简介:摘要目的探讨长链非编码RNA 钾电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录物1(Kcnq1ot1)通过调节miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞胰岛素分泌的作用机制。方法自2020年6至12月在中山大学附属第三医院招募初诊2型糖尿病(T2DM)患者25例,同时招募年龄匹配且无糖尿病的受试者21例作为对照组。收集受试者的年龄、体重指数(BMI),检测空腹血糖(FPG)和糖化血红蛋白(HbA1c),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清中Kcnq1ot1表达量,并分析其与FPG和HbA1c的相关性。12只5周龄雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为高脂饮食(HFD)组(n=6)和正常饮食(CD)组(n=6),喂养20周后,提取原代胰岛细胞RNA。将体外培养的Min6细胞分为牛血清白蛋白(BSA)组和棕榈酸(PA,400 μmol/L)组;按照是否转染Kcnq1ot1 siRNA分为si-NC组和si-Kcnq1ot1组;按照是否转染miR-92a-1-5p的模拟物或抑制剂分为:模拟物对照组、模拟物组、抑制剂对照组和抑制剂组;按照转染Kcnq1ot1/NC siRNA后是否加入抑制剂分为si-NC+抑制剂对照组、si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组、si-NC+抑制剂组和si-Kcnq1ot1+抑制剂组。采用qRT-PCR检测Kcnq1ot1、miR-92a-1-5p和胰岛素转录本1(Ins1)、胰岛素转录本2(Ins2)、胰岛素受体(Insr)、NK6同源盒蛋白1(Nkx6.1)、胰岛素受体底物1(Irs1)和神经生成素3(Ngn3)mRNA水平;Western blotting检测胰岛素和Insr蛋白表达水平;葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛素分泌水平;双荧光素酶报告基因实验验证Kcnq1ot1与miR-92a-1-5p之间的直接作用关系。各组间指标的差异比较采用独立样本t检验、方差分析,采用Pearson相关分析法分析受试者Kcnq1ot1表达量与FPG和HbA1c的相关性。结果T2DM患者血清中Kcnq1ot1的表达量较对照组显著下调(P<0.01),且Kcnq1ot1的表达量与FPG和HbA1c呈负相关关系(r=-0.52、-0.49,均P<0.05)。与CD组相比,HFD组小鼠胰岛中Kcnq1ot1表达量下调(P<0.001)。在Min6细胞中,与BSA组相比,PA组细胞中Kcnq1ot1表达量下调(P<0.01);与si-NC组相比,si-Kcnq1ot1组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低(P<0.05),且Ins1、Ins2、Insr、Nkx6.1、Irs1和Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低(P<0.05);与模拟物对照组相比,模拟物组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低(P<0.05),且Ins1、Ins2、Insr、Nkx6.1、Irs1和Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低(P<0.05);与抑制剂对照组相比,抑制剂组葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平升高(P<0.05),且Ins1、Ins2、Insr、Nkx6.1、Irs1和Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,模拟物和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后,Kcnq1ot1-WT荧光素酶活性降低(P<0.05);抑制剂和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后,Kcnq1ot1-WT的荧光素酶活性显著升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-Kcnq1ot1组miR-92a-1-5p表达升高(P<0.05);与si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组相比,si-Kcnq1ot1+抑制剂组Min6细胞中的Ins1、Ins2、Insr、Irs1和Ngn3转录水平及胰岛素和Insr的蛋白水平升高(P<0.05)。结论长链非编码RNA Kcnq1ot1可能通过靶向调控miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞功能。
简介:摘要 :随着经济和科技的不断发展,人们的生活水平越来越高,已经基本解决了温饱问题。因此,越来越多的人开始追求生活品质的提高,开始追求健康的身体和生活。为了获得健康的身体,提高免疫系统的免疫能力,人们开始密切的关注医学常识,关注养生理念,希望可以通过锻炼提高身体的素质。风湿免疫系统疾病是一种慢性疾病,也是一种全身性的疾病,容易受到血液的影响。血液系统如果受到侵害,那么风湿免疫系统也会出现问题。本篇文章主要围绕风湿免疫系统血液损害的临床治疗方法进行了研究,希望可以为相关工作着提供一些借鉴。
简介:摘要目的探讨5次跨膜蛋白(CD133)及POU3同源盒基因3相关长链非编码RNA(PANTR1)在乳腺癌中的表达特征及其与细胞体外增殖和侵袭能力的关系。方法将首都医科大学附属北京妇产医院乳腺科从2019年2月~2021年2月收治的50例乳腺癌患者纳入研究,分别采集乳腺癌组织以及癌旁正常组织,采用反转录聚合酶链反应(PCR)检测不同组织中CD133及PANTR1表达情况。此外,取MCF-7细胞分作对照组、CD133过表达组、PANTR1过表达组、CD133抑制组、PANTR1抑制组。分别予以Lipofectamine 2000转染,CD133过表达组予以Lipofectamine 2000以及CD133序列,PANTR1过表达组予以Lipofectamine 2000以及PANTR1序列,CD133抑制组予以Lipofectamine 2000以及si-CD133序列,PANTR1抑制组予以Lipofectamine 2000以及si-PANTR1序列。分析各组细胞增殖和侵袭能力的差异,Pum1及E2F3蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果乳腺癌组织CD133及PANTR1 mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(0.021±0.001比0.006±0.001、0.016±0.002比0.005±0.001,t=75.000、74.785,P<0.01)。转染24、48、72 h时CD133过表达组细胞增殖倍数高于对照组(3.05±0.26、5.40±0.48、10.74±1.27比2.17±0.25、4.38±0.42、6.97±0.84,t=4.226、2.783、4.298,P<0.05),且转染24 h侵袭细胞数高于对照组(75.29±7.19比54.01±6.27,t=3.865,P<0.05);转染24、48、72 h时PANTR1过表达组细胞增殖倍数高于对照组(3.11±0.28、5.45±0.51、10.05±1.24比2.17±0.25、4.38±0.42、6.97±0.84,t=4.372、3.003、3.570,P<0.05),且转染24 h侵袭细胞数高于对照组(76.03±7.26比54.01±6.27,t=3.977,P<0.01)。CD133过表达组细胞中Pum1及E2F3蛋白表达量均高于对照组(4.52±0.75、3.38±0.56比1.00±0.04、1.00±0.03,t=8.118、7.351,P<0.05);PANTR1过表达组细胞中Pum1及E2F3蛋白表达量均高于对照组(4.55±0.76、3.41±0.59比1.00±0.04、1.00±0.03,t=8.079、7.066,P<0.01);而CD133抑制组细胞中Pum1及E2F3蛋白表达量均低于对照组(0.45±0.02、0.37±0.03比1.00±0.04、1.00±0.03,t=21.301、25.720,P<0.01);PANTR1抑制组细胞中Pum1及E2F3蛋白表达量均低于对照组(0.47±0.03、0.38±0.02比1.00±0.04、1.00±0.03,t=18.360、29.784,P<0.01)。结论CD133及PANTR1在乳腺癌中均存在明显高表达,且可增强细胞体外增殖和侵袭能力,值得临床重点关注。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1靶向微小RNA(miR)-149-5p对于脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法采用Lipofectamine 2000进行细胞转染构建si-NEAT1组、过表达miR-149-5p组和miR-149-5p抑制组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率,双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1靶向调控miR-149-5p,Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数,蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达,组间比较采用t检验。结果人胶质瘤细胞U251中NEAT1水平(1.03±0.05)明显增加(t=13.613,P<0.01),而miR-149-5p(0.41±0.07)则是明显降低(t=12.111,P<0.01)。抑制NEAT1表达,si-NEAT1组细胞增殖抑制率明显增加[(29.48±2.67)%,t=13.809,P<0.01],而细胞迁移数[(35.33±7.57)个]和侵袭数[(27.33±6.81)个]则明显降低(t=4.395、4.962,P<0.05),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平明显降低(t=6.959、8.661,P<0.05)。过表达miR-149-5p,细胞增殖抑制率[(29.32±6.41)%]同样明显增加(t=6.922,P<0.05),细胞迁移数(35.67±6.51)和侵袭数(28.00±8.89)同样明显降低(t=4.392、4.471,P<0.05),p-Akt和p-mTOR水平明显降低(t=4.337、9.981,P<0.05)。NEAT1-WT活性受到miR-149-5p的抑制(t=15.251,P<0.01),转染pc-DNA-NEAT1能显著降低miR-149-5p(t=8.178,P<0.01),而转染si-NEAT1则明显上调miR-149-5p(t=5.988,P<0.05)。与si-NEAT1+抗NC组比较,si-NEAT1+抗miR-149-5p组细胞增殖抑制率表达明显降低(t=7.955、13.261,P<0.05),而迁移细胞数、侵袭细胞数、p-Akt和p-mTOR水平明显增加(t=4.841、3.784、5.589、4.572,P<0.05)。结论Lnc NEAT1靶向miR-149-5p调控Akt/mTOR信号通路可促进脑胶质瘤细胞增殖和转移,抑制miR-149-5p表达可逆转抑制Lnc NEAT1表达后对于脑胶质瘤细胞增殖和转移的影响。
简介:摘要:现如今,关于化妆品安全监督与群众安全消费需求持续升高,化妆品不良反应检测在减少化妆品上市风险方面发挥出重要作用。通过收集、整合、评估化妆品不良反应系统时,可掌握化妆品的安全程度,以免诱发化妆品质量问题,对使用者的身体安全带来不利影响。但是,我国对化妆品不良反应检测工作还处于初步探索时期,怎样提高报告数量和质量效率也是研究者深入思考的课题。医疗组织在我国化妆品不良反应检测信息采集中发挥着重要作用,医院实时记录的数据也为化妆品不良反应检测与研究提高重要参考依据。特别是医疗组织保存医疗实践中许多原始信息,可为上市后化妆品安全性研究提供数据保障。
简介:摘要目的运用独创的、全新的视力表对聋哑儿童的视力评估系统进行改良。方法本研究纳入2~11岁的聋哑儿童31名62眼,均未诊断过眼部病变。采用标准的Golovin-Sivtsev视力表(俄语:Таблица Головина-Сивцева)、全新的原创技术——Just Evident Images/Jonnazarov Eldor Ikhtiyorovich(缩写为JEI/JEI视力表)和集合卡进行视力检查。JEI/JEI视力表由13个不同大小的彩色视标组成,每行视标的宽度和高度相等,这些视标均为儿童甚至幼儿可以识别的物体。结果Golovin-Sivtsev视力表和JEI/JEI视力表测量右眼和左眼视力结果在16人和13人中一致,分别占51.6%和41.9%,在15和18人中存在差异,分别占48.4%和58.1%。在视力为0.1~0.4的儿童及视力为0.2~0.4的2~5岁儿童中,采用JEI/JEI视力表测得的视力较Golovin-Sivtsev视力表高。结论JEI/JEI视力表在聋哑儿童视力测量中具有临床实践前景。JEI/JEI视力表应用特殊卡片重复视标,可简化视力测量并提高有效性。
简介:摘要生理性起搏主要包括双心室起搏、希氏束起搏和左束支起搏,其中后两者统称为心脏传导系统起搏。与传统右心室起搏相比,生理性起搏可以减少心力衰竭和心房颤动的发生。希氏束起搏是最生理的起搏方式,但定位困难、操作难度高及长期安全性风险限制了其推广和应用。左束支起搏在保持生理性起搏的同时弥补了希氏束起搏的缺陷,成功率高,起搏参数良好,且安全性和临床疗效得到证实,目前已成为心脏生理性起搏的热点方式。本文回顾了心脏传导系统起搏的发展历程,解析关键技术和诊断标准,比较各种起搏方式的优缺点,深入讨论目前存在的问题及改进方法,并对未来发展方向进行展望。