简介:摘要目的研究海蜇活性肽制备与抗肿瘤活性。方法海蜇先经正交试验确定最佳酶解条件,然后将酶解物离心得到海蜇活性肽粗品。粗品经超滤、SephadexG-15凝胶层析、冷冻干燥纯化得到海蜇抗肿瘤活性肽,通过MTT法及AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞测定了其对肿瘤细胞体外增值的影响。结果碱性蛋白酶在温度为55℃,料液比为12,加酶量为1000U/g,时间为4h的酶解条件下对海蜇进行酶解,酶解液中的氨基氮含量为41.3mg/100ml。从海蜇中分离纯化得到活性肽,MTT法表明其对肿瘤细胞的增殖有较强抑制作用,且抑制作用具有明显量效依赖关系;AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术显示该肽可诱导肿瘤细胞凋亡。结论经碱性蛋白酶酶解制备的活性肽对肿瘤细胞有明显的抑制作用,并能诱导肿瘤细胞凋亡。
简介:摘要目的检测DEAD盒RNA解螺旋酶5(DDX5)和微小RNA-205(miR-205)在前列腺癌(PCa)中的表达情况,并分析二者与PCa预后的关系。方法选取2015年4月至2017年4月于北京市朝阳区双桥医院行前列腺癌根治术或穿刺活检术的86例PCa患者为研究对象,取患者术中切除的癌组织及癌旁组织分别作为PCa组和对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中DDX5 mRNA、miR-205的水平。采用免疫组化法检测组织中DDX5的表达情况。分析DDX5、miR-205表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析DDX5、miR-205表达水平与PCa患者的预后关系。采用Cox回归分析PCa预后不良的影响因素。结果PCa组的DDX5 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.05),miR-205表达水平低于对照组(P<0.05)。PCa患者中DDX5、miR-205表达与肿瘤分期、血清PSA、Gleason评分、肿瘤转移均有相关性(均P<0.05),而与患者年龄、切缘性质均无相关性(均P>0.05)。经Kaplan-Meier生存分析,DDX5阳性表达患者的3年累积生存率低于DDX5阴性表达患者(P<0.05);miR-205高表达患者的3年累积生存率高于miR-205低表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析结果显示,DDX5水平偏高、miR-205水平偏低是PCa不良预后的危险因素(HR=2.598、3.342,均P<0.01)。结论在PCa患者癌组织中DDX5高表达,miR-205低表达,二者与PCa的多种临床病理及预后有关,是PCa患者预后不良的危险因素。
简介:目的观察DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在食管癌的表达,初步探讨其临床生物学意义。方法应用S-P免疫组织化学方法检测原发性食管癌103例,其中鳞状细胞癌100例,腺癌3例,癌周正常粘膜组织32例TOPDⅡ的表达。结果TOPOⅡ在食管癌的表达明显高于癌周组织,癌周鳞状上皮基底细胞可见少数核阳性表达。鳞状细胞癌高于腺癌的表达。食管鳞状细胞癌的分化程度与TOPOⅡ的表达呈正相关。结论TOPOⅡ在食管腺癌的表达低,符合其比食管鳞状细胞癌预后差。对放疗,化疗不敏感的事实。TOPOⅡ在高,中分化食管鳞状细胞癌的表达高于低分化者,提示食管鳞状细胞癌高分化者对拓扑异构酶抑制剂化疗药敏感,预后好。
简介:以铁观音茶梗为原料,采用挤压膨化技术和酶解技术对其进行分步改性,以SDF粗品含量为指标,确定了铁观音茶梗一次挤压膨化工艺条件为:喂料螺杆转动频率为20Hz,挤压膨化机机筒一区温度为120℃、机筒二区温度为100℃、螺杆转动频率40Hz、进料含水量50%,纤维素酶二次水解改性工艺条件为:加酶量3.5%、水解时间4h、料液比为1∶15、水解温度50℃、pH值=5,采用此改性工艺对铁观音茶梗粉末进行处理,测得SDF粗品含量为4.03%,持水力为6.92g·g-1,膨胀力为3.07mL·g-1,结合脂肪能力为3.89g·g-1,相较于改性前均有大幅度提升。
简介:采用生物传感器-人工神经网络建立基于游离氨基酸含量对胶原蛋白胰酶酶解进程的预测模型,以实现对酶解进程的在线监控,获得最大量的目标活性肽。以大马哈鱼皮为原料制备胶原蛋白,对其酶解,建立不同条件下的酶解动力学曲线。结果显示:酶解液中游离氨基酸含量随酶解时间的延长而增加,与胶原蛋白的水解度呈良好的线性关系。以酶浓度、底物浓度、游离谷氨酸含量、赖氨酸含量、谷氨酸和赖氨酸含量为输入参数,水解度DH为输出参数,建立基于谷氨酸含量、赖氨酸含量以及谷氨酸赖氨酸含量的蛋白酶传感器-人工神经网络预测模型。对3个模型的水解度样本值与拟合值进行比较分析,R2分别为0.98,0.9805和0.981,对样本值拟合度很高。利用模型进行独立试验验证,理论值与实验值相符合,水解度实验的相对误差范围分别为0.404%~6.45%,0.76%~2.27%和1.67%~2.72%。3个模型在一定程度上实现了仿真监控,可用来在线预测水解反应的动态进程。
简介:利用超声波预处理半纤维素酶,使其活性得以提高,进而提高马铃薯渣的酶解效率。首先,考查酶解条件,即pH值、水浴温度和水浴时间对马铃薯渣酶解效果的影响;其次,考查了超声波预处理条件(如超声功率、超声处理时间)对半纤维素酶活性的影响;再次,考查了放置时间(0~2.5h)对超声处理后的半纤维素酶活性的影响。结果表明,pH值5.0~6.0,水浴温度50℃,水浴时间15min为半纤维素酶的最佳酶解条件;超声功率600W,超声时间4min为半纤维素酶的最佳超声处理条件;在放置时间为0~2.5h时,超声波处理后的半纤维素酶与未处理的酶溶液相比,依然保持了较高的酶活性(p<0.05)。该研究表明,超声波预处理有助于提高半纤维素酶活性。