简介:摘要目的探讨DNA损伤修复因子DNA损伤特异性结合蛋白1(DDB1)在肝癌组织中的表达情况及DDB1基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞DNA损伤修复和靶向杀伤作用的影响。方法利用UALCAN平台对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中肝细胞肝癌组织(371例)和癌旁组织(50例)中DDB1的表达情况及DDB1表达与肝癌患者总生存的相关性进行生物信息学分析。向SMMC-7721细胞转染靶向DDB1的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,分别为DDB1沉默组和阴性对照组。用X线照射诱导两组细胞外源性DNA双链断裂(DSB)损伤,采用免疫荧光染色(γH2AX用于评估DSB损伤情况,RPA32s33和Rad51用于评估同源重组修复情况)和蛋白质印迹法(检测RPA32s33蛋白水平)分析DDB1基因沉默对细胞DSB损伤修复的影响。采用姐妹染色体交换(SCE)实验分析DDB1沉默组和阴性对照组细胞同源重组SCE频率。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析PARP抑制剂奥拉帕尼(10 μmol/L)、顺铂(1 μg/ml)及二者联合杀伤DDB1沉默组和阴性对照组SMMC-7721细胞的效果。结果生物信息学分析发现,肝癌组织DDB1 mRNA水平较癌旁组织高(P<0.001),DDB1高表达患者总生存较DDB1低表达患者差(P=0.029)。X线照射后培养24 h,阴性对照组细胞γH2AX灶点已大多消退,DDB1沉默组细胞仍较多[每个细胞中(5.1±2.0)个比(13.4±2.0)个,t=-5.08,P=0.007]。X线照射后培养4 h,阴性对照组RPA32s33灶点数[每个细胞中(30.8±5.0)个比(13.2±1.6)个]和Rad51灶点数[每个细胞中(19.5±1.8)个比(8.3±3.3)个]均高于DDB1沉默组,两组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。阴性对照组SCE频率高于DDB1沉默组[(21.2±3.0)%比(11.2±1.6)%,t=5.07,P=0.007]。MTT法检测显示,奥拉帕尼作用后,DDB1沉默组细胞的存活率低于阴性对照组[(40.3±3.6)%比(79.8±1.3)%,t=17.94,P<0.001],奥拉帕尼联合顺铂时,两组细胞存活率均进一步降低,且DDB1沉默组细胞存活率低于阴性对照组[(10.2±2.8)%比(29.6±3.4)%,t=7.72,P=0.002],顺铂单独作用时,DDB1沉默组和阴性对照组细胞存活率差异无统计学意义[(41.9±5.1)%比(49.8±3.3)%,t=2.71,P=0.054]。结论DDB1在肝癌组织中高表达,可能是肝癌治疗抵抗和预后较差的重要因素。敲低DDB1基因表达能促进肝癌SMMC-7721细胞对PARP抑制剂的敏感性,其机制很可能与DDB1沉默引起SMMC-7721细胞的同源重组修复缺陷有关。
简介:【摘要】课堂教学源于教材,教材是教学的素材,是教师教和学生学的材料,教师如何“用教材来教”,如何在教学过程中“用好教材”,还要以教师在教学过程中对学生学习现状与进程的把握为决策依据。新课程主张“用教材教”,新课程标准也强调教师不应只是被动的课程执行者,而应成为课程的开发者、决策者和创造者。
简介:企业重纽是社会经济转型过程中的一种普遍现象,通过重纽,使得企业的生产资料、生产技术等生产要素和生产资源实现了有机整合,从而推动了企业的专业化经营发展进程,极大地增强了企业的核心竞争力。在企业重组实现资源有效整合的同时,重组各个企业的企业文化,员工思想也要相互融合,只有这样才能够完成企业重组的华丽转身。单凭生产资料等生产要素实现重组,那只不过是形式上的重组而已,要达到形式和内在的全面重组,就必须将员工思想与企业重组同步推进,融为一体。本文从企业重组的经济现象说起,通过分析重组企业员工的思想行为状态和对企业发展的影响,更深层次地分析企业重组应如何实现思想融合的具体途径。