocin的YPDS平板筛选重组酵母菌株并对重组酵母作菌落PCR鉴定。结果经PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增获得大小约540bp的片段;重组质粒经EcoRI/XbaI酶切后获得约540bp和3500bp的两种片段;DNA测序结果与Genbank中hIL-10基因序列一致;重组酵母经菌落PCR也获得540bp的片段。结论成功构建了hIL-10基因的酵母表达载体pPICZαA-hIL-10。
简介:摘要:建筑施工安全生产事关政治稳定、社会安定和人民安居乐业,国泰民安,是维持建筑事业持续、健康和稳定发展的重要保证和基础,也是建筑施工企业的生命和效益。故建设主管机构和建筑单位应统一思想——施工安全无小事,始终把施工安全生产工作放在最重要的位置,作为最主要工作来抓。因此,如何持续有效地管理和控制施工过程中一切影响安全生产和文明施工的因素,实现施工现场管理的规范化和标准化,成为业内人士关注的焦点。