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  • 简介:Galα(1,3)Gal(galepitope)isacarbohydrateepitopeandsynthesizedinlargeamountbyα(1,3)galactosyltransferase[α(1,3)GT]enzymeonthecellsoflowermammaliananimalssuchaspigsandmice.Humanhasnogalepitopeduetotheinactivationofα(1,3)GTgenebutproducesalargeamountofantibodies(anti-Gal)whichrecognizeGalα(1,3)Galstructuresspecifically.Inthisstudy,areplicationdeficientrecombinantadenoviralvectorAd5sGTcontainingpigα(1,3)GTcDNAwasconstructedandcharacterized.Adenoviralvector-mediatedtransferofpigα(1,3)GTgeneintohumantumorcellssuchasmalignantmelanomaA375,stomachcancerSGC-7901,andlungcancerSPC-A-1wasreportedforthefirsttime.ResultsshowedthatGalepitopedidnotincreasethesensitivityofhumantumorcellstohumancomplement-mediatedlysis,althoughhumancomplementactivationandthebindingofhumanIgGandIgMnaturalantibodiestohumantumorcellswereenhancedsignificantlyafterAd5sGTtransduction.AppearanceofgalepitopeonthehumantumorcellschangedtheexpressionofcellsurfacecarbohydratesreactingwithUlexeuropaeusI(UEAI)lectins,Viciavillosaagglutinin(VVA),Arachishypogaeaagglutinin(PNA),andGlycinemaxagglutinin(SBA)todifferentdegrees.Inaddition,noeffectofgalepitopeonthegrowthinvitroofhumantumorcellswasobservedinMTTassay.

  • 标签: 腺病毒载体 半乳糖转移酶 GAL α(1 3) Gao 基因表达
  • 简介:目的研究调控细胞程序性坏死(necroptosis)的关键分子———受体相互作用蛋白激酶3(receptorinteractingprotein3,RIP3)在甲型流感病毒H1N1PR8感染中的作用。方法用5.25×10^3半数组织细胞感染剂量(50%tissuecultureinfectivedose,TCID50)的流感病毒H1N1PR8通过滴鼻方式感染RIP3敲除(RIP3-/-)小鼠和野生型(WT)C57BL/6小鼠,连续14d每天称量小鼠体重,观察小鼠生存状态,并记录死亡情况。分别在感染后第3天(daypostinfection,d.p.i)和第7天处死解剖小鼠。取整个肺称重,左叶肺用4%多聚甲醛固定后进行HE染色,检测感染后肺组织的病理变化;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织病毒载量;流式微珠阵列术(CBA)检测肺匀浆上清中部分炎症相关细胞因子。结果5.25×10^3TCID50流感病毒感染后,各组小鼠均出现一定程度临床症状:RIP3-/-组小鼠感染后死亡率(50%)较WT组小鼠(87.5%)显著降低(P<0.05)。分别对比每天两组小鼠体重,发现从第3天开始,WT组小鼠的体重降低比率大于RIP3-/-组,但两组小鼠体重总体改变趋势无统计学差异。病毒学方面,两组小鼠在相同时间点(3、7d.p.i)病毒载量差异均无显著性。炎症应答方面:两组小鼠肺指数(肺重与体重比值)差异无显著性。病理方面:肉眼观察大体病理HE病理切片显示:RIP3-/-组小鼠肺组织损伤较轻,炎症浸润较少;小鼠肺部炎症细胞因子也较WT组相对减少。结论RIP3敲除的条件下,流感病毒H1N1PR8感染小鼠因减弱了炎症应答导致肺部病理损伤减轻,提示RIP3可能在H1N1PR8流感病毒感染中发挥促炎症病理作用。

  • 标签: 细胞程序性坏死 RIP3 流感病毒 炎症应答
  • 简介:概述了我国古今中药内的生物制药工程中唯一的固体发酵生产真菌药物的情况,以神曲、猴头菌槐耳菌质为代表说明由“制曲工艺”、“固体培养”到固体发酵的理念与工艺的变化与发展,从“普通型固体发酵”发展到“双向型固体发酵”的范例可推断分析古代制曲工艺在基质中应用中药材的作用,说明其貌似粗糙而可能有潜在深刻的内涵亟待整理发掘。现已存在建立固体发酵系列工程的可能性,更显示了中药宝库的丰富内容和菌物药的价值,对指导研发新真菌药物有一定理论与实际意义。

  • 标签: 固体发酵工程 药用真菌 真菌药物 发酵基质 营养基质 药性基质
  • 简介:目的观察急性高血糖影响小鼠第一相胰岛素分泌的功能及形态学变化特点。方法给C57/BL6J小鼠完成颈静脉插管后输注20%高糖溶液4h,建立急性糖毒性小鼠模型,行腹腔葡萄糖耐量实验(intraperitonealglucosetolerancetest,IPGTT)口服葡萄糖耐量实验(oralglucosetolerancetest,OGTT)评价葡萄糖耐量胰岛素分泌功能。HE染色电镜观察胰岛形态变化细胞内胰岛素分泌颗粒亚细胞结构变化。结果IPGTT实验中急性糖毒性组15min血糖值较对照组显著增加[(10.3±0.33)mmol/Lvs(19.3±1.66)mmol/L],上升87%(P〈0.05),OGTT实验中30min血糖值较对照组显著增加[(9.8±0.31)mmol/Lvs(18.16±1.01)mmol/L],升高85%(P〈0.05),且早期胰岛素分泌高峰受损且分泌延迟。GSIS实验中急性糖毒性组在基础状态(葡萄糖浓度2.8mmol/L)和高糖(16.7mmol/L)刺激后,胰岛素分泌较对照组显著降低[(0.481±0.003)ng/mLvs(0.702±0.121)ng/mL,(2.43±0.03)ng/mLvs(4.07±0.34)ng/mL],分别下降46%和67%(P〈0.05);胰岛素含量测定结果显示,急性糖毒性组比对照组降低[(97.01±2.05)ng/mLvs(65.12±0.42)ng/mL,(121.40±0.58)ng/mLvs(62.7±0.48)ng/mL],下降49%和94%(P〈0.05)。HE染色显示急性糖毒性胰岛边界不规则、内部细胞排列不整;透射电镜可见细胞内胰岛素分泌颗粒空泡,线粒体嵴断裂。结论急性葡萄糖毒性使胰岛β细胞内胰岛素储备减少,导致第一相分泌胰岛素峰值降低延迟。

  • 标签: 胰岛 急性高血糖试验 糖耐量试验 胰岛素分泌 组织学 超微结构
  • 简介:刘教授是我的老师。从1960年学校创立至1987年他退休离开生理教研室,我在他的指导下工作已有三十个年头了。其实,既使他离开了生理教研室,我们还是经常能聆听到他的教诲,受到他的鼓励和支持,有机会随时向他请教。这样算来,我们之间的师生情谊已有四十年了。四十年的漫长时日,他倾心传授了他的一切,他的科学思想和工作作风,

  • 标签: 教学科研工作 老师 生理学 生理教研室 工作作风 科学思想
  • 简介:报道1例55岁男性农民,因右小腿溃疡4个月余就诊。取其溃疡组织作真菌培养和病理检查,真菌培养在含氯霉素、放线菌酮和不含氯霉素、放线菌酮的沙堡弱培养基中27℃都长出白色棉絮状菌落,而在不含氯霉素、放线菌酮条件下生长更好;在马玲薯培养基中长出镰刀状大分生孢子,菌种鉴定为茄病镰刀菌。8d后从溃疡处再取标本培养仍为茄病镰刀菌生长。病理切片经银染色后发现念珠状分隔菌丝,用透射电镜对病变组织内的菌体形态进行了超微结构研究。予伊曲唑口服治疗,但患者未复诊而失访。

  • 标签: 茄病镰刀菌 溃疡 超微结构
  • 简介:目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。

  • 标签: 1型人免疫缺陷病毒 包膜蛋白gp41 抗原表位 斑点杂交 亲和层析
  • 简介:目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1-/-小鼠)的生长繁殖血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法(1)选取077日龄Npc1-/-、Npc1+/-和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1-/-小鼠由Npc1+/-小鼠交配繁殖产生,统计Npc1+/-小鼠连续4代的繁殖数据;(3)检测60日龄Npc1-/-和Npc1+/+小鼠的血液生理生化指标。结果(1)Npc1-/-小鼠的体重在7周随着日龄的增加而增加,7周后随着日龄的增加而减少,直至11周左右死亡。Npc1+/+和Npc1+/-小鼠的体重均随着日龄的增长而逐渐增加,两者之间并没有显著差别。4周后雄性比雌性体重增加明显比雌性小鼠快;(2)Npc1+/-小鼠不同代内交配分娩间隔、窝产仔数、离乳仔数、离乳仔数中雌雄数量阳性数量差异无显著性(P〉0.05),而第2代的离乳率明显大于第1代(P〈0.05);(3)Npc1-/-和Npc1+/+小鼠血液生理指标中平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均过氧化物酶指数(MPXI)差异有显著性(P〈0.05),其余差异无显著性(P〉0.05)。生化指标中尿素(UREA)差异有极显著性(P〈0.01),而天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(GLU)、乳酸脱氢酶(LDH)、钾(K)和铜(Cu)等差异有显著性(P〈0.05),其余差异无显著性(P〉0.05)。结论(1)Npc1-/-、Npc1+/-和Npc1+/+小鼠的生长曲线因基因型和性别的不同而存在差异;(2)Npc1+/-小鼠不同代的繁殖能力差异无显著性;(3)Npc1-/-和Npc1+/+小鼠的部分血液生理生化指标差异有显著性。

  • 标签: C1型尼曼-匹克病 小鼠 生长曲线 繁殖 血液参数
  • 简介:匍柄霉属(Stemphylium)是重要无性丝孢真菌类群,多数种菌难以诱导产生适宜形态学分类研究的分生孢子。以新西兰匍柄霉(Stemphyliumeturmiunum)为材料,经适宜培养后(PDA培养基,25℃培养3—4d),将双玻片斜插入生长适量菌丝的平板,延续培养3—4周后,进行玻片制作和显微描述,结果发现双玻片插诱导培养处理后,匍柄霉种菌易产生充分发育的产孢细胞、产孢梗适量的无性分生孢子。该技术方法简便易行,避免了选择性培养基诱导产生的缺陷,适宜于匍柄霉及其近似属若干难以产生无性分类特征的分类研究,为系统开展该类真菌系统分类研究提供技术借鉴。

  • 标签: 双玻片插片法 新西兰匍柄霉 分生孢子 菌丝挑取制片法
  • 简介:目前,生产转基因动物的难度很大,成功率很低,这是因为制备转基因动物的主要方法是向受精卵原核中注射DNA。这种方法有其弱点,首先作为外源基因受体细胞的受精卵数量有限;其次外源基因的整合和表达的筛选工作不能在细胞水平上进行,只能在子代动物出生后,即在个体水平上进行选择,这就增加了工作量,而且周期长,成功率低,成本大,在大动物上实施起来尤其困难。这就要求我们找到一种更为有效而又简捷的转基因动物的制备方法。利

  • 标签: 精原干细胞 转基因动物 体内转染 外源基因 小鼠 曲细精管
  • 简介:目的:研究雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎(RA)的临床疗效对血清炎症因子的影响。方法:选取2014年1月-2015年8月我院收治的RA患者60例,按治疗方法的不同分为观察组和对照组各30例,观察组应用雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗,对照组单纯应用甲氨蝶呤治疗,对比两组的临床疗效治疗前后临床症状、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)类风湿因子(RF)水平。结果:观察组的总有效率为93.33%,明显高于对照组的73.33%(P〈0.05);治疗后观察组的临床症状(晨僵时间、关节压痛肿胀数、关节疼痛度肿胀指数)均较对照组明显改善(P〈0.05);治疗后两组血清ESR、CRP、RF水平均降低,且观察组明显低于对照组(P〈0.05);观察组不良反应率为13.33%,低于对照组的10.00%,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗RA能够有效控制炎症反应,改善临床症状,临床疗效显著,且不增加副反应,是一种安全可靠的联合治疗方案,值得推广应用。

  • 标签: 类风湿关节炎 雷公藤多苷片 甲氨蝶呤 炎症因子
  • 简介:目的:观察美常安对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者临床症状胰岛素抵抗(IR)的作用。方法:选取2009年4月至2013年3月我院收治的88例NAFLD患者,随机分为治疗组和对照组。对照组给予基础治疗,治疗组在对照组的基础上,加用美常安胶囊进行治疗。比较两组疗效治疗前后两组血清谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平,并分析血浆D乳酸、TNF-α、内毒素与HOMA-IR的相关性,观察两组不良反应情况。结果:治疗组治疗有效率为52.3%,明显高于对照组的29.5%(P〈0.05)。治疗后治疗组ALT、TG、HOMA-IR下降幅度,均明显优于对照组(P〈0.05)。治疗后治疗组患者血浆D乳酸、TNF-α、内毒素水平明显低于对照组(P〈0.05),且治疗组患者HOMA-IR与患者血浆D乳酸、血清TNF-α、内毒素水平呈正相关(r=0.352,0.44,0.48;均P〈0.05)。不良反应发生率低,且两组不良反应发生率无显著差异(P〉0.05)。结论:美常安治疗NAFLD疗效显著,可降低ALT、TG水平,降低肠道通透性,改善肠源性内毒素血症,改善IR,且安全性较高。

  • 标签: 美常安 非酒精性脂肪性肝 胰岛素抵抗 TNF-α 血浆内毒素
  • 简介:通过1例16岁女孩由申克孢子丝菌导致的皮下孢子丝菌病,口服伊曲唑治疗有效,回顾申克孢子丝菌的实验室检验方法,以此来提高孢子丝菌感染的诊断水平。

  • 标签: 申克孢子丝菌 孢子丝菌病 伊曲康唑
  • 简介:报道1例慢性皮肤黏膜念珠菌病。患者女,16岁。1岁开始发病,持续存在口腔、皮肤、甲板损害,真菌镜检阳性,真菌培养为白念珠菌,皮损组织病理为感染肉芽肿改变,在角质层中可见大量真菌菌丝,内分泌功能和免疫学检查未见明显异常。口服伊曲唑治疗有效。

  • 标签: 慢性皮肤黏膜念珠菌病 白念珠菌 伊曲康唑
  • 简介:SomerecentstudiesindicatedthatGABAergicsystemisinvolvedinmammalianspermacrosomereaction(AR),butdirestevidencepertainingtotheexpressionofgatlinmammalianspermisnotyetdemonstrated.Inthisstudy,weevaluatedthepresenceof67kDaGAT1proteinandmRNAinrattestisbyWesternblottingandreversetranscription-polymerasechainreaction.Meanwhile,immunohistochemicalandimmunofluorescentanalysesalsoidentifiedGAT1proteinontheelongatedspermatidandsperm.Theseresultsindicatedthatrattestisisanovelsiteofgatlexpression.FurtherstudiesshouldbetakentoexploretheroleofGAT1proteinonspermacrosomereaction.

  • 标签: 大鼠 精子 睾丸 GAT1 表达 GABA
  • 简介:以便学习TGF-beta1的结构功能细节,重组体老鼠TGF-beta1的成熟形式在细菌被表示。TGF-beta1(氨基酸279-390)的112氨基酸的carboxyl终端部分的合成被一个可诱导的基因表示系统基于抗菌素T7RNA控制。这个系统允许重组体TGF-beta1的活跃、选择的合成。在减少条件下面在SDS-polyacrylamide胶化上决定的表示TGF-alpha1单体的分子量是大约13kD。连续净化洗与纯化步是足够的净化表示产品到同质的单个胶化过滤结合了。氨基终端的定序表明重组体蛋白质的N终端与出版数据相同。在西方的污点分析,重组体多肽对polyclonalTGF-beta1抗体显示出优秀antigenicity。在这研究表示的成熟重组体老鼠TGF-beta1提供一个有用工具因为未来详细说明了结构、功能的研究。

  • 标签: 转化生长因子-β1 重组表达 包涵体 提纯 抗原性
  • 简介:昆虫是在勘探让新奇的可加水分解纤维素的酶从lignocellulosic生物资源改进乙醇燃料的生产的一个大部分未开发的资源。lignocellulosic乙醇生产的费用被期望在一个单个过程由纤维素降级(saccharification)和产生葡萄糖的发酵的联合减少到乙醇,由Saccharomycescerevisiae转变了表示有效绗维素酶的酵母催化。当时S。cerevisiae是一个确定的heterologous表达式系统,昆虫的功能的表达式上没有可得到的数据为这种的可加水分解纤维素的酶。为了探讨这知识,豁开,S。cerevisiae被转变表示从红面粉甲壳虫编码endoglucanase的全身的cDNA,Triboliumcastaneum(TcEG1),并且评估了转基因的产品(rTcEG1)的活动。在S的TcEG1cDNA的表示。cerevisiae在强壮的glyceraldehyde-3磷酸盐脱氢酶倡导者控制下。有教养的转变酵母作为功能的β-1,4-endoglucanase分泌了rTcEG1蛋白质,它允许transformants在作为唯一的可得到的碳来源包含纤维素的选择媒介上幸存。为分泌rTcEG1的底层特性的评估表明了endoglucanase活动,尽管某活动也对复杂纤维素底层被检测。与在生产rTcEG1活动与pH条件增加了的biofuel的使用潜在地相关,与在pH检测的最高的活动12。我们的结果在S为昆虫绗维素酶的功能的生产表明潜力。cerevisiae并且在强壮的碱的环境证实rTcEG1活动的稳定性。

  • 标签: 内切葡聚糖酶 酿酒酵母 赤拟谷盗 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 选择性培养基 纤维素酶
  • 简介:1临床资料患者男,60岁,农民。左下肢皮肤瘢痕、斑块11a。11a,不慎跌倒擦伤左膝下方皮肤,局部溃烂长期不愈。口服抗生素,外用碘伏,红霉素软膏治疗后无效,当地医院按真菌感染先后予口服伊曲唑,氟康唑,特比萘芬不规则治疗,期间皮损大部分愈合形成瘢痕。其后瘢痕逐渐扩大并时有疼痛。后又在当地医院按“瘢痕疙瘩”予复方倍他米松注射液局部封闭治疗2次,瘢痕未缩小却在边缘渐出现红色斑块,肿胀并有浸润。遂来我院就诊

  • 标签: 着色芽生菌病 裴氏着色霉 治疗
  • 简介:Thereareabout17chromosomesinyeastSaccharomycescerevisiae.Amiddlesizedchromosome,chromosomeV,waschoseninthisworkforstudyingandconstructingthephysi-calmaps.ChromosomeVfromstrainA364awasisolatedbypulsed-fieldgradientgelelectrophoresis(PFGE).GelslicescontainingchromosomeVDNAweredigestedwithtworarecuttingenzymes,NotⅠandSfiⅠ,andthree6-Ntrecognizingenzymes,SmaⅠ,SstⅡandApaⅠ.Severalstrategies-partialorcompletedigestions,digestionwithdifferentsetsoftwoenzymes,andhybrid-izationwithclonedgeneticallymappedprobes(CAN1,URA3,CEN5,PRO3,CHO1,SUP19,RAD51,RAD3)——wereusedtoaligntherestrictionfragments.Thereare9,9,15,17,and20sitesforNotⅠ,SfiⅠ,SmaⅠ,SstⅡandApaⅠrespectivelyinthemapoftheA364achromosomeV.Itstotallengthwascalculatedtobe620Kb(Kilo-bases).Thedistributionsofthecuttingsitesforthesefiveenzymesthroughthewholechromosomearenotuniform.Acomp-arisonbetweenthephysicalmapandthegeneticmapwasalsomade.

  • 标签: YEAST chromcsome V macro-physical map DNA
  • 简介:1资料与方法1.1临床资料患者男27岁,屠宰厂工人。1996年3月右小腿伸侧无明确诱因出现2个圆形暗褐色斑疹.皮疹表面干燥,并覆有细薄糠秕状鳞屑.充满整个圆形斑.不易剥脱。曾在当地医院诊治.考虑为体癣,给予小剂量伊曲唑并用一此外用药(药品不详)间歇治疗近2年。

  • 标签: 体癣 正圆形 病例报告