查阅众多资料和了解多种试剂盒后,我们选择了物美价廉且成功率更高的蓝白斑筛选来完成本次的实验任务。蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组质粒的一种方法,质粒载体中带有β-半乳糖苷酶 N 端α片段的编码区,该编码区中含有多克隆位点,可用于构建重组质粒。大肠杆菌 DH5ɑ宿主细胞是编码β-半乳糖苷酶 C 端ω片段的突变体。宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性, 但它们同时存在时,α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。由α-互补而产生的 LacZ+细菌在诱导剂 IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物 X-Gal 存在时产生蓝色菌落。而当外源 DNA 插入到质粒的多克隆位点后破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的 LacZ-细菌形成白色菌落
(见下图)。
如果需要讲解更加明确的实验原理,可以给学生讲解蓝白斑筛选原理的简略版本(见下图),LacZ 基因正常并且表达 LacZ 酶的细菌可以形成蓝色菌落, 而由于插入片段使得 LacZ 基因失活不能表达而无 LacZ 酶细菌只能形成白色菌落。
我校此次使用的是 pMDTM19-T 克隆试剂盒进行蓝白斑筛选,实验过程非常的简便易行。每次操作在三天之内可以完成,每天只需要大约半小时的实验操作时间(一部分的准备过程由教师完成)。经过我校多位师生的多轮次实际操作基本可以达到百分百成功,蓝色白色菌落肉眼可见非常清晰(见下图)。而且价格不算太贵,基本 30 元/次。不仅可以锻炼奥赛学生的实验操作能力,同时可以让学生在实验过程中在实验室中参观学习或者观看教师在实验过程中录制的图片或视频资料。
实际教学中,大概念的形成不是一节课就能完成的,确立每一节课的教学目标并从不同的维度指向大概念,是大概念教学的“必由之路”;在实验及教学前,教师一定要储备与之相关的实验操作知识和学科教学知识,研究“标准”中不同层次概念间的关系,对确立“节”的教学目标。综上所述,本节教学起点落在已有的经典分子遗传学知识上,指导学生自己动手进行相关的具体插入片段使基因失活的实验操作,使用合理的资源配置,直观的使学生认识到“生物的性状主要由基因编码蛋白质决定”,在有限的课堂时间给学生展示真实的实例,创生了满足不同学生发展需求的特色学科课程,提高了学生生物学素养。
课题编号:ZJD-19013 山西省教育科学“十三五”规划2019年度普通高中生物学科山西教研基地专项课题 课题名称:高中生物教师精准备课的策略研究