简介：摘要目的研究新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)发生、发展中核转运蛋白KPNA2定位及表达的动态变化，探究其在早产儿BPD发病机制中的作用。方法采用85%的吸入氧浓度诱导新生SD大鼠BPD模型(n＝50)，对照组吸入空气(n＝50)，两组分别于1、3、7、10、14 d采集肺组织标本，分离、纯化及培养肺泡Ⅱ型上皮细胞。利用免疫组化、免疫荧光、Western blot及实时荧光定量PCR检测KPNA2的分布及表达。结果免疫组化可见KPNA2主要定位于肺泡上皮细胞的胞浆及胞核内，与对照组相比，BPD组1 d胞核、胞浆均表达增加，3～14 d胞核表达明显减弱，胞浆表达增强。细胞免疫荧光可见KPNA2在对照组1～14 d主要定位于细胞核，BPD组3～14 d主要定位于细胞浆，BPD组KPNA2核表达较对照组减弱，胞浆表达较对照组增强。KPNA2总蛋白及浆蛋白表达趋势基本一致，与对照组比较，BPD组1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，14 d仍高于对照组(P<0.05)；BPD组KPNA2核蛋白表达3 d开始降低(P<0.01)，持续降低至14 d(P<0.05)。与对照组相比，BPD组KPNA2 mRNA表达1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，至14 d仍高于对照组(P<0.05)。结论暴露于高氧中新生鼠KPNA2核转运功能障碍，可能是影响BPD肺泡上皮细胞DNA损伤应答早期启动的重要机制。

简介：摘要目的探讨突触后致密物-95(postsynaptic density-95，PSD-95)在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用。方法选择SPF级鼠龄7 d的SD大鼠54只，按照随机数字法分为3组：对照组(暴露于空气)、模型组(暴露于2.1%的七氟烷，4 h/d，连续3 d)、PSD-95抑制剂组(吸入七氟烷+腹腔注射NA-1，连续5 d)，每组18只。Morris水迷宫实验和新异物体识别实验检测各组大鼠的视空间学习记忆和识别记忆能力；RT-qPCR检测大鼠海马组织kalirin、Rac1和PSD-95的mRNA水平；Western blot检测大鼠海马组织kalirin、Rac1、PSD-95及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达；免疫组化检测海马组织kalirin和Rac1的表达水平。采用SPSS 23 .0软件对数据进行统计分析，采用重复测量方差分析、单因素方差分析进行组间比较。结果重复测量方差分析显示，在水迷宫实验中三组大鼠寻找平台潜伏期、游泳距离的组间和时间交互作用显著，均差异有统计学意义(F时间×组别＝36.539，41.548；均P<0.01)。简单效应分析显示，模型组中第2~6天的平台潜伏期及游泳距离均长于对照组(第2~6天平台潜伏期：t＝14.039，17.147，13.155，13.831，27.247，均P<0.01；第2~6天游泳距离：t＝10.122，20.987，7.267，10.011，8.121，均P<0.01)。与模型组比较，PSD-95抑制剂组大鼠在2~6 d的平台潜伏期延长(t＝7.948，14.768，11.582，12.832，24.346；均P<0.01)，游泳距离增加(t＝8.235，24.325，11.234，12.031，7.036；均P<0.01)。新物体识别实验发现，模型组中的新物体探索时间显著长于对照组[(21.30±2.27)s，(19.21±1.42)s，t＝1.843，P<0.01]，PSD-95抑制剂组中的新物体探索时间[(26.83±2.13)s]明显长于模型组(t＝4.844，P<0.01)。模型组中的新异物体差异指数显著低于对照组[(0.41±0.12)，(0.59±0.10)，t＝3.416，P<0.01]，PSD-95抑制剂组中的新异物体差异指数[(0.37±0.08)]明显低于模型组(t＝0.696，P<0.05)。qRT-PCR结果发现，模型组中的Rac1、kalirin和PSD-95 mRNA表达均低于对照组(t＝9.969，3.954，6.561；均P<0.05); PSD-95抑制剂组的Rac1、kalirin和PSD-95 mRNA表达均低于模型组(t＝2.132，2.251，3.502，均P<0.05)。免疫组化结果显示，模型组大鼠海马CA1区的kalirin和Rac1均低于对照组[kalirin：(8.18±1.94)，(15.47±3.35)，t＝11.47，P<0.01；Rac1：(3.72±1.53)，( 8.17±2.91)，t＝6.76，P<0.01]，PSD-95抑制剂组中的kalirin(4.98±1.53)和Rac1(2.73±0.37)均低于模型组[kalirin：t＝10.28，P<0.01；Rac1：t＝4.72，P<0.05]。Western blot检测发现，模型组中的Caspase-3和Bax蛋白水平均明显高于对照组[Caspase-3：(1.37±0.16)，(0.54±0.01)，t＝5.71，P<0.01；Bax：(1.87±0.31)，(1.23±0.25)，t＝12.01，P<0.01]; PSD-95抑制剂组中的Caspase-3[(1.79±0.17)]和Bax[(2.19±0.21)]蛋白水平明显高于模型组(t＝9.87，16.19，均P<0.01)；模型组中的Bcl-2蛋白水平明显低于对照组[(1.22±0.21)，(1.96±0.38)，t＝11.92，P<0.01]，PSD-95抑制剂组中的Bcl-2蛋白水平明显低于模型组[(1.01±0.19)，t＝10.73，P<0.01)]。结论七氟烷麻醉可致新生大鼠远期学习记忆功能损害和PSD95蛋白表达降低，抑制PSD95的表达可加重这种损害，这可能与PSD95参与的神经元突触可塑性和神经凋亡相关。

简介：目的探讨低剂量毒死蜱（chlorpyrifos,CPF）暴露对新生大鼠中脑黑质多巴胺能（DA）神经元发育和神经行为的影响。方法将出生后11dSprague-Dawley大鼠随机分为CPF组、二甲基亚砜（DMSO）组和生理盐水（NS）组。CPF组在大鼠出生后11～14d经腹部皮下注射低剂量（每日5mg/kg）CPF,其他两组分别注射DMSO和NS作为对照。在生后15d、20d、30d及60d四个时间点,观察大鼠体重增长、脑外观、脑系数和脑含水量变化;免疫组织化学方法检测黑质DA神经元酪氨酸羟化酶（TH）的表达;免疫透射电镜观察DA神经元亚细胞结构改变;生后30d和60d行旷场实验、握力实验、斜坡实验及Morris水迷宫实验检测大鼠神经行为变化。结果各组大鼠在各观察时间点体重增长、脑外观、脑系数、脑含水量未见异常。CPF组自生后30d开始与NS和DMSO组相比,不仅黑质TH表达进行性减少,部分DA神经元亚细胞结构发生改变,且逐渐出现活动减少,动作协调障碍及学习记忆能力受损。结论大鼠脑发育期暴露低剂量CPF,可诱导中脑黑质DA神经元迟发性进行性丢失,并影响大鼠远期运动和学习记忆能力。

简介：目的探讨盐酸氨溴索对高氧性肺损伤新生大鼠肺组织纤维化的干预作用。方法出生12h内的清洁级SD大鼠30只作为研究对象,随机分成3组（每组10只）：空气对照组（A组）、高氧组（B组）、高氧加盐酸氨溴索组（C组）。除A组外,B组和C组均建立高氧肺损伤动物模型。C组新生大鼠每天腹腔注射溶于9g/L氯化钠溶液中的盐酸氨溴索[20mg/（kg.d）],A、B组新生鼠每日腹腔注射等量9g/L氯化钠溶液,持续14d。第14d处死,取其肺组织切片,伊红染色法（HE）观察其肺组织病理变化;Masson三色染色图像定量分析计算其胶原纤维阳性面积百分比,酶联免疫分析法（ELISA法）测定肺组织Ⅲ和Ⅳ型胶原蛋白,判断其肺纤维化程度。结果B组第14天肺组织病理发现间质细胞增多,肺泡数目减少,肺组织出现纤维化改变;C组肺组织病理改变明显减轻。与A组比较,B组Ⅲ型胶原及Ⅳ型胶原表达明显增多,胶原纤维阳性面积百分比明显增高（P〈0.05）。C组与B组比较,Ⅲ型胶原及Ⅳ型胶原表达及胶原纤维阳性面积百分比明显下降（P〈0.05）。结论盐酸氨溴索早期干预可减轻高氧性肺损伤新生大鼠的肺组织纤维化程度。

简介：目的该研究探讨了高压氧（HBO）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠内源性神经干细胞（NSCs）的迁移与分化的影响。方法7日龄Sprague—Dawley新生大鼠随机分为对照组，模型组及HBO组。采用Rice—Vannucci方法制成HIBD模型。造模后3h内行HBO治疗。分别于HBO治疗后7d、14d、28d，采用Brdu／DCX，BrdU／β-tubulin，BrdU／GFAP和BrdU／O4免疫荧光双标法，用共聚焦显微镜动态检测侧脑室室管膜下区（subventrieularzone，SVZ）与大脑皮层内源性NSCs的迁移与分化。结果治疗后7d，HBO组损伤侧SVZ区BrdU^＋DCX^＋细胞数（84±21个／mm^2）增加，多于对照组（39±14个／mm^2）与模型组（68±17个／mm^2）（P〈0．05）；治疗后14d，SVZ区BrdU^＋DCX^＋细胞数减少，而皮层区BrdU^＋DCX^＋细胞数增加，HBO组明显多于对照组（P〈0．01）；治疗后28d，各组大脑皮层BrdU^＋DCX^＋细胞数减少，大脑皮层出现BrdU^＋β-tubulin^＋，BrdU^＋GFAP^＋，BrdU^＋O4^＋细胞。HBO组BrdU^＋β-tubulin^＋与BrdU^＋O4^＋细胞数显著高于对照组与模型组（P〈0．05）。结论高压氧可促进HIBD新生大鼠内源性NSCs迁移到大脑皮层并分化为成熟的神经细胞。

简介：目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后松果体内小RNA（miRNA）的差异表达,研究其在HIBD导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法将7日龄的新生Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为HIBD模型组和假手术组,根据Rice-Vannucci法制作HIBD模型,24h后分别取两组松果体组织,通过miRNA芯片检测及实时荧光定量PCR法（RT-PCR）筛选出HIBD后高表达的miRNA,测定其在各组织（肺、肠、胃、肾、大脑皮层、松果体组织）中的表达差异。利用RT-PCR技术分别测定两组在缺氧缺血后0、24、48、72h松果体中高表达miRNA及靶基因ClockmRNA的表达变化。结果miRNA芯片结果结合RT-PCR技术筛选出多个和HIBD相关的miRNA,其中miRNA-182表达差异明显。miRNA-182在松果体组织中高丰度表达。HIBD后24h、48hmiRNA-182的表达水平高于对应时间点的假手术组（P〈0.05）;与对应时间点的假手术组相比,HIBD后0hClockmRNA表达水平升高,48h时降低,72h后明显升高（P〈0.05）。结论miRNA-182可能参与了HIBD后昼夜节律紊乱的病理生理过程。

简介：摘要目的研究长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine upregulation gene 1，Tug1)在新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)模型中的表达，并从肺组织形态学及肺泡发育成熟度两方面探究长链非编码RNA Tug1与肺发育的相关性，为阐明BPD中肺发育障碍的病理机制奠定基础。方法采用高氧诱导新生SD大鼠制备BPD模型(氧浓度为85%，n＝40)，对照组为空气环境正常生长的新生SD大鼠(氧浓度21%，n＝40)。每组分别于生后1、3、7、14 d随机取10只采集肺组织样本。通过苏木精-伊红染色观察肺组织形态学改变，应用辐射状肺泡计数法(RAC)评估肺泡发育成熟度，利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肺组织中长链非编码RNA Tug1及血小板源性生长因子受体α(platelet derived growth factor receptor alpha，Pdgfra)的基因水平，用蛋白免疫印迹技术检测Pdgfra的蛋白表达情况。结果在对照组，Tug1及Pdgfra的mRNA表达随日龄增加呈递增趋势，且Tug1的表达与RAC值呈显著正相关(r＝0.648，P＝0.007)，与Pdgfra的mRNA表达呈正相关(r＝0.572，P＝0.021)，与Pdgfra蛋白表达也呈正相关(r＝0.755，P＝0.001)。模型组中，Tug1表达从7 d开始显著低于对照组(0.78±0.20比1.68±0.20，P＝0.04)，趋势持续至14 d；Pdgfra的mRNA表达从7 d开始显著低于对照组(1.04±0.25比1.62±0.37，P＝0.002)，趋势持续至14 d。Pdgfra蛋白表达在对照组随日龄增加呈递增趋势，模型组7 d开始显著低于对照组(1.04±0.13比1.62±0.09，P＝0.04)，趋势持续至14 d。结论长链非编码RNA Tug1与肺发育成熟度密切相关，其表达在正常发育肺组织中呈递增趋势，新生大鼠BPD模型肺组织中Tug1表达下调可能是BPD肺泡发育障碍的发生机制之一。

简介：摘要目的评价七氟烷后处理对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠远期脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法SPF级健康SD大鼠48只，7日龄，体重13～17 g，雌雄各半，采用随机数字表法分为3组(n＝16)：对照组(Sham组)、缺血缺氧性脑损伤组(HIBI组)和缺血缺氧性脑损伤组＋七氟烷后处理(HIBI＋S组)。采用结扎左颈总动脉方法制备缺血缺氧性脑损伤模型。于缺氧结束时即刻吸入2.5%七氟烷湿化混合气体30 min进行七氟烷后处理。于缺血缺氧性脑损伤模型制备后第29-34天进行Morris水迷宫实验。于缺血缺氧性脑损伤模型制备后35 d时，采用免疫组化法测脑白质MBP表达水平。结果与Sham组比较，HIBI组逃避潜伏期延长，目标象限停留时间缩短，穿越原平台次数减少，脑白质MBP表达下调(P<0.01或0.05)；与HIBI组比较，HIBI＋S组逃避潜伏期缩短，目标象限停留时间延长，穿越原平台次数增多，脑白质MBP表达上调(P<0.01或0.05)。结论七氟烷后处理减轻缺血缺氧性脑损伤新生大鼠远期认知功能障碍的机制可能与上调脑白质MBP表达有关。

简介：目的探讨氧化应激状态下，胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生大鼠神经细胞氧化损伤的保护作用。方法原代培养新生大鼠大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞，不同浓度H2O2（0-60μM）诱导氧化应激细胞模型，LDH法检测各种神经细胞损伤程度，MTT法检测各种神经细胞活力；不同浓度H2O2（0～80μM）诱导氧化应激神经元细胞模型，Westernblot检测IGF-1（25ng／mL）施加前后神经元细胞内Akt的磷酸化水平。结果与未经H2O2处理组相比，不同浓度H2O2处理细胞24h后，大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞损伤程度均有升高、细胞活力均有降低；但神经元变化更为显著，与少突胶质细胞和星形胶质细胞相比，差异有统计学意义（均P〈0.01）；不同浓度的H2O2处理大脑皮层神经元5min后，相比于未经H2O2处理组，可见Akt磷酸化水平呈H2O2浓度依赖性降低（均P〈0.01），而在上述处理基础上加入25ng／mLIGF-1后，IGF-1能够逆转低浓度H2O2导致的神经元细胞Akt磷酸化，与未经H2O2处理组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但是对高浓度H2O2导致的Akt磷酸化作用无明显效果，其磷酸化水平均低于未经H2O2处理组（均P〈0.01）；经不同浓度的H2O2处理1h后，再加入25ng／mL的IGF-1，IGF-1处理前后Akt磷酸化水平均已恢复至未经H2O2处理时的水平（均P〉0.05）。结论大脑皮层神经元对H2O2诱导的氧化应激损伤较其他神经细胞敏感；IGF-1对皮层神经元氧化应激损伤具有保护作用。

简介：摘要目的探讨内皮前体细胞（endothelial progenitor cell，EPC）来源外泌体对高氧诱导的新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（type Ⅱ alveolar epithelial cells，AECⅡ）损伤的干预作用。方法使用全外泌体分离试剂盒从大鼠EPC培养液中提取外泌体，将体外培养的新生大鼠AECⅡ分为对照组、高氧组、干预组。对照组为空气+5%CO2培养，高氧组为95%O2+5%CO2培养，干预组培养基中加入0.1 mg/ml EPC来源外泌体，并予95%O2+5%CO2培养。于2、4、6 d使用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测AECⅡ活力、流式细胞仪检测AECⅡ凋亡。结果透射电镜观察EPC培养上清中分离的外泌体均符合外泌体的形态学特征。Dil标记EPC来源外泌体后与AECⅡ共培养24 h，在荧光显微镜下可观察到AECⅡ胞浆中有Dil荧光，提示EPC来源外泌体可以被AECⅡ摄取进入胞浆。与对照组相比，高氧组AECⅡ活力受损，细胞凋亡增加，并且损伤程度随高氧时间延长而加重（P<0.001）。EPC来源外泌体干预组细胞损伤程度低于高氧组（P<0.001）。与对照组相比，干预组在高氧4 d、6 d时的细胞活力低于对照组（P值分别为0.029、0.005），在高氧6 d时的细胞凋亡高于对照组（P=0.007）。结论EPC来源外泌体干预可减轻高氧诱导对AECⅡ的损伤，但不能完全逆转损伤。

简介：摘要目的探索制备新型负压材料以构建大鼠全层皮肤缺损创面新生基质的可行性。方法采用实验研究方法。取负压治疗中常用的聚氨酯泡沫敷料，于扫描电子显微镜下观察其微观结构并测定其孔径（样本数为5）。分别以聚己内酯、聚丁二酸丁二醇酯（PBS）为原材料，采用熔体纺丝技术，以测得的聚氨酯泡沫敷料孔径为纺丝间距，分别以15、25、35 mm/s为纺丝速率制备聚己内酯负压材料和PBS负压材料，于扫描电子显微镜下观察制备的负压材料微观结构并测定其丝径，采用拉力试验机与复合材料试验机分别测定制备的负压材料和聚氨酯泡沫敷料的拉伸强度与拉伸模量（样本数均为5），以筛选后续制备负压材料的纺丝速率。将对数生长期的人皮肤成纤维细胞（Fb）分别与以筛选的纺丝速率制备的聚己内酯负压材料和PBS负压材料共培养，于共培养1、4、7 d，用活/死细胞检测试剂盒检测材料中细胞活性与黏附情况，用细胞计数试剂盒8法检测材料中细胞增殖水平（样本数为5）。于18只5~6周龄雌雄不限的SD大鼠背部各制备1个全层皮肤缺损创面，伤后即刻，将致伤大鼠按随机数字表法分为聚己内酯+聚氨酯组、PBS+聚氨酯组、单纯聚氨酯组（每组6只），用含相应成分材料覆盖创面，以-16.7 kPa负压进行持续负压吸引。分别于负压治疗7、14 d取每组3只大鼠，取创面组织与创面直接接触层材料（以下简称创面取材），行苏木精-伊红染色后观察肉芽组织生长及材料与创面结合情况，行Masson染色后观察胶原纤维沉积情况，采用免疫组织化学法检测并计数CD34、白细胞介素6（IL-6）阳性细胞。对数据行单因素方差分析、析因设计方差分析、LSD-t检验、Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验及Bonferroni校正。结果聚氨酯泡沫敷料微观上呈疏松多孔结构，孔径为（815±182）μm。以800 μm为后续负压材料制备中的纺丝间距。PBS负压材料与聚己内酯负压材料的微观结构均较为规则，层间垂直相通，纺丝连续且粗细均匀，但PBS负压材料纺丝较聚己内酯负压材料平直；不同纺丝速率下由同种原材料制备的负压材料微观结构无明显差别。以3种纺丝速率制备的聚己内酯负压材料的丝径相近（P>0.05），以25、35 mm/s的纺丝速率制备的PBS负压材料的丝径均明显小于以15 mm/s的纺丝速率制备的PBS负压材料（t值分别为4.99、6.40，P<0.01）。以3种纺丝速率制备的聚己内酯负压材料的拉伸强度、拉伸模量均相近（P>0.05）；以15、25 mm/s的纺丝速率制备的PBS负压材料的拉伸强度均明显小于以35 mm/s的纺丝速率制备的PBS负压材料（t值分别为9.20、8.92，P<0.01），拉伸模量均明显小于以35 mm/s纺丝速率制备的PBS负压材料（t值分别为2.58、2.47，P<0.05）。后续选用35 mm/s的纺丝速率制备聚己内酯负压材料，选用15 mm/s的纺丝速率制备PBS负压材料。共培养1、4、7 d，在聚己内酯负压材料和PBS负压材料中黏附生长的人皮肤Fb数随时间延长而增多，2种材料间比较无明显差别。共培养1、7 d，2种负压材料中人皮肤Fb增殖水平均相近（P>0.05）；共培养4 d，PBS负压材料中人皮肤Fb增殖水平显著高于聚己内酯负压材料（t=6.37，P<0.01）。负压治疗7 d，3组大鼠创面取材中材料均清晰可辨且均可见少量胶原纤维，单纯聚氨酯组大鼠创面取材中可见少量肉芽组织；负压治疗14 d，3组大鼠创面取材中均可见大量肉芽组织与大量胶原纤维，聚己内酯+聚氨酯组大鼠创面取材中材料与创面组织分辨不清。负压治疗7、14 d，单纯聚氨酯组大鼠创面取材中胶原纤维均较另外2组致密。负压治疗7 d，每400倍视野下，PBS+聚氨酯组大鼠创面取材中CD34阳性细胞数为（14.8±3.6）个，明显少于单纯聚氨酯组的（27.8±9.1）个（t=3.06，P<0.05）；IL-6阳性细胞数为60（49，72）个，明显多于单纯聚氨酯组的44（38，50）个（Z=2.41，P<0.05）。负压治疗14 d，每400倍视野下，PBS+聚氨酯组大鼠创面取材中IL-6阳性细胞数为19（12，28）个，明显多于聚己内酯+聚氨酯组的3（1，10）个与单纯聚氨酯组的9（2，13）个（Z值分别为2.61、2.40，P<0.05）。结论制备的聚己内酯负压材料和PBS负压材料生物相容性好，均可成功构建大鼠全层皮肤缺损创面新生基质，其中聚己内酯负压材料总体上优于PBS负压材料。

简介：目的应用缺氧动物模型比较纯氧环境（pureoxygenenvironment,POE,100%氧）与空气环境（roomairenvironment,RAE,21%氧）复苏对新生大鼠缺氧性大脑皮质神经元超微结构的影响。方法7日龄20只SD（SpragueDawley）乳鼠建立缺氧2.5h模型后,分为纯氧环境组（POE）和空气环境组（RAE）,每组再根据复氧后时间点分为2个亚组,即24h组和72h组,每亚组5只。按时间点取各组乳鼠大脑半球右侧额顶皮质行电镜样品制备,透射电镜观察。结果复氧各组均可见神经元、神经毡和细胞间隙水肿。RAE24h组神经元核膜结构不清,细胞器减少,线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂;粗面内质网扩张,常呈空泡状,核糖体减少;高尔基复合体囊泡扩张;溶酶体较多。RAE72h组细胞器改变同前,但类似凋亡的细胞核较多,坏死细胞亦较其他组多见。POE24h组病变较RAE24h组轻。POE72h组细胞内线粒体及粗面内质网较丰富,病变亦比RAE72h组轻。结论POE复苏较RAE复苏可更能缓解缺氧致神经元超微结构的损伤、减少细胞凋亡及减轻脑水肿。提示,纯氧环境对缺氧复苏后大脑皮质神经元有一定的保护作用,并表明本动物模型适合缺氧新生大鼠大脑皮质神经元研究。

简介：摘要目的探讨褪黑素对坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis，NEC）新生大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（nucleotide-binding oligomerization domain like receptor protein 3，NLRP3）及相关炎性因子的影响。方法36只新生SD大鼠随机分为对照组、NEC组及褪黑素组，每组12只。对照组与母鼠同笼，自由摄食，每日腹腔注射含磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）（360 μl/kg）及1%无水乙醇的生理盐水10 ml/kg。NEC组采用配方奶喂养+缺氧+冷刺激的方法诱导NEC，每日腹腔注射PBS（360 μl/kg）及脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）（30 mg/kg）；褪黑素组采用同样方法诱导NEC发生，每日腹腔注射褪黑素15 mg/kg及LPS 30 mg/kg。所有大鼠生后第7天处死，取回盲部肠组织进行病理学评分、TUNEL染色观察细胞凋亡、电镜观察细胞内超微结构，并用酶联免疫吸附法检测白细胞介素（interleukin，IL）18、IL-1β、IL-6 水平，Western-blot法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1（cysteine aspartic acid specific protease-1，caspase-1）蛋白表达水平。结果（1）HE染色显示NEC组大鼠肠壁绒毛损伤程度较重，大部分绒毛中部、根部断裂，部分隐窝无法识别、可见透壁坏死。褪黑素组肠壁绒毛损伤情况较NEC组轻。（2）对照组、NEC组及褪黑素组大鼠肠组织细胞凋亡数目分别为（13.6±1.1）、（95.0±9.2）、（37.2±6.5）个，NEC组高于对照组和褪黑素组（P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。（3）电镜下显示NEC组线粒体肿胀，脊结构排列紊乱，并出现部分脆性裂解现象；褪黑素组线粒体损伤情况较NEC组轻。（4）NEC组IL-18、IL-1β、IL-6表达水平最高，分别为（2.13±0.22）、（0.89±0.06）、（0.45±0.02） pg/ml；其次为褪黑素组，分别为（0.76±0.05）、（0.32±0.03）、（0.23±0.02） pg/ml；最低为对照组，分别为（0.55±0.08）、（0.27±0.04）、（0.17±0.03） pg/ml，NEC组高于对照组和褪黑素组（P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。（5）NEC组NLRP3及caspase-1蛋白表达水平最高，分别为0.92±0.14、1.13±0.12，其次为褪黑素组，分别为0.46±0.09、0.63±0.08，最低为对照组，分别为0.31±0.06、0.59±0.05，NEC组高于对照组和褪黑素组（P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论褪黑素可抑制NLRP3及IL-18、IL-1β、IL-6、caspase-1等相关炎性因子的表达，减轻新生大鼠NEC病变的严重程度。

简介：背景:目前研究虽已证实脐血间充质干细胞移植可促进神经功能的恢复,但其具体作用机制尚不明确。目的:观察人脐血间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的治疗作用,分析其可能的作用机制。方法:取10d龄新生SD大鼠(由川北医学院实验动物中心提供),置于6000m海拔高原低压环境模拟仓生活和运动(运动方式为在舱内游泳槽内进行为期15d的运动,60min/d),建立高原缺血缺氧性脑损伤模型。造模成功24h后,将60只大鼠随机分为移植组、模型组,移植组脑组织海马内注射DAPI标记的脐血间充质干细胞悬液,模型组以同样方法注射等量PBS;另取30只大鼠作为空白对照组,不建模不移植。细胞移植48h后,TUNEL法检测神经细胞凋亡,Westernblot法检测脑组织Caspase-3、p-Akt蛋白表达;细胞移植后21d,Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力;细胞移植28d后,ELISA法检测大鼠脑组织炎性因子表达,组织学观察脑组织病理变化。结果与结论:①TUNEL染色显示空白对照组仅见极少量凋亡细胞,模型组可见大量细胞凋亡,移植组细胞凋亡介于空白对照组与模型组之间,3组间细胞凋亡数量比较差异有显著性意义;②移植组脑组织Caspase-3蛋白表达明显低于模型组(P<0.05),p-Akt蛋白表达明显高于模型组(P<0.05);③Morris水迷宫实验测试结果显示,移植组大鼠逃避潜伏期与游泳距离均明显短于模型组(P<0.05);④与模型组比较,移植组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素10质量浓度明显降低(P<0.05),白细胞介素8质量浓度明显升高(P<0.05);⑤模型组大鼠海马区神经元水肿,核染色质结构不清,有空泡形成,室管膜细胞重度水肿;移植组大鼠海马区神经元水肿程度轻于模型组,核染色质结构不清,未见空泡形成;⑥结果提示,人脐血间充质干细胞可通过调控炎性因子的表达、抑制神经细胞凋亡来改善新生大�

简介：摘要目的探讨天麻素对新生大鼠缺氧缺血合并低血糖脑组织的保护作用。方法将天麻素注射液按1g/kg于制备模型后即刻干预，用放射免疫分析法测量新生大鼠脑组织中前列腺素TXB2，6-K-PGF1ɑ含量变化。结果缺氧缺血合并低血糖模型组脑组织中6-K-PGF1ɑTXB2含量显著增高，分别28.56±10.30（pg/mg.pr）,16.87±3.76(pg/mg.pr）P＜0.001。制备模型后即刻干预组（天麻组）脑组织中6-K-PGF1ɑ含量14.67±0.54（pg/mg.pr）差异明显，TXB2含量9.12±1.70（pg/mg.pr）与模型组有差异P＜0.01。结论天麻素对缺氧缺血合并低血糖脑组织TX及PG代谢方面有保护作用，早期干预尤为重要。

简介：摘要目的探讨PSD-95抑制剂ZL006对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)的作用及其发病机制。方法选取7日龄健康Wistar新生大鼠(80只)，随机将其分为正常对照组(20只)、假手术组(20只)、手术组(即HIBD模型组40只)。将手术组又随机分为ZL006治疗组(采用ZL006 10 mg/kg进行腹腔注射，20只)与非治疗组(20只)。于手术后第1天、第7天随机选取各组新生大鼠，通过氯化三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride)染色法观察脑组织梗死程度；通过蛋白印迹法监测损伤区域脑组织PSD-95蛋白表达；采用ELISA评价ZL006对HIBD大鼠氧化应激反应及抗氧化酶的影响。结果(1)术后第1天，非治疗组大鼠脑损伤最严重，ZL006治疗组脑梗死减少，术后第7天手术组仍可见少许梗死灶。(2)术后第1天，手术组PSD-95蛋白表达量显著高于正常对照组及假手术组(P<0.01)，ZL006治疗组低于非治疗组(P<0.05)；术后第7天，各组间PSD-95蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。(3)术后第1天，手术组4-羟基壬烯醛表达量显著高于正常对照组及假手术组(P<0.01)，且非治疗组高于ZL006治疗组(P<0.05)；术后第7天各组间4-羟基壬烯醛表达量差异无统计学意义(P>0.05)。(4)术后第1天，手术组中超氧化物歧化酶表达量显著低于正常对照组及假手术组(P<0.01)，且非治疗组低于ZL006治疗组(P<0.05)；术后第7天各组间超氧化物歧化酶表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论PSD-95可能参与了HIBD的早期发病过程，其抑制剂ZL006对新生大鼠HIBD可能存在神经保护作用。

简介：摘要目的研究雷珠单抗对脉络膜新生血管(CNV)模型大鼠视网膜氧化应激的作用及其机制。方法选取10周龄SPF级雄性SD大鼠60只，按照随机数字表法随机分为正常对照组、模型对照组、雷珠单抗组、转录因子核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385)组、雷珠单抗+ML385组，每组12只。除正常对照组外，其余各组以氪激光诱导CNV模型。雷珠单抗组、ML385组和雷珠单抗+ML385组分别玻璃体腔内注射1 μl雷珠单抗、ML385、雷珠单抗+ML385，模型对照组、正常对照组分别给予玻璃体腔内注射等体积生理盐水。脉络膜铺片法检测CNV面积；苏木精－伊红染色观察视网膜病理学变化；实时荧光定量PCR及Western blot检测视网膜组织中Nrf2、超氧化物歧化酶(SOD)、醌氧化还原酶(NQO1)mRNA及蛋白表达水平。结果模型对照组、ML385组和雷珠单抗+ML385组CNV面积分别为(23.01±1.52)×103、(30.23±2.01)×103和(18.56±1.85)×103 μm2，明显高于雷珠单抗组的(12.35±1.22)×103 μm2，雷珠单抗+ML385组CNV面积小于模型对照组和ML385组，ML385组CNV面积大于模型对照组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。苏木精－伊红染色结果显示，雷珠单抗组RPE－脉络膜－巩膜复合体结构损害程度较模型对照组轻；雷珠单抗+ML385组RPE－脉络膜－巩膜复合体结构损害程度较雷珠单抗组重，但较模型对照组轻；ML385组RPE－脉络膜－巩膜复合体结构损害较模型对照组严重。雷珠单抗组Nrf2、SOD和NQO1 mRNA及蛋白相对表达量均低于正常对照组，但高于模型对照组、ML385组和雷珠单抗+ML385组，且雷珠单抗+ML385组Nrf2、SOD和NQO1 mRNA及蛋白相对表达量高于模型对照组和ML385组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论雷珠单抗可抑制氪激光诱导的CNV生长，减轻RPE氧化应激损伤，其机制与Nrf2/ARE通路的激活有关。

简介：摘要目的评价内源性β-雌二醇在七氟烷麻醉致新生大鼠远期行为学异常中的作用。方法清洁级健康雄性新生SD大鼠45只，5日龄，体重10～15 g，采用随机数字表法分为3组(n＝15)：对照组(C组)正常笼内喂养，不接受麻醉；七氟烷组(S组)2.1%七氟烷麻醉6 h；福美司坦组(F组)麻醉前30 min皮下注射β-雌二醇合成抑制剂福美司坦2 mg/kg。C组和S组于麻醉前30 min皮下注射等量生理盐水。于出生后60 d时行高架十字迷宫(EPM)实验，出生后70 d时行前脉冲抑制(PPI)实验。结果与C组比较，S组EPM实验开放臂停留时间百分比降低，PPI实验前脉冲比降低(P<0.05)；与S组比较，F组EPM实验开放臂停留时间百分比升高，PPI实验前脉冲比增加(P<0.05)。结论内源性β-雌二醇参与了七氟烷麻醉致新生大鼠远期行为学异常的过程。

简介：目的观察不同剂量的外源性抗转化生长因子-β1（TGF-β1）抗体作用下，TGF-β1在新生SD大鼠高浓度氧（高氧，〉95％O2）致肺纤维化中的表达，了解不同剂量的外源性抗TGF-β1抗体在高氧致肺纤维化中的作用。方法将120只足月新生SD大鼠随机分为6组：空气对照组（Ⅰ组），高氧组（Ⅱ组），高氧＋抗TGF-β．抗体0．1mg·kg^-1组（Ⅲ组），高氧＋抗TGF-β1抗体0．2mg·kg^-1组（Ⅳ组），高氧＋抗TGF-β1抗体0．4nag·kg^-1组（V组），高氧＋抗TGF-β1抗体0．8mg·kg^-1组（Ⅵ组），每组20只。观察及检测高氧暴露3、7、14和28d各组大鼠肺组织病理改变以及TGF-β1免疫组化染色。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变，肺组织水肿、渗出、出血和肺泡间隔轻度增厚，14d时急性炎症减轻，而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性；28d时出现明显的胶原沉积，形成纤维化。Ⅴ、Ⅵ组3、7、14和28d时相点TGF-β1的表达明显减弱，与Ⅰ组差异无统计学意义；病理改变示早期有轻度炎症反应，14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成，未形成肺纤维化。结论新生SD大鼠连续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤。高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1，TGF-β1是与纤维化关系最密切的TGF-β亚型，可促进成纤维细胞分化、生长和增殖。高氧暴露时给予适当剂量外源性抗TGF-β1抗体可减轻新生SD大鼠急性肺损伤，从而减轻肺纤维化。应用外源性抗TGF-β1抗体干预对高氧致肺纤维化损伤有保护作用。

简介：目的：研究氧化槐定碱对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞调亡的影响。方法：以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。Hoechst33342和TUNEL染色法检测海马神经细胞凋亡,透射电子显微镜术观察凋亡细胞形态学变化,化学比色法测定海马神经细胞Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性,免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子CytochromeC、Caspase-3、Bcl-2、Bax和PARP-1的蛋白和mRNA的表达。结果：与正常组比较,损伤组Hoechst33342和TUNEL染色法显示神经细胞凋亡率明显升高;Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8活性显著提高;CytochromeC、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA水平明显上调,Bcl-2蛋白和mRNA水平明显下调,Bcl-2/Bax比率也明显下调。与损伤组比较,氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）可显著改善氧糖剥夺再灌注损伤所致的神经细胞凋亡的形态学变化,并降低神经细胞凋亡率;明显抑制Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性。氧化槐定碱治疗组（20mg/L）可明显抑制CytochromeC、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA表达,增强Bcl-2蛋白和mRNA的表达,使Bcl-2/Bax比率上升。结论：氧化槐定碱通过抗凋亡作用对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经细胞发挥保护作用。