简介：

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

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简介：1题目人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图2所示。

简介：

简介：摘要目的探讨自噬介导的乙型脑炎重组DNA疫苗对BALB/c小鼠体内树突状细胞(dendritic cells，DCs)免疫相关功能的影响。方法取健康BALB/c雌性小鼠，随机分配成5组，分别用pcDNA3.1(＋)空载体、pJME质粒、pJME-LC3重组质粒肌注免疫小鼠，并使用无菌PBS肌注作为空白对照组，乙型脑炎减毒活疫苗腹腔注射作为阳性对照组，免疫注射共3次，每次间隔2周，末次免疫2周后无菌取小鼠脾脏，研磨后从单细胞悬液中分离DCs，使用免疫荧光技术观察重组质粒在DCs中的表达水平；利用流式细胞术检测DCs表面主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complex Ⅱ，MHCⅡ)的表达水平以及小鼠脾脏DCs摄取FITC-Dextran后的平均荧光强度；CCK8法检测分析不同免疫组DCs对同种异体小鼠脾脏淋巴细胞的刺激增殖效果。结果相对于其他免疫组，pJME-LC3实验组大量DCs胞质中可见质粒编码蛋白表达；pJME-LC3实验组免疫鼠脾脏DCs摄取FITC-Dextran的能力明显强于其他免疫组(P<0.05)；pJME-LC3组小鼠成熟DCs表面MHCⅡ分子的表达水平明显升高(P<0.05)；进一步研究发现pJME-LC3组小鼠脾脏DCs对同种异体小鼠脾脏淋巴细胞刺激增殖能力高于其他免疫组(P<0.05)。结论pJME-LC3重组质粒可以促进免疫鼠脾脏DCs抗原提呈以及刺激淋巴细胞增殖的能力，提示自噬介导的乙型脑炎重组DNA疫苗可能通过影响BALB/c小鼠DCs功能促进免疫效应。

简介：目的：探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME—BOOST免疫程序免疫增强效果。方法：用EcoRI、XhoI和EcoRI、SalI分别双酶切PVAX1及既往构建的pET28a（＋）/C-G250肽-C质粒。利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定。大量提取质粒并分光光度计测质粒含量。将32只雌性昆明小鼠随机分为（A）裸DNA组,（B）DNA-PEI复合物组,（C）DNA-PEI＋蛋白疫苗组,（D）空白对照组。按0,10,20,30天程序经股四头肌注射免疫。C组在第20天及第30天进行蛋白冲击。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度。流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4＋和CD8＋。结果：酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽cDNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中。昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1：1.28×104及CD4＋、CD8＋达26.12%和12.60%,明显高于A组的1：3.2×103和CD4＋,CD8＋占到19.32%和10.74%。而蛋白冲击组的1：5.12×104和CD4＋,CD8＋占到41.96%和15.14%,明显高于B组（P〉0.05）。结论：成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C。该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应。证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用。为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法。

简介：摘要：目的：建立大肠杆菌表达的重组蛋白外源性E.coli宿主残留DNA的检测方法用于生产过程以及最终产品的质量控制。方法：参考试剂盒相关说明书，样品加标回收了率无法达到2020版中国药典（Ch.P）第四部3407章节和美国药典(USP)1130章节的要求，通过对药物浓度、处理温度、糖原的蛋白酶K的使用量以及不同的加标量的优化，即将样品稀释10倍后，加30pg的E.coli标准品，20μl的蛋白酶K消化1h,选择15μl PCR反应体系。结果：回收率满足在50%~150%之间。结论：借助商品化的试剂盒，优化的外源性DNA提取条件满足法规要求、操作简便，非常适用于大肠杆菌表达的重组蛋白生产过程以及最终产品的外源性残留DNA的检测。

简介：[摘要] 目的 探讨肿瘤DNA重组修复功能评估系统（RDS）预测非小细胞肺癌（NSCLC）患者放化疗疗效的价值。方法 选取2019年1月-2022年1月医院收治的100例非小细胞肺癌患者，所有患者均接受放化疗治疗，于于放疗2个月、化疗2个周期后对患者随访1个月评估两组治疗效果，根据结果分为有效组与无效组，设计基线资料调查表，详细统计两组患者的基线资料及RDS值并比较，重点分析RDS值预测NSCLC患者放化疗疗效的价值。结果 治疗后，100例NSCLC患者中CR 0例，PR 42例，SD 30例，PD 28例，治疗有效72例，占比72.00%，治疗无效28例，占比28.00%；无效组RDS值比有效组低，有统计学差异（P＜0.05），组间其他资料比较，无统计学差异（P＞0.05）；绘制ROC曲线结果显示，RDS值预测NSCLC患者放化疗治疗无效风险的AUC=0.813，预测价值理想，对应灵敏度为0.759、特异度为0.810、约登指数为0.569、cut-off值为1.242。结论 RDS值预测NSCLC患者放化疗治疗无效风险价值较高，RDS值过表达提示NSCLC患者放化疗治疗无效高风险。

简介：无论是高贵优雅的气质淑女，还是青春逼人的靓丽少女，皮草衣都能轻松满足你的需求，打造属于你的个人风格。皮草衣奢华、高贵的属性，致使根根皮草就像分子般进行着扩散运动，时时飘散出独特出众的女性魅力。

简介：<正>陈老师是女老师,有点胖,戴副眼镜,唐山人。初二时,新开历史课,她教我们历史。中国历史开课不久,讲到类人猿,给我印象最深。不是我尤其喜欢类人猿,而是因为陈老师的口音。

简介：AventadorLP700-4还是延续了Lamborghini的一贯设计风格，显得粗犷而霸气，浑身充满了如蛮牛般的力量。而从整体感觉上，我们也能从其身上看到Murcielago、Renventon以及SestoElementoConcept的影子。

简介：真的假不了,假的真不了,真真假假错不了。几次DNA测试,不但测出了骨肉亲情,也测出了人心善恶。

简介：乔皮奇体质不好,老是感冒发烧。“太影响学习了,”乔皮奇生自己的气,“如果我能不生病就好了!”

简介：<正>2006年NBA选秀大会已经尘埃落定一个多月了,然而还是有一些东西值得我们津津乐道地去分析一番,这其中当然免不了大家关注的外籍军团。自从2002年以来,5年里NBA诞生了姚明、博古特、巴格纳尼三位外籍状元,毫无疑问,NBA选秀的国际化已经成为不可阻挡的历史洪流。而有些可惜的是,我们在第二轮仍然无法看到中国球员唐正东的名字。尽管大唐本人一直为他的NBA之梦而不懈地努力,然而残酷的竞争却让我们不得不去尊重这一个事实。或许在明年或者后年的选秀会上,中国球员会有更多的表演空间,因为届时我们将会看到易建联、孙悦这样的身影。

简介：摘要目的探讨TAB182促进同源重组(HR)修复的相关调控分子及机制。方法利用shRNA敲低人乳腺癌MCF-7细胞中的TAB182基因，TAB182敲低的MCF-7细胞为沉默组，使用shRNA阴性对照物的MCF-7细胞为TAB182阴性对照组。通过RNA测序分析，筛选与TAB182相关差异表达的HR修复基因。qRT-PCR验证相关基因的mRNA表达，Western blot验证相关蛋白的表达。RAD51和BrdU免疫荧光检测DNA断裂末端形成的3′单链DNA(ssDNA)；流式细胞术检测细胞周期阻滞和细胞凋亡；集落形成实验检测细胞的放射敏感性。结果RNA测序分析和qRT-PCR验证结果一致，TAB182沉默组细胞中RPA2的mRNA表达降低(t＝17.97，P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组细胞，TAB182沉默组细胞RPA2在蛋白水平也显著减少。相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞中RAD51焦点(foci)的表达显著降低；3′ ssDNA结合蛋白标志物BrdU在TAB182沉默组细胞的细胞核中foci形成显著减少。在放射菌素D作用后的第4、8、12 h，相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞RPA2 mRNA的衰减加快(t＝5.37、3.79、3.69，P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞放射敏感性增加(t＝3.48，P<0.05)；且TAB182沉默组放射诱发的凋亡率显著增加(t＝11.05，P<0.05)、照射后24 h的周期阻滞时间延长(t＝8.40，P<0.01)。结论TAB182通过维持RPA2 mRNA的稳定性，促进RPA2的表达，在DSBs的同源重组修复通路中发挥作用。TAB182的缺失可增强肿瘤细胞的放射敏感性。

简介：在基因工程专题教学中有许多难点。例如，限制酶和DNA连接酶的作用方式，目的基因和质粒混合后的随机结合，目的基因与质粒的正向与反向连接，等等。产生这些难点的原因是学生对重组DNA的构建过程缺乏感性认识。

简介：最初开始创作这件作品,完全出自于对DNA这个概念的兴趣。高中的时候,生物课老师无数次的重复DNA-脱氧核糖核酸是人类基因的组成部分,但对我而言是如此的虚晃。看不见,摸不到,却组成了独一无二的我或是别人,仔细想来,这的确是我做这件作品的想法来源最好的解释。整个创作过程的思路其实一直很明确,包括DNA提取的选材——抽过的香烟头或咀嚼过的口香糖---唾液残留。当时在烟头和口香糖之间犹豫了一段时间,但是个人觉得口香糖更相对无性别

简介：公路奇案,疑凶竟然不是真凶2005年9月12日凌晨1时,美国内华达州50号州际公路已经如附近的荒野般杳无人

简介：一三月初的一个黄昏,跟着父亲学习古老石匠技术的索拉杰同父亲及他们村上几个年青人一起从知莫乡年克村去到银河乡木尔基沟的冉斯则村。他个子不太高,长相也不太漂亮,穿着一件灰色有些破旧的毛衣,外面套着一件藏族男人们出门时爱穿的既保暖又防湿的毪衫,棕色,衫子的边嵌着色彩鲜明的氆氇。一条紫红色的绸腰带很随意地拴在腰间,在腰后面露