简介：摘要 目的 探究微创经皮肾穿刺取石术中实行手术室护理干预对术后并发症的控制作用。方法 在2021年度选择我院行微创经皮肾穿刺取石术患者中随机抽取56例作为研究对象，将上述患者随机分至研究组和对照组，各28例患者，研究组行手术室护理，对照组行常规护理，比较两组术后并发症发生情况。结果 研究组术后并发症发生率为3.57%（1/28），对照组术后并发症发生率为28.57%（8/28），两相比较，研究组低于对照组，差异表明统计学意义显著（p

简介：摘要目的探讨微小RNA 154-5p（miR-154-5p）调控枯灵素2（CUL2）对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用。方法（1）采用慢病毒转染技术，建立并筛选稳定过度表达miR-154-5p的子宫颈癌SiHa细胞株（miR-154-5p-OE组），以转染慢病毒空载体的SiHa细胞作为对照组（miR-154-5p-CO组），实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测两组细胞中miR-154-5p和CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，测量移植瘤体积。49 d后处死miR-154-5p-OE组和miR-154-5p-CO组裸鼠，剥离移植瘤，采用qRT-PCR技术、蛋白印迹（western blot）法和免疫组化法检测两组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p及CUL2 mRNA和蛋白的表达。（2）建立并筛选miR-154-5p与CUL2同时稳定过度表达的SiHa细胞株（CUL2-OE组），以转染过度表达miR-154-5p载体和空基因序列载体的SiHa细胞作为对照组（CUL2-CO组），进行功能回复实验，qRT-PCR技术检测两组细胞中CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，测量移植瘤体积。（3）将miR-154-5p-CO组和miR-154-5p-OE组带有绿色荧光蛋白（GFP）的SiHa细胞悬液注射于裸鼠尾静脉内，建立裸鼠转移瘤模型，60 d后处死裸鼠，解剖肝、脾、肺、肾、子宫，采用小动物活体光学成像系统检测各器官的GFP信号强度。结果（1）与对照miR-154-5p-CO组SiHa细胞比较，miR-154-5p-OE组SiHa细胞中miR-154-5p表达水平显著升高（分别为1.00±0.23、22.30±16.29；t=3.92，P=0.001），CUL2 mRNA表达水平显著下降（分别为1.00±0.95、0.62±0.07；t=9.67，P<0.001）。接种49 d后，与对照miR-154-5p-CO组裸鼠比较，miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤体积显著缩小［分别为（554.6±108.3）、（84.9±47.4）mm3；t=4.17，P<0.001］；miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p表达水平显著升高（P<0.001），CUL2 mRNA和蛋白的表达水平均显著下降（P均<0.01）。（2）功能回复实验中，与CUL2-CO组SiHa细胞比较，CUL2-OE组SiHa细胞中CUL2 mRNA表达水平显著升高（分别为1.00±0.17、6.24±0.88；t=10.13，P<0.001）。接种31 d后，与对照CUL2-CO组裸鼠比较，CUL2-OE组裸鼠移植瘤体积显著增大［分别为（4.5±0.4）、（18.4±6.5）mm3；t=2.64，P=0.020］。（3）60 d后处死肿瘤转移模型裸鼠，空白组、miR-154-5p-CO组、miR-154-5p-OE组裸鼠的肝、脾、肺、肾、子宫的GFP信号强度分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.001）；且与miR-154-5p-CO组相比，miR-154-5p-OE组裸鼠的肺、子宫的GFP信号强度均显著下降（P均<0.001）。结论miR-154-5p可通过靶向调控CUL2在裸鼠体内发挥抑制子宫颈癌的作用，miR-154-5p可作为子宫颈癌治疗的潜在靶点。

简介：摘要目的探讨CLC-2氯离子通道靶向阻滞对人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化过程的抑制作用。方法将HConF分为空白对照组、脂质体2000(Lipo2000)组、无义小干扰RNA(siRNA)组和CLC-2 siRNA转染组，其中空白对照组不做任何处理，其他各组分别采用含有相应转染试剂的培养基培养。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中CLC-2 mRNA的表达水平；采用CCK-8试剂盒检测各组HConF的增生能力，即吸光度(A)值；采用流式细胞仪检测各组HConF凋亡比例；采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组HConF迁移能力；采用胶原收缩实验检测各组胶原面积收缩率；采用Western blot法检测各组细胞胶原蛋白(Collagen)Ⅰ、Collagen Ⅲ、PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt的蛋白表达水平。结果空白对照组、Lipo2000组、无义siRNA组和CLC-2 siRNA转染组CLC-2 mRNA相对表达量和细胞A值总体比较差异均有统计学意义(F＝90.110、198.680，均P<0.001)，其中CLC-2 siRNA转染组CLC-2 mRNA相对表达量和细胞A值明显低于无义siRNA组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。空白对照组、Lipo2000组、无义siRNA组和CLC-2 siRNA转染组细胞凋亡率分别为(4.78±1.10)%、(4.54±1.51)%、(4.82±0.88)%和(28.90±0.91)%，总体比较差异有统计学意义(F＝363.260，P<0.001)，其中CLC-2 siRNA转染组细胞凋亡率明显高于无义siRNA组，差异有统计学意义(P<0.001)。各组细胞迁移率和细胞迁移数量总体比较差异均有统计学意义(F＝74.493、1 625.431，均P<0.001)，其中CLC-2 siRNA转染组细胞迁移率明显低于无义siRNA组，细胞迁移数量明显少于无义siRNA组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。各组细胞胶原面积收缩率总体比较差异有统计学意义(F＝104.692，P<0.001)，其中CLC-2 siRNA转染组细胞胶原面积收缩率明显低于无义siRNA组，差异有统计学意义(P<0.001)。各组Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K比值和p-Akt/Akt比值总体比较差异均有统计学意义(F＝112.073、456.931、340.889、43.021，均P<0.001)，其中CLC-2 siRNA转染组Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K比值和p-Akt/Akt比值明显低于无义siRNA组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论靶向抑制CLC-2氯离子通道基因表达可通过PI3K/Akt信号通路促进HConF凋亡，抑制细胞迁移、胶原合成及胶原收缩，抑制纤维化过程。

简介：摘要目的探讨RMT1-10体外诱导耐受性树突状细胞(Tol-DCs)对小鼠高危角膜移植排斥反应的抑制作用及其机制。方法选取SPF级雄性BALB/c小鼠100只和C57BL/6小鼠50只，获取C57BL/6小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(imDCs)，按照诱导干预不同分为imDCs组(不干预)、成熟树突状细胞(mDCs)组(加入脂多糖)、RMT1-10组(加入RMT1-10和脂多糖)和IgG同型对照组(加入IgG同型抗体和脂多糖)，培养7 d后采用流式细胞术检测各组DCs表型CD11c、CD80、CD86、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子(Tim)-4和CD103表达水平；采用酶联免疫吸附法测定细胞培养液上清液中白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)质量浓度。建立混合淋巴细胞培养体系，采用细胞计数试剂盒8法检测各组DCs刺激CD4+ T细胞增生的刺激指数(SI)。以角膜基质缝线法诱导BALB/c小鼠角膜新生血管，以4个象限新生血管均匀长入角膜中周区的小鼠作为受体。将80只受体小鼠采用随机数字表法随机分为imDCs组、mDCs组、RMT1-10组和IgG同型对照组，每组20只，各组分别于尾静脉注射相应DCs(1×106个/100 μl)。注射后7 d，以C57BL/6小鼠为供体行穿透角膜移植术。术后1个月，每日裂隙灯显微镜下观察受体小鼠角膜植片排斥体征，包括角膜混浊、水肿及新生血管。术后21 d，每组抽取5只受体小鼠，耳廓皮下注射20 μl(1×106个细胞)正常C57BL/6小鼠脾脏细胞，24 h后测量耳廓肿胀度评价迟发型超敏反应(DTH)。结果RMT1-10组DCs中CD80、CD86、MHC-Ⅱ和Tim-4阳性细胞占CD11c阳性细胞百分比均明显低于mDCs组，差异均有统计学意义(均P<0.001)；RMT1-10组Tim-4阳性细胞百分比明显低于imDCs组，CD103阳性细胞百分比明显高于其他3个组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。RMT1-10组细胞培养上清液中IL-10和TGF-β质量浓度明显高于其他组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。各组DCs对CD4+ T细胞增生的SI总体比较，差异均有统计学意义(F分组＝1 833.00，P<0.001；F比例＝230.40，P<0.001)。在每一细胞比例内，imDCs组SI均明显低于mDCs组，RMT1-10组SI均明显低于imDCs组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组角膜植片生存曲线总体差异有统计学意义(χ2＝77.69，P<0.001)，其中RMT1-10组角膜植片存活数量明显多于imDCs组，imDCs组角膜植片存活数量明显多于mDCs组，差异均有统计学意义(χ2＝9.74、31.02，均P<0.01)。阳性对照组、mDCs组、IgG同型对照组、imDCs组、RMT1-10组和阴性对照组小鼠耳廓肿胀度分别为(503.6±17.2)、(475.7±17.6)、(456.2±18.8)、(225.2±39.4)、(118.1±12.6)和(106.4±7.4)μm，总体比较差异有统计学意义(F＝377.10，P<0.001)，其中mDCs组小鼠耳廓肿胀度略低于阳性对照组，imDCs组小鼠耳廓肿胀度明显低于IgG同型对照组，明显高于RMT1-10组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论RMT1-10可抑制小鼠高危角膜移植排斥反应，其作用机制可能为体外诱导imDCs转化为Tol-DCs并上调TGF-β和IL-10表达，经过继转移后促进受体抗原特异性免疫耐受，进而间接延长角膜植片存活时间。

简介：摘要目的通过回顾性研究评价计算机辅助设计与辅助制作（computer aided design and computer aided manufacturing，CAD/CAM）全瓷嵌体冠修复无髓后牙的中长期效果，为临床提供参考。方法对2016年1月至2017年6月于第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科就诊并行无髓后牙CAD/CAM全瓷嵌体冠修复的患者进行回访，从颜色、形态、边缘适合性、修复体完整性、继发龋5个方面对未脱落的修复体进行评价。利用Kaplan-Meier生存曲线法计算修复体5年总体生存率。采用Log-rank检验比较各因素对修复体生存率的影响。结果共纳入74例患者，其中男性25例，女性49例，年龄（38.8±10.2）岁，共计101件全瓷嵌体冠，随访（62.8±12.0）个月。101件修复体中5件脱落，2件折裂，1件边缘发生继发龋。93%（89/96）的修复体形态评价和95%（91/96）的修复体边缘适合性评价为修复体效果理想，38%（36/96）的修复体颜色与基牙一致。CAD/CAM全瓷嵌体冠修复无髓后牙的5年总体生存率为93.0%（95%CI：87.9%~98.1%）。单因素分析显示，不同修复体材料、牙位、性别以及颌位对修复体生存率的影响差异均无统计学意义（χ²=0.88，P=0.349；χ²=0.64，P=0.422；χ²<0.01，P=0.957；χ²=0.69，P=0.407）。结论本组CAD/CAM全瓷嵌体冠修复无髓后牙的5年临床效果较好。

简介：摘要目的构建体外分区囊袋模型，探讨不同类型360°连续直角边缘人工晶状体(IOL)对晶状体上皮细胞(LECs)迁移的抑制作用。方法使用Transwell小室、细胞爬片、人源Ⅳ型胶原、IOL建立后发性白内障(PCO)体外分区囊袋模型作为模型组，并设置一个空白处理的Transwell小室作为对照组。人LECs细胞系SRA01/04培养于各组Transwell小室中，应用倒置显微镜观察各组中PCO早期病理表现；采用苏木精-伊红染色观察各组细胞形态改变。根据体外分区囊袋模型植入的IOL类型分为平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组，并设置不植入IOL为空白对照组。应用Transwell法检测各组IOL前囊膜区迁移细胞数目并计算前囊膜细胞迁移抑制率；应用细胞排斥区分析法检测各组IOL后囊膜区细胞迁移数目并计算后囊膜细胞迁移抑制率。结果模型组细胞培养48 h后体外分区囊袋模型后囊膜区可见细胞形成类似早期Soemmering环和小型Elschnig珍珠样小体等PCO特征性病理表现；苏木精-伊红染色显示模型组迁移的细胞呈纤维状。对照组中均未见类似细胞分布及形态改变。平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组前囊膜区域单位面积迁移细胞计数分别为18.80±5.53、24.67±9.80和34.47±10.80，后囊膜袢光学部移行区迁移细胞计数分别为56.43±9.00、162.20±16.38和121.30±12.01，IOL前囊膜细胞迁移抑制率分别为(92.02±1.94)%、(89.76±3.10)%和(86.27±4.54)%；后囊膜细胞迁移抑制率分别为(91.60±3.65)%、(70.14±5.35)%和(78.43±3.48)%。平台板式袢HydroSmart组前囊膜区迁移细胞数目明显少于C型补偿袢Hydrophobic组，细胞迁移抑制率明显高于C型补偿袢Hydrophobic组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；平台板式袢HydroSmart组后囊膜袢光学部移行区迁移细胞数、细胞迁移抑制率明显高于C型袢HydroSmart组和C型补偿袢Hydrophobic组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论成功构建体外分区囊袋模型。与C型袢HydroSmart IOL、C型补偿袢Hydrophobic IOL相比，HydroSmart平台板式袢IOL能更有效抑制LECs的迁移。

简介：摘要目的对比研究1.5 T封闭式磁共振(magnetic resonance，MR)与计算机体层摄影(computed tomography，CT)引导下经皮兔VX2肝脏血管旁肿瘤模型制作的有效性及安全性。材料与方法60只新西兰大白兔随机平均分配至MR引导组(n=30)和CT引导组(n=30)，分别在MR和CT引导下经皮穿刺至兔肝大血管旁将兔VX2肿瘤组织瘤块种植，评价肿瘤模型制作成功率、穿刺针显影情况、针尖周围血管显影情况、手术时间及安全性。结果MR引导组建模成功率为96.7%，仅1只出现针道转移，CT引导组建模成功率为80.0%，2只出现针道转移，3只肝脏其他部位出现转移灶，1只死亡原因不明，差异有统计学意义(P=0.044)。MR引导组20 G同轴穿刺针在T1加权像(T1 weighted imaging，T1WI)的伪影倍数为(7.26±0.38)倍，CT引导组20 G同轴穿刺针的伪影倍数为(2.51±0.57)倍，差异有统计学意义(P＜0.01)，但CT引导组13只(43.3%)穿刺针针尖周围出现星芒状低密度伪影，干扰肝内血管显影，差异有统计学意义(χ2=8.523，P＜0.01)。MR引导组手术时间明显较CT引导组长[(13.32±2.45) min vs. (8.42±1.46) min，P＜0.001)。CT引导组2只(6.67%)发生少量腹腔积液。两组均未见肝脓肿、黄疸及膈肌穿孔等严重并发症。结论相比CT引导，MR引导下经皮兔肝脏血管旁肿瘤种植是一种更有效的造模方法，虽然穿刺针伪影倍数大、手术耗时长，但是针尖周围血管显影清晰，并发症发生率低。

简介：摘要目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F分组＝4.776，P<0.05；F时间＝13.535，P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G0/G1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义(t＝9.971、-5.063，均P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义(t＝-7.245，P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝-23.254、-5.294、6.062，均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝5.521、8.270，均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义(t＝-14.456，P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义(t＝-4.458，P<0.001)。结论沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

简介：摘要目的探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只，其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型，分别在免疫前及免疫后第3、12、18天各取6只小鼠，流式细胞术检测各时间点小鼠脾脏、淋巴结和眼球中IL-17A+ γ干扰素(IFN-γ)+ CD4+ T细胞比例。取6只小鼠制作EAU模型，免疫后18 d采用小动物成像仪进行眼底拍照并行光相干断层扫描(OCT)检查。检查完成后处死小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法检测小鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变；取淋巴结行流式细胞术检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例，按照表达数量不同分为IL-17A+ IFN-γ+细胞高表达组和IL-17A+ IFN-γ+细胞低表达组，比较2个组小鼠视网膜损伤情况。取36只小鼠制作EAU模型，采用随机数字表法分成Anti-IL-12/IL-23 p40组和IgG组，每组18只，分别尾静脉注射Anti-IL-12/IL-23 p40和IgG，每3天1次。免疫后第12天和第18天每组各取6只小鼠，分别取淋巴结和眼球组织，采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例。免疫后第24天，每组各取6只小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法观察视网膜损害情况；采用流式细胞仪检测CD4+ T细胞体外诱导分化情况；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞诱导分化后IL-17和IFN-γ表达情况；采用实时荧光定量PCR法检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞诱导分化后Th1细胞转录因子T-bet和Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)相对表达量。结果免疫前和免疫后第3、12、18天，淋巴结、脾脏、眼球中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例总体比较差异均有统计学意义(H＝9.642、16.531、10.385，均P<0.05)，其中与免疫前相比，EAU小鼠免疫后第12天淋巴结IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例明显升高；免疫后第18天脾脏、眼球中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例明显升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。IL-17A+ IFN-γ+细胞高表达组小鼠视网膜严重水肿、视网膜脱离、重度炎性细胞浸润和广泛视网膜褶皱；IL-17A+ IFN-γ+细胞低表达组小鼠视网膜轻度水肿、局灶性炎性细胞浸润、轻度视网膜褶皱。Anti-IL-12/IL-23 p40组免疫后18 d，眼球中CD3和IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例低于IgG组，差异均有统计学意义(t＝15.304、8.080，均P<0.05)；免疫后12 d，Anti-IL-12/IL-23 p40组淋巴结中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例为(0.33±0.18)%，明显低于IgG组的(4.83±0.45)%，差异有统计学意义(t＝15.974，P<0.001)。与IgG组相比，Anti-IL-12/IL-23 p40组Th1、Th17、IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞百分比及IL-17、IFN-γ、T-bet、ROR-γt表达量明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Anti-IL-12/IL-23 p40可通过抑制IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞发挥对EAU的治疗作用。

简介：摘要目的探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞自噬和凋亡的调控作用。方法纳入2019年9月至2020年10月在西安医学院第一附属医院眼科收治的糖尿病性白内障(DC)患者30例为DC组，同期就诊的单纯白内障患者30例为单纯白内障组。2个组均行常规晶状体超声乳化及人工晶状体植入术，术中收集晶状体前囊膜组织。实时荧光定量PCR检测各组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p表达。体外培养人晶状体上皮细胞系HLEB3细胞，将其分为正常对照组、高糖组，分别于正常和高糖培养基中培养。根据生物信息学数据库预测原钙黏附蛋白17(PCDH17)与miR-23b-3p的靶向关系，双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系；取高糖培养的HLEB3细胞，分为miR-23b-3p拟似物组、阴性对照(NC)拟似物组、NC-siRNA组、PCDH17-siRNA组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组，分别转染相应试剂后实时荧光定量PCR法检测miR-23b-3p和PCDH17 mRNA表达；Western blot法检测哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化(p-)JNK、c-Jun、p-c-Jun、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2蛋白(Bcl-2)蛋白的表达；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果DC组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p相对表达量为0.35±0.15，明显低于单纯白内障组的1.00±0.09，差异有统计学意义(t＝44.627，P<0.01)；正常对照组、高糖组、高糖+NC拟似物组、高糖+miR-23b-3p拟似物组细胞中miR-23b-3p，LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量以及细胞凋亡率总体比较，差异均有统计学意义(F＝21.325、28.318、17.634、15.482、22.325、26.537，均P<0.01)；其中与正常对照组比较，高糖组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量下降，与NC拟似物组比较，miR-23b-3p拟似物组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；生物信息学和双荧光素酶报告基因实验结果显示，PCDH17是miR-23b-3p的靶基因，miR-23b-3p拟似物组中PCDH17 mRNA相对表达量较NC拟似物组显著降低(P<0.05)。与NC-siRNA组相比，PCDH17-siRNA组细胞凋亡率、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(t＝9.116、12.413、5.349、3.273、8.419，均P<0.01)。NC拟似物组、miR-23b-3p拟似物组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义(F＝24.724、19.319、23.418、17.562、20.263、15.249，均P<0.05)；其中与miR-23b-3p拟似物+Vector组比较，miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-23b-3p对高糖环境下HLEB3细胞具有保护作用，其机制主要是通过靶向PCDH17调控JNK信号通路抑制高糖诱导HLEB3细胞的自噬和凋亡。

简介：摘要目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)活化的作用及其可能的作用机制。方法收集9例9眼晚期原发性开角型青光眼患者小梁切除术中获取的结膜下Tenon囊组织，通过组织贴壁培养获得原代细胞，采用免疫荧光染色法(波形蛋白+角蛋白)进行细胞鉴定，取4~6代细胞进行后续实验。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测0~80 μmol/L EGCG干预条件下的细胞存活率。将细胞分为空白对照组、转化生长因子(TGF)-β1诱导组和EGCG干预组，分别于正常培养基、含10 ng/ml TGF-β1培养基以及含10 ng/ml TGF-β1+50 μmol/L EGCG培养基中培养。采用BrdU标记法检测各组细胞增生率，采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况，采用免疫荧光法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，采用Western blot法检测空白对照组、TGF-β1诱导组、10 μmol/L EGCG组和50 μmol/L EGCG组Smad2/3、p-Smad2/3、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果体外培养HTFs呈长梭形，生长规律，免疫荧光鉴定波形蛋白呈阳性。CCK-8检测显示，10、20、30、40、50 μmol/L EGCG处理细胞存活率与0 μmol/L EGCG处理细胞比较，差异均无统计学意义(均P<0.05)。BrdU标记实验显示，TGF-β1诱导组细胞增生率为(66.37±12.65)%，高于EGCG组的(14.75±12.33)%，差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验第3天，TGF-β1诱导组相对划痕面积为(47.33±12.22)%，明显低于EGCG干预组的(92.67±4.04)%，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，TGF-β1诱导组细胞α-SMA蛋白荧光较空白对照组显著增强，EGCG干预组α-SMA蛋白荧光则减弱至空白对照组水平。Western blot法检测结果显示，各组间细胞中p-Smad2/3、PI3K和p-Akt蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F＝58.820、121.153、69.289，均P<0.001)，其中TGF-β1诱导组p-Smad2/3、PI3K和p-Akt蛋白相对表达量明显高于空白对照组、10 μmol/L和50 μmol/L EGCG组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EGCG能够通过Smad通路及PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs活化。

简介：摘要目的研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮－间质转化(EMT)的作用及其机制。方法选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只，采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组，每组15只，分别给予生理盐水和驻景丸加减方连续灌胃7 d，以制备空白血清和含药血清。采用SD大鼠制备驻景丸加减方含药血清。将ARPE-19细胞分为正常对照组，模型对照组，空白血清组，2.5%、5.0%、10.0%含药血清组，SB216763组和SB216763+含药血清组；其中前2个组均于正常培养基中培养，后6个组分别于含空白大鼠血清培养基、相应浓度含药血清培养基、10 μmol/L GSK-3抑制剂SB216763培养基以及10 μmol/L SB216763+10.0%的含药血清培养基中培养；正常对照组常规培养，其他各组先常规培养24 h，后加入终浓度200 μmol/L的H2O2继续培养24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性；Transwell法检测细胞迁移能力；DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)含量；硫化巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量；Western blot法检测细胞中Nrf2通路相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和EMT相关蛋白转化生长因子β2(TGF-β2)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、snail家族锌指转录因子1(SNAIL1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果空白血清组、2.5%、5.0%、10.0%组细胞存活率总体比较差异无统计学意义(F＝0.163，P>0.05)。正常对照组、模型对照组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组、10.0%含药血清组细胞存活率分别为(100.50±5.91)%、(60.87±4.30)%、(73.27±4.46)%、(80.73±5.67)%和(89.90±4.97)%，正常对照组、模型对照组、空白血清组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组和10.0%含药血清组细胞迁移数分别为(84.67±8.33)、(222.33±13.58)、(215.67±10.02)、(174.67±10.60)、(143.67±8.02)和(107.67±6.66)个/视野，总体比较差异均有统计学意义(F＝26.628、99.289，均P<0.01)。模型对照组细胞内ROS和MDA含量较正常对照组显著增加，差异均有统计学意义(均P<0.01)；各含药血清组细胞内ROS和MDA含量均较模型对照组显著减少，差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型对照组细胞内SNAIL1、α-SMA、TGF-β2、p-AKT及p-GSK-3β蛋白相对表达量明显多于正常对照组和各浓度含药血清组，E-cadherin蛋白相对表达量明显少于正常对照组和各浓度含药血清组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常对照组比，模型对照组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与模型对照组比，各含药血清组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型对照组相比，SB216763组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与SB216763组相比，SB216763+含药血清组细胞质Nrf2、SNAIL1和α-SMA蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2和E-cadherin蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论驻景丸加减方含药血清抑制H2O2诱导的ARPE-19细胞EMT，可能与AKT/GSK-3β通路的抑制及Nrf2信号通路的激活有关。

简介：摘要目的探讨注射用核糖核酸Ⅱ（简称：核糖核酸Ⅱ）与化疗药物环磷酰胺（CTX）联合对肉瘤细胞S180荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及对小鼠生存的影响。方法分别建立肉瘤细胞S180实体移植瘤小鼠模型和腹腔积液瘤小鼠模型。将CTX（25 mg/kg，1次/2 d）单独或联合低剂量（25 mg/kg，1次/d）、中剂量（50 mg/kg，1次/d）核糖核酸Ⅱ腹腔注射实体移植瘤小鼠10 d，将CTX（25 mg/kg，1次/2 d）单独、中剂量（50 mg/kg，1次/d）或高剂量（100 mg/kg，1次/d）核糖核酸Ⅱ单独或联合CTX（25 mg/kg，1次/2 d）腹腔注射腹腔积液瘤小鼠至全部死亡，两模型均设未经药物处理的模型组，各组小鼠均为8只。对于实体移植瘤小鼠，给药后称量体质量，测量活体肿瘤体积，处死小鼠后取肿瘤组织并称量其质量，计算抑瘤率。对于腹腔积液瘤小鼠，给药后称量体质量，计算体质量增长率，绘制各组生存曲线，计算生命延长率。结果（1）实体移植瘤小鼠：给药后各给药组小鼠体质量均低于模型组。给药期间，模型组活体肿瘤体积均远超各给药组；给药第8天起，CTX组活体肿瘤体积开始大于两个联合给药组。给药结束处死小鼠后称量显示，各给药组肿瘤质量均低于模型组（均P<0.01），CTX+核糖核酸Ⅱ低剂量组和CTX+核糖核酸Ⅱ中剂量组的肿瘤质量均低于CTX组（均P<0.05），两组抑瘤率均高于CTX组（83.6%、77.2%比58.5%）。（2）腹腔积液瘤小鼠：给药12 d后，CTX组小鼠体质量增长率迅速增加，达最高，两个联合给药组小鼠体质量增长率较其他各组均低。核糖核酸Ⅱ高剂量组与CTX组小鼠生命延长率分别为48.2%、53.2%，对生命延长作用相当；核糖核酸Ⅱ中剂量组小鼠生命延长率仅20.9%；CTX+核糖核酸Ⅱ中剂量组和CTX+核糖核酸Ⅱ高剂量组小鼠生命延长率分别达到94.2%、105.0%。结论核糖核酸Ⅱ联合CTX可明显延长肉瘤细胞S180荷瘤小鼠生存时间，提高抑瘤率，改善小鼠生命质量，二者具有协同增效作用。

简介：摘要目的将聚己内酯(PCL)薄膜与1，1′-双十八烷基-3，3，3′，3′-四甲基吲哚碳菁高氯酸盐(DiI)标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养，制备细胞补片。方法取1只清洁级SD大鼠作为实验对象，通过分离培养获得大鼠BMSCs，并进行流式细胞仪鉴定表面标志物。BMSCs培养至3代后，使用DiI染料对BMSCs标记，将DiI标记的BMSCs与PCL制成的薄膜共培养，24 h后在荧光显微镜下观察细胞生长情况，并固定进行电镜扫描，在培养的1、4、7、10 d分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD分析。结果BMSCs流式细胞术鉴定：CD90、CD44H强阳性，CD11b/c、CD45阴性。荧光显微镜下，可见DiI标记的BMSCs发红光，呈梭形或多边形。扫描电镜下，PCL薄膜与DiI标记的BMSCs共培养形成的细胞补片，其表面细胞数量多，细胞状态正常。CCK-8测定结果显示第1天吸光度(A)值为0.330±0.025；第4天A值为0.620±0.012，第7天A值为1.033±0.144，第10天A值为1.223±0.133。各时间点A值之间差异有统计学意义(F＝66.441，P<0.05)。结论PCL薄膜可以作为一种DiI标记示踪的支架材料，用于干细胞治疗。