简介：摘要目的评价活性氧(ROS)在缺氧后处理激活大鼠心肌细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路中的作用。方法分离、培养成年大鼠原代心肌细胞，采用随机数字表法分成4组(n＝20)：正常组(N)、缺氧复氧组(HR组)、缺氧后处理组(HPO组)及HPO+ROS清除剂组(HPO+MPG)。采用缺氧45 min复氧60 min的方法制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型；HPO组缺氧45 min后，行3个循环的氧合5 min-缺氧5 min处理，再复氧60 min；HPO+MPG组缺氧35 min时加入ROS清除剂N-(2-硫基丙酰)-甘氨酸(终浓度2 mmol/L)继续缺氧处理10 min，余同HPO组。于复氧末，检测心肌细胞内Ca2+水平和Nrf2活性，观察心肌细胞超微结构并进行线粒体Flameng评分；采用Western blot法和RT-PCR法分别检测心肌细胞Nrf2、醌氧化还原酶(NQO1)、SOD1、血红素加氧酶1(HO-1)及其mRNA表达。结果与N组比较，HR组心肌细胞内Ca2+水平、Nrf2活性和Flameng评分升高，Nrf2、NQO1、SOD1、HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05)；与HR组比较，HPO组心肌细胞内Ca2+水平和Flameng评分降低，Nrf2活性升高，Nrf2、NQO1、SOD1、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05)；与HPO组比较，HPO+MPG组心肌细胞内Ca2+水平和Flameng评分升高，Nrf2活性降低，Nrf2、NQO1、SOD1、HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论缺氧后处理激活大鼠心肌细胞Nrf2/ARE信号通路的机制可能与ROS有关。

简介：摘要目的评估活性氧簇(ROS)响应型纳米药物对活体小鼠角膜新生血管(CNV)形成的影响。方法Michael加成反应合成含有缩硫酮键的载血管内皮生长因子小干扰RNA(siVEGF)的ROS响应型纳米药物(ROS-TK-5/siVEGF)。琼脂糖凝胶电泳测定纳米药物在高ROS环境中的siVEGF累计释放量。选取39只6～8周龄VEGFR2-luc-KI转基因荧光标记小鼠，采用随机数字表法将其中30只小鼠分为正常对照组、PBS对照组、ROS-TK-5/NC组、ROS-TK-5/siVEGF组和雷珠单抗组，每组6只，采用NaOH滤纸贴附角膜中央的方法构建小鼠右眼CNV模型，正常对照组不做处理；应用随机数字表法将另外9只小鼠分为正常对照组、建模后7 d组和建模后14 d组，每组3只小鼠，采用二氢乙啶(DHE)染色法测定小鼠角膜碱烧伤后角膜组织内ROS含量。裂隙灯显微镜眼前节照相与小动物活体成像系统(IVIS)观察小鼠角膜碱烧伤后7、14、21 d应用纳米药物对CNV形成的影响。结果在无ROS环境中，仅5%～10%的siVEGF从纳米复合物中释放出。与10 mmol/L H2O2共孵育10 h后，约70%的siVEGF从纳米药物中释放。建模后7 d和14 d，角膜基质层相对荧光强度分别为5.403±0.306和2.930±0.255，较正常对照组的1.003±0.015明显增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组建模后不同时间CNV面积比较，差异均有统计学意义(F分组＝49.855，P<0.01；F时间＝65.556，P<0.01)，其中建模后7 d和14 d，ROS-TK-5/siVEGF组和雷珠单抗组的CNV面积较PBS对照组和ROS-TK-5/NC组明显减小，ROS-TK-5/siVEGF组CNV面积较雷珠单抗组明显减小，差异均有统计学意义(均P<0.05)；建模后21 d，ROS-TK-5/siVEGF组和雷珠单抗组的CNV面积较PBS对照组及ROS-TK-5/NC组明显减小，差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组小鼠建模后不同时间小鼠角膜的荧光信号强度比较，差异均有统计学意义(F分组＝27.193，P＝0.003；F时间＝51.062，P<0.01)，其中建模后7 d和14 d，ROS-TK-5/siVEGF组和雷珠单抗组的角膜荧光信号强度较PBS对照组及ROS-TK-5/NC组明显减弱，ROS-TK-5/siVEGF组角膜荧光信号强度较雷珠单抗组明显减弱，差异均有统计学意义(均P<0.05)；建模后21 d，ROS-TK-5/siVEGF组和雷珠单抗组的角膜荧光信号较PBS对照组及ROS-TK-5/NC组明显减弱，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ROS-TK-5/siVEGF可以有效抑制小鼠碱烧伤后CNV生成，且早期治疗效果优于雷珠单抗。

简介：目的探讨低氧条件下,活性氧（ROS）与硫氧还蛋白1（Trx-1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系中的表达情况,及其对OSCC细胞侵袭能力的影响。方法在常氧及低氧条件下培养人OSCC细胞系CAL33和HSC6细胞,2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯（DCFH-DA）法检测ROS水平,Westernblot检测Trx-1表达水平,采用独立样本t检验方法进行统计分析。特异性抑制Trx-1后检测ROS的表达。Transwell细胞侵袭实验检测不同状态下CAL33细胞的侵袭能力变化,结果用单因素方差分析统计。结果低氧条件下,CAL33和HSC6细胞的ROS在6h出现峰值,分别是各自对照组的（1.52±0.08）、（1.81±0.11）倍,后逐渐下降;而Trx-1随低氧诱导时间表达持续上调（P_（CAL33）=0.002,P_（HSC6）=0.0001）。特异性抑制Trx-1可显著上调CAL33和HSC6细胞的ROS表达至（2.78±0.26）、（7.29±0.83）倍,差异有统计学意义（t=13.4,P=0.0001）。与常氧比较,低氧可促进OSCC细胞的侵袭能力（P=0.001）;特异性抑制Trx-1可抑制低氧环境中OSCC细胞侵袭能力,且这一趋势可被乙酰半胱氨酸（NAC）逆转（F=137.66,P=0.0001）。结论低氧状态下,ROS与Trx-1的表达异常可促进OSCC的侵袭能力。特异性抑制Trx-1可通过激活ROS介导的信号通路抑制OSCC细胞侵袭。

简介：摘要局部氧化应激、炎症反应是创面修复的重要环节，决定着创面修复进程、结局与质量。活性氧是反映机体氧化应激与炎症反应状态的重要指标之一，被认为是创面炎症调控的理想靶标。近年来，随着纳米医学的快速发展，通过学科间交叉融合，本课题组和其他课题组成功研制出多种活性氧诊疗制剂，以实时监测和调控创面活性氧水平，最终达到提高创面修复速度、改善创面修复质量的目的，从而为创面局部炎症反应诊疗提供新策略和新方向。该文分别就活性氧作为创面局部炎症反应的调控靶标、活性氧的原位监测及活性氧的精准调控做一总结。

简介：持续不卧床腹膜透析（CAPD）是目前治疗终末期肾病（ESRD）的主要替代治疗方法之一,以往的研究已表明高糖可导致腹膜间皮细胞损伤,细胞外基质产生增多,最终导致腹膜纤维化。高糖引起腹膜纤维化的机制至今尚未阐明。氧化应激（OS）是指由于促氧化与抗氧化系统两者平衡失调导致活性氧（ROS）过度产生造成的组织损伤。研究已经证实腹膜透析患者普遍存在氧化应激。

简介：摘要目的探讨前B淋巴细胞白血病转录因子(PBX1)基因表达对肺癌细胞凋亡、ROS含量和STAT3信号通路的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肺癌及癌旁组织中PBX1基因的表达水平，分析PBX1基因表达水平与患者临床病理特征的关系。采用Western blot法检测人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞株中PBX1蛋白的表达水平。应用脂质体法转染空白对照(空白组)、阴性对照(阴性组)和PBX1小干扰RNA(siPBX1组)至A549细胞，采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和ROS含量，采用Western blot检测各组细胞中PBX1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平。结果肺癌组织中PBX1信使RNA的表达水平(2.36±0.23)高于癌旁组织(1.02±0.15)，差异有统计学意义(P<0.05)。PBX1基因表达水平与肺癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期均有关(均P<0.05)。PBX1蛋白在人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞中的表达水平分别为0.454±0.038、0.403±0.034、0.311±0.028和0.377±0.035，与人正常肺MRC-5细胞(0.041±0.007)比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染PBX1 siRNA的A549细胞中，PBX1蛋白的表达水平(0.082±0.010)低于空白组(0.704±0.065)，差异有统计学意义(P<0.05)。siPBX1组细胞的凋亡率和ROS含量分别为(30.78±3.64)%和51.55±5.03，与空白组[分别为(3.92±0.27)%和22.36±1.31]比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。p-STAT3、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平分别为0.051±0.006、0.202±0.018和0.068±0.008，与空白组(分别为0.172±0.010、0.425±0.041和0.196±0.021)比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制PBX1基因的表达可诱导肺癌细胞凋亡，其机制可能与ROS产生和STAT3信号的下调有关。

简介：目的研究白藜芦醇对人胃癌SGC．7901细胞的影响。方法SGC-7901细胞体外培养48h，分为白藜芦醇低、中、高剂量组（44、88、176μmol／L），阳性对照组（5-FU153．8μmol／L）：阴性对照组（不含药物同体积培养液），荧光显微镜观察不同浓度的白藜芦醇对SGC-7901细胞的形态学影响；流式细胞仪检测白藜芦醇对肿瘤细胞中线粒体膜电位、活性氧的的影响；激光共聚焦显微镜观察白藜芦醇对肿瘤细胞中钙离子浓度的影响。结果显微镜下可见肿瘤细胞染色程度加深，染色质聚集、断裂，产生大小不等的凋亡小体，且随着白藜芦醇浓度加大，现象越来越明显，表明细胞凋亡的比例不断增加；白藜芦醇能够明显降低肿瘤细胞中线粒体膜电位，随着白藜芦醇浓度不断增加，肿瘤细胞中活性氧也不断增加，说明白藜芦醇能够提高肿瘤细胞中的活性氧水平来诱导其凋亡；白藜芦醇对肿瘤细胞中钙离子的浓度有一定的作用，其中高剂量能够显著提高肿瘤细胞中钙离子的浓度，且呈现一定的剂量依赖关系。结论白藜芦醇通过影响SGC-7901肿瘤细胞线粒体膜电位、活性氧及钙离子浓度导致肿瘤细胞凋亡，且与剂量相关。

简介：摘要目的探讨低糖联合棕榈酸的代谢环境对人结直肠癌细胞SW480的抑制作用及其促进放射增敏的机制研究。方法在低糖、棕榈酸、低糖联合棕榈酸的处理下CCK-8筛选明显抑制SW480细胞增殖的处理条件。通过流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位及凋亡变化；免疫荧光γ-H2AX染色及克隆形成实验检测放射敏感性变化；蛋白印迹法检测蛋白质水平变化。结果与对照组相比，低糖联合120μmol/L棕榈酸处理显著抑制SW480细胞增殖(P<0.01)；CPT1a、PFKFB3、PKM表达增加，NDUFV1、NDUFV2、NDUFS1表达减少；ROS水平增加(P<0.01)；ATP水平降低(P<0.01)。射线处理后低糖联合120μmol/L棕榈酸处理组γ-H2AX焦点数量增多(P<0.05)；D0值降低(P<0.01)；ROS水平增加(P<0.001)；细胞凋亡增加(P<0.001)；γ-H2AX蛋白表达增加(P<0.01)。NAC预处理能够逆转ROS、凋亡和γ-H2AX蛋白表达的变化。结论低糖联合棕榈酸诱导SW480细胞代谢应激，抑制肿瘤增殖，在联合射线照射时通过诱导ROS产生和DNA损伤促进SW480细胞放射增敏。

简介：摘要目的初步探究原花青素在体外对胃癌细胞株SNU-1增殖、凋亡、活性氧（ROS）水平的影响和分子机制。方法SNU-1细胞分为对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组，使用CCK-8实验检测原花青素对SNU-1细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞的凋亡水平和ROS阳性率，并向加入200.0 μg/ml原花青素的SNU-1细胞中加入2 mmol/L谷胱甘肽，检测细胞的凋亡水平和ROS阳性率；采用蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白的表达水平。结果CCK-8实验结果显示对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组的SNU-1细胞增殖活力分别为3.69±0.30、3.29±0.41、0.91±0.39、0.45±0.22，差异有统计学意义（F=279.84，P<0.001）；与对照组比较，3个原青花素组SNU-1细胞的增殖被显著抑制（P=0.006，P<0.001，P<0.001）。流式细胞术结果显示，对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组的SNU-1细胞早期凋亡率分别为（0.00±0.00）%、（0.00±0.00）%、（0.09±0.07）%、（0.45±0.22）%，差异有统计学意义（F=7.14，P=0.003）；50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加（P=0.003，P=0.007）。4组SNU-1细胞晚期凋亡率分别为（0.00±0.00）%、（0.01±0.00）%、（6.98±0.77）%、（33.32±2.78）%，差异有统计学意义（F=654.28，P=0.003）；50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加（P<0.001，P<0.001）。4组SNU-1细胞ROS阳性率分别为（0.02±0.01）%、（0.10±0.05）%、（1.15±0.26）%、（1.58±0.22）%，差异有统计学意义（F=162.24，P<0.001）；50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加（P<0.001，P<0.001）。200.0 μg/ml原花青素组和谷胱甘肽干预组SNU-1细胞的ROS阳性率分别为（1.25±0.63）%、（0.13±0.02）%，差异具有统计学意义（t=5.39，P=0.001）；2组细胞早期凋亡率分别为（10.56±3.24）%、（2.09±0.24）%，晚期凋亡率分别为（29.65±6.01）%、（23.63±1.52）%，差异均具有统计学意义（t=2.61，P=0.048；t=3.97，P=0.012）。对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组SNU-1细胞Bcl-2蛋白表达水平分别为1.00±0.00、0.83±0.05、0.60±0.14、0.41±0.23，差异有统计学意义（F=10.63，P=0.004）；50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著减少（P<0.001，P<0.001）。结论原花青素在体外对胃癌SNU-1细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用，可能是通过升高细胞内的ROS水平和减少Bcl-2蛋白表达实现的。

简介：目的：探讨紫癜肾Ⅰ号方含药血清对体外培养大鼠肾小球系膜细胞（rGMC）增殖及活性氧产生的影响。方法：以不同剂量的紫癜肾Ⅰ号方含药血清体外培养大鼠肾小球系膜细胞,采用MTT法检测培养细胞的增殖能力,羟胺法检测培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）水平,比色法检测培养上清液清除活性氧（ROS）能力。结果：紫癜肾Ⅰ号方含药血清能显著抑制体外培养rGMC的增殖,提高培养上清液SOD值水平及清除活性氧单位值,且作用与药物浓度正相关。结论：紫癜肾Ⅰ号方可通过抑制GMC的过度增殖活化、下调ROS生成而减轻紫癜性肾炎（HSPN）的肾小球系膜增生。

简介：目的：探讨2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（2-[（3-carboxy-1-oxoprogy1）amino]-2-deoxy-D-Glucose,COPADG）诱导Eca-109细胞凋亡的机制。方法：不同浓度COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、细胞内活性氧（ROS）、线粒体跨膜电位。结果：Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关（rs=1.0,P〈0.01）;Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关（rs=1.0,P〈0.01）;ROS水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关（rs=1.0,P〈0.01）;ROS水平与Eca-109细胞线粒体膜电位水平呈负相关（rs=1.0,P〈0.01）。结论：COPADG可促进Eca-109细胞凋亡,提高Eca-109细胞内ROS水平,并降低线粒体膜电位水平。实验结果提示COPADG提高ROS水平,降低Eca-109细胞线粒体膜电位水平,启动细胞凋亡通路,促使Eca-109细胞凋亡,并且线粒体膜电位的下降是通过提高ROS实现的。

简介：摘要目的评价活性氧(ROS)介导的线粒体途径细胞凋亡在多次七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期认知功能障碍中的作用。方法SPF级健康新生SD大鼠60只，体重12~20 g，采用随机数字表法分为3组(n＝20)：对照组(C组)、多次七氟烷麻醉组(S组)和ROS抑制剂组(A组)。S组和A组于出生后6、7和8 d时吸入3%七氟烷2 h，C组吸入空气。A组大鼠于每次七氟烷麻醉前腹腔注射ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸150 mg/kg。于出生后35 d时行旷场实验评估大鼠的自发活动能力，于出生后36 d时行Morris水迷宫实验检测认知功能，水迷宫实验结束后处死大鼠分离海马组织，采用流式细胞术检测海马神经元凋亡率、ROS及线粒体膜电位(MMP)水平，采用Western blot法检测细胞色素c(Cyt c)、裂解的caspase-9和caspase-3水平。采用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。透射电镜下观察海马神经元线粒体的超微结构。结果与C组比较，S组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马神经元凋亡率、ROS与MMP水平升高，Cyt c、裂解的caspase-9和caspase-3、Bax mRNA表达上调，Bcl-2 mRNA表达下调，Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05)，线粒体肿胀、线粒体嵴结构断裂。与S组比较，A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马神经元凋亡率、ROS与MMP水平下降，Cyt c、裂解的caspase-9和caspase-3、Bax mRNA表达下调，Bcl-2 mRNA表达上调，Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)，线粒体肿胀及嵴结构断裂的情况改善。结论多次七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期认知功能障碍的机制可能与激活ROS介导的线粒体途径细胞凋亡有关。

简介：摘要目的探究负载焦亡抑制剂的活性氧响应性自组装纳米胶束对糖尿病大鼠全层皮肤缺损的影响。方法采用实验研究方法。用纳米胶束聚乙二醇-嵌段-聚丙烯硫醚（PEG-b-PPS）包封核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）1/2抑制剂（NOD-IN-1），将所得产物称为PEPS@NOD-IN-1。利用透射电子显微镜和粒度分析仪分别观测PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1的形貌和水合粒径，用酶标仪测量并计算PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率和载药率以及PEPS@NOD-IN-1在单纯磷酸盐缓冲液（PBS）和含过氧化氢的PBS中40 h内对NOD-IN-1的累积释放率，样本数均为3。取24只6~7周龄雄性SD大鼠，通过注射链脲佐菌素的方法诱导1型糖尿病，在每只大鼠背部制作6个全层皮肤缺损创面，按随机数字表法将致伤大鼠分为进行相应处理的PBS组、NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组、PEPS@NOD-IN-1组，每组6只。伤后3、7、12 d观察创面愈合情况并计算创面愈合率；伤后3 d，采用免疫荧光法检测创面组织中活性氧水平；伤后7 d，利用苏木精-伊红染色评估创面肉芽组织厚度，采用实时荧光定量反转录PCR法检测创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测创面组织中NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达。前述指标均各取各组不同鼠的共6个创面检测。另取PBS组和PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7 d创面组织（各3个样本），利用高通量测序技术平台进行转录组测序，筛选出PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的差异表达基因（DEG），进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；制作焦亡相关通路NOD样受体通路DEG热图；通过STRING数据库对热图中的DEG进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析，筛选PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、Tukey检验。结果PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1均为大小较为均一的球形结构，水合粒径分别为（134.2±3.3）、（143.1±2.3）nm。PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率为（60±5）%、载药率为（15±3）%。PEPS@NOD-IN-1在单纯PBS中对NOD-IN-1的释放较缓慢，40 h累积释放率仅为（12.4±2.3）%；PEPS@NOD-IN-1在含过氧化氢的PBS中10 h内对NOD-IN-1的释放十分迅速，10 h累积释放率已达（90.1±3.6）%。伤后3、7 d，4组大鼠创面均逐渐愈合，PEPS@NOD-IN-1组愈合情况优于其余3组；伤后12 d，PBS组创面结痂面积较大，NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组创面上皮化明显，PEPS@NOD-IN-1组创面接近完全上皮化。与PBS组、NOD-IN-1组及PEG-b-PPS组比较，PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7、12 d创面愈合率均显著增高（P<0.05），伤后3 d创面组织中活性氧水平显著下降（P<0.05），伤后7 d创面肉芽组织厚度显著增厚（P<0.05），伤后7 d创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达以及NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达均显著下降（P<0.05）。KEGG通路分析显示，PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的DEG在NOD样受体、缺氧诱导因子、丝裂原活化蛋白激酶和肿瘤坏死因子（TNF）通路方面显著富集。在NOD样受体通路的DEG热图中，可见调控细胞焦亡的基因主要涉及NOD1、NOD2、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、Jun、信号转导及转录激活因子1（STAT1）、TNF-α诱导蛋白3。PPI结果显示，NOD1、NOD2、STAT1为PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。结论PEPS@NOD-IN-1能下调创面局部活性氧水平及细胞焦亡关键调节因子NOD1、NOD2、GSDMD-N端的表达，进而促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复；PEPS@NOD-IN-1还可显著下调创面的焦亡、炎症及缺氧相关通路，通过下调关键基因NOD1、NOD2、STAT1调控NOD样受体通路。

简介：目的探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）调节香烟提取物（CSE）诱导心肌线粒体产生活性氧簇（ROS）的机制及白藜芦醇（Res）心肌保护作用。方法H9C2细胞分5组：C组（对照组）、二甲亚砜组（DMSO溶剂对照组）、CSE组（CSE刺激组）、CSE＋Res组、Res组。采用Taqman探针荧光定量PCR检测各组SIRTI的mRNA表达、WestonBlot检测各组细胞SIRTI蛋白表达、荧光分光光度计检测细胞线粒体膜电位、荧光微量平板法检测不同浓度CSE刺激H9C2细胞产生ROS的变化、特异性荧光探针CM-H2DCFDA检测活细胞内ROS变化。结果与C组相比,CSE组SIRT1mRNA及蛋白质表达显著降低,ROS表达显著增强。与CSE组相比,CSE＋Res组SIRT1mRNA及蛋白质表达升高,ROS表达显著减少。随CSE刺激浓度增加,线粒体膜电位降低,ROS产生增加。提前给予Res可使线粒体膜电位升高,ROS产生减少。结论Res可通过刺激SIRT1的表达而抑制CSE诱导的心肌细胞线粒体功能受损、ROS的释放,这可能是其吸烟相关慢性阻塞性肺疾病诱导的心脏氧化应激损伤中发挥心脏保护作用的机制之一。

简介：摘要大电导钙激活钾离子通道是一种具有钙离子敏感性及电压依赖性且对血管张力调节具有重要作用的膜离子通道，糖尿病时血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道结构及功能发生改变，说明糖尿病血管病变可能与大电导钙激活钾离子通道异常有关。活性氧是体内一类氧的单电子还原产物，高血糖状态下活性氧生成增加。目前越来越多的证据表明高血糖状态下活性氧影响大电导钙激活钾离子通道功能，但具体机制尚不完全清楚。本文主要综述活性氧对糖尿病血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道的影响及其机制。

简介：摘要目的观察脉冲电磁场(PEMF)对椎间盘退行性病变(IDD)大鼠髓核A2A腺苷受体(A2AR)的调控效应，并探讨其对A2AR介导的活性氧(ROS)/PI3K/Akt信号通路的影响。方法采用随机数字表法将50只SD大鼠分为对照组、椎间盘退行性病变组(简称模型组)、A2AR激动剂CGS-21680治疗组(简称激动剂组)、PEMF组和PEMF联合CGS-21680治疗组(简称观察组)。除对照组外，其余各组大鼠均制成IDD动物模型。制模后激动剂组向L5-6椎间盘组织注射100 μl CGS-21680，PEMF组给予PEMF干预，观察组注射CGS-21680后再给予PEMF干预，PEMF干预时间为14 d。培养大鼠原代髓核细胞，将其分为对照组、IL-1β模型组(简称IL-1β组)、激动剂组、PEMF组和观察组，各组细胞干预方法同上。于制模8周后采用HE染色评估各组大鼠椎间盘组织病理形态变化，采用TUNEL染色评估髓核细胞凋亡情况，采用免疫组化/免疫荧光法测定8-OHDG表达，采用ELISA试剂盒等检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及ROS含量，采用Western blot技术检测A2AR、PI3K、AKT及p-AKT蛋白水平。结果模型组大鼠髓核细胞明显皱缩、坏死，纤维环断裂；观察组纤维环完整，髓核结构基本趋于正常。激动剂组、PEMF组及观察组SOD水平及A2AR、PI3K、p-AKT、AKT蛋白含量均较模型组明显升高，MDA、ROS及8-OHDG表达均显著降低(P<0.05)；并且观察组ROS水平亦显著低于激动剂组及PEMF组(P<0.05)，p-AKT磷酸化水平则显著高于激动剂组及PEMF组(P<0.05)。细胞实验结果显示，激动剂组、PEMF组及观察组髓核细胞SOD水平、A2AR、PI3K、p-AKT、AKT蛋白含量均显著高于IL-1β组，MDA、ROS及8-OHDG水平均明显降低(P<0.05)；并且观察组ROS表达亦显著低于激动剂组和PEMF组(P<0.05)，A2AR蛋白含量及p-AKT磷酸化水平则明显高于激动剂组及PEMF组(P<0.05)。激动剂组、PEMF组及观察组髓核细胞Bax水平均较IL-1β组显著降低，Bcl-2表达则明显升高(P<0.05)，并且观察组细胞凋亡率亦显著低于激动剂组和PEMF组，Bcl-2表达则显著高于激动剂组及PEMF组(P<0.05)。结论PEMF可通过上调A2AR活性，减少ROS生成，从而发挥抗氧化应激作用；联合A2AR激动剂能进一步激活PI3K/Akt磷酸化，下调促凋亡蛋白Bax水平，上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，从而抑制髓核细胞凋亡，减缓IDD恶性进展。

简介：无

简介：摘要目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBx）是否通过调控活性氧（reactive oxygen species，ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）信号通路引起足细胞焦亡。方法采用小鼠肾足细胞过表达HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组：空白对照组（不予特殊处理）、阴性对照组（转染对照慢病毒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+ROS抑制剂组（转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂）。电镜下观察足细胞的形态学改变；二氯二氢荧光素二乙酸酯（dichlorodihydrofluorescein diacetate assay，DCFH-DA）法检测ROS的生成；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定试验分别检测胱天蛋白酶1（Caspase-1）酶活性、乳酸脱氢酶、白细胞介素（IL）-1β和IL-18水平；实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测细胞焦亡相关蛋白如NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白水平的表达；TUNEL染色和流式细胞术检测焦亡细胞数量；免疫荧光染色检测Desmin和Nephrin的表达。结果HBx过表达慢病毒成功感染足细胞后，电镜下观察到细胞发生焦亡相关形态学改变；与阴性对照组相比，HBx过表达组ROS水平显著升高（P<0.05）；Hoechst 33342染色发现HBx过表达后细胞核浓缩；TUNEL染色和流式细胞术证明HBx过表达后足细胞发生了焦亡；焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达显著上调（均P<0.05）；Caspase-1酶活性、乳酸脱氢酶和Desmin表达水平升高（均P<0.05）。而NLRP3敲低或ROS抑制减弱了HBx过表达引起的足细胞焦亡以及相关蛋白表达增加（均P<0.05）。结论ROS/NLRP3通路在HBx过表达引起的足细胞焦亡中起着重要作用。

简介：目的探讨汉黄芩素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（rheumatoidarthritisfibroblast-likesynoviocytes,RA-FLS）凋亡的影响以及作用机制。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3~5代传代的成纤维样滑膜细胞。按照不同方法处理分为6组：空白对照组、低剂量汉黄芩素组（终浓度为20μg/mL）、中剂量汉黄芩素组（终浓度为50μg/mL）、高剂量汉黄芩素组（终浓度为100μg/mL）、100μg/mL汉黄芩素＋NAC组、100μg/mL汉黄芩素＋SB203580组。MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位（mitochondrialmembranepotential,MMP）,DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇（reactiveoxygenspecies,ROS）水平,Westernblot法检测p38MAPK通路相关蛋白的表达。结果与正常对照组相比,各剂量汉黄芩素均能够抑制RA-FLS细胞的增殖,增加其凋亡,降低MMP以及增加ROS水平,激活p38MAPK信号通路,并且呈现剂量依赖性关系。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低汉黄芩素诱导的RA-FLS细胞的凋亡,并且5mmol/LNAC下调汉黄芩素引起的p38MAPK磷酸化。结论汉黄芩素能够诱导RA-FLS细胞凋亡,ROS/p38MAPK信号通路参与了其凋亡的过程。

简介：摘要目的探讨干扰FSCN1基因表达对前列腺癌细胞凋亡、活性氧（ROS）水平影响及机制。方法以正常前列腺上皮细胞RWPE-1为对照细胞，通过RT-PCR及Western blot检测前列腺癌LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA及蛋白表达；以LipofectamineTM 2000为载体，DU145细胞分为si-FSCN1组（靶向抑制FSCN1的小干扰RNAs转染DU145细胞）、阴性对照组（随机序列转染DU145细胞）及空白对照组（未转染的细胞），siRNA转染48 h，Western blot检测FSCN1、PCNA、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达。CCK8检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。结果与RWPE-1细胞比较，LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA （1比2.561±0.189、7.183±0.882、4.796±0.567、4.796±0.567）及蛋白表达（0.053±0.007比0.217±0.013、0.654±0.058、0.316±0.035）均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与阴性对照组比较，si-FSCN1组FSCN1表达（0.473±0.052比0.086±0.010）降低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与si-FSCN1组比较，空白对照组、阴性对照组细胞活力（0.302±0.033比0.787±0.069、0.764±0.063）均升高，凋亡率（24.54﹪±1.47﹪比3.04﹪ ± 0.36﹪、3.28﹪±0.40﹪）和ROS相对荧光强度（90.04±5.73比47.88±3.62、49.62±4.11）均降低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与si-FSCN1组比较，空白对照组、阴性对照组PCNA （0.255±0.032比0.654±0.062、0.631±0.058）、NF-κB p65 （0.092±0.011比0.296±0.032、0.318±0.037）、p-NF-κB p65 （0.042± 0.008比0.155±0.018、0.151±0.016）、IKKα （0.112±0.01比0.172±0.020、0.192±0.023）和p-IKKα的蛋白表达（0.051±0.005比0.102±0.011、0.091± 0.009）均升高，Cleaved caspase3蛋白表达（0.206±0.018比0.074±0.009、0.085±0.010）均降低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。阴性对照组与空白对照组细胞活力、凋亡率、ROS水平及FSCN1、PCNA、Cleaved caspase3、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论干扰FSCN1基因表达可降低前列腺癌细胞活力及诱导凋亡，机制可能与ROS水平升高及NF-κB信号下调有关。