高效液相色谱法测定顺铂注射液的含量研究进展

高效液相色谱法测定顺铂注射液的含量研究进展

1黄良勇 2陈泽伦

海南海灵化学制药有限公司  海南省海口市  570311

摘要：高效液相色谱法是用于测定顺铂注射液中顺铂含量的有效方法，还可用于注射液中反铂等杂质的测定，为顺铂与二氯铵铂、水合物间的分离提供了重要支持。本方法对顺铂进行定量反应的选择性良好，目前在生产实践中已经得到了推广，基于此，本文主要综述高效液相色谱法在顺铂注射液含量测定中的应用步骤与优势，以期为生产应用提供参考。

关键词：高效液相色谱法；顺铂注射液；含量

顺式-二氯二氨合铂的简称为顺铂，近些年来已经成为临床常用的抗癌药物，主要作用机理是可通过与DNA结合，形成交叉键，并破坏DNA的复制功能。在顺铂药剂中，顺铂注射液的应用更为便捷，计量结果更为准确，得到了临床工作者及患者的支持与认可，应用前景十分广阔。目前临床在测定顺铂含量时，一般会采用重量法、SnCl2比色法，检测效果缺乏专一性，无法实现对顺铂、反铂的同时测定。高效液相色谱法可以测定顺铂络合物中铂的含量，还可以测得相关降解或聚合产物的总量，将其作为杂质考虑，为药物制剂提供重要参考。

一、高效液相色谱法在顺铂含量测定中的应用

（一）实验条件

高效液相色谱法使用到的仪器有LC-10A液相色谱仪、LC-10AD高压泵2台、DGU-4A脱气装置1台、柱温箱、手动进样阀、紫外检测器、色谱柱。数据采集及处理选用色谱工作站，试剂选用去离子二次蒸馏水、铂B、反铂、水合铂、聚乙二醇等。

（二）分离条件

结合已有的实验研究结果来看，高效液相色谱法所采用的分离流动相包括纯水、甲醇-水，并表明纯水作为流动相的效果更佳。在顺铂注射液配制过程中，需要使用到空白溶剂。在检测顺铂、反铂、空白溶剂等物质含量时，分离可选用不同柱子、流速，检测结果发现在色谱峰值保留时间方面，铂B、空白溶剂、水合铂存在重叠，但是叠峰与顺铂、反铂色谱峰值保留时间不同，由此可见，此分离度满足实际要求[1]。而在柱子、流速的选择方面，长柱子的分离效果要优于短柱子，所以颜色不足，规格应当大于4.00mm×250mm。低流速更适合于分离，但如果流速过低，可能会导致峰形变宽，从而影响分离效果，所以研究表明将流速控制在每分钟0.65ml最佳。

（三）氯化钠浓度选择

在进行色谱分析时，采取外标定量法需要绘制浓度-峰面积的工作曲线，并根据工作曲线测得测试样的具体含量。顺铂注射液的空白溶液，可用于配置声波对照品的溶剂，但本溶剂属于非常常规试剂，进行少量配制不便捷，带来了一定的管理困难。以往实验研究结果发现，空白溶剂存在1个Cl-色谱峰，而在氯化钠水溶液中也存在1个Cl-色谱峰，所以空白溶剂可由氯化钠水溶液取代，用于顺铂对照品溶液的配制，完成工作曲线的绘制[2]。但氯化钠是溶液的浓度，对溶液含量产生的直接影响，当氯化钠浓度低于1.260g/L时，可能会由于顺铂水解，导致顺铂含量降低，但如果高于1.270g/L时，Cl-峰可能会造成部分拖尾，顺铂色谱峰值面积增大，顺铂含量增高。因此，将氯化钠浓度控制在1.260~1.270g/L时，可以有效抑制顺铂水解，所测得的声波含量更为准确，故空白溶剂配置的顺铂对照品，可由本浓度范围内的氯化钠水溶液所取代，绘制工作曲线，完成顺铂含量的测定。

（四）标准曲线建立

精密量取顺铂溶液，分别放置在10毫升的量瓶中，将1%的氯化钠溶液加入其中，进行稀释摇匀。取10μl溶液放置到色谱仪中，记录色谱图获取峰值面积，根据峰值面积与溶液浓度的关系获得回归方程。研究结果表明在100.04~300.12μg/ml内顺铂呈线性。反铂溶液也进行精密量取，分别放置在10毫升的量瓶中，将1%的氯化钠溶液加入其中，进行稀释摇匀。取10μl进行检测，获取峰值面积，结合溶液浓度计算回归方程，结果显示1.338~6.690μg/ml内反铂呈线性.

（五）回收率测定

称取顺铂对照品40mg、50mg、60mg，加入相应溶剂，制成每1ml溶液含有1mg物质的溶液；另外，再称取顺铂对照品适量，加入1%的氯化钠溶液，制成每1ml溶液含有0.2mg的溶液[3]。根据含量测定项现象测定，计算最终的回收率。

（六）精密度实验

精密度试验需要在已经确定的色谱条件下，对对照品溶液连续进行4次检测，结合峰面积，计算RSD。

（七）溶液稳定性试验

将对照品溶液放在棕色量瓶中，注意避光放置12小时，当溶液峰面积基本不变后，根据峰面积计算RSD。

（八）专属性考察

在120℃高温调节下，放置顺铂注射液8小时进行破坏性试验，将双蒸水加入其中，配置成每1ml溶液含有0.2mg顺铂的溶液，取出10μl，设定好灵敏度后，将其放入到液相色谱仪中，对降解溶液的分离情况进行考察[4]。对流动性比例加以调整，延长保留时间，分析降解溶液，观察是否有新的杂质峰。结合已有实验结果，得知顺铂与降解物的分离效果满意，空白溶剂不会造成干扰。

（九）样品测定

取适量的声波注射液，加入0.1%的氯化钠溶液，作为供试品溶液，取出10μl，放入到液相色谱仪中；另取顺铂对照品，采取同一方法测定。根据外标法计算峰面积。

二、高效液相色谱法在顺铂含量测定中的优势

高效液相色谱法具有较强的专一性，在加入试剂以后，能够使得顺铂络合物发生化学反应，并形成另一种络合物，促使其吸收波长，产生更强的吸收，最终在铂本身并不缺失的情况下，能够同时检出聚合物、分解物以及其他降解物，实现对顺铂的有效分离，测定效果更佳。在测定顺铂注射液时，只需要将注射液稀释至适宜浓度后，取样进行检验操作即可，在检查过程中无明显的干扰，专属性更强，分析速度更快，更适合研究与生产。而且在检验过程中，无复杂的前期处理步骤，检测方法灵敏度更高，保障了检测结果的准确性。检测设备的自动化水平更高，稳定可靠，提高了实验效率与数据准确性。

结束语：

综上所述，顺铂在水中容易形成反铂，但是在氯化钠溶液中相对较为稳定，所以建议选择氯化钠溶液作为溶剂，以保障顺铂注射液的稳定性，为后续检测提供更高支持。而采取高效液相色谱法，对稀释后的顺铂溶液进行检测，能够有效分离顺铂、反铂、水合铂等杂质，从而精准测定顺铂含量，为研究生产、药品检验提供可靠参考。

参考文献：

[1]童彤,丁海文,刘圣等.顺铂注射液与6种质子泵抑制剂配伍溶液物理相容性考察[J/OL].医药导报,1-12[2024-03-23].

[2]陈定宁,许雯,沈昊宇.顺铂和20(R)-人参皂苷Rg3的HPLC分析和双载药缓释抗癌药物制备研究[J].分析仪器,2020,(6):179-183.

[3]彭雪婷,李康,袁达伟等.高效液相色谱法测定腹腔热灌注化疗后腹腔液及血浆的顺铂浓度[J].药物分析杂志,2020,40(3):470-476.

[4]张登山,刘留成.共载伊立替康-顺铂复合脂质体的制备及质量评价[J].中国药师,2020,23(2):280-284.