简介：摘要目的观察慢病毒（LV）介导miR-191对体外培养的人视网膜血管内皮细胞（hREC）增生和血管生成的抑制作用。方法体外培养hREC细胞系，分为对照组、缺氧组、LV-空载体（LV-vector）组、LV-miR-191 （LV-191）组。LV-vector组、LV-191组分别转入相应的慢病毒载体。采用流式细胞仪检测细胞转染率；细胞计数试剂盒-8 （CCK-8）实验检测细胞增生能力；划痕实验和侵袭小室（Transwell）实验检测细胞迁移能力；Matrigel实验检测细胞管腔形成能力；实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-191相对表达量及其下游靶基因p21、血管内皮生长因子（VEGF）、细胞分裂蛋白激酶（CDK）6、细胞周期蛋白-D1 (Cyclin D1）mRNA相对表达量。两两比较采用独立样本t检验。结果流式细胞仪检测结果显示，对照组、LV-191组细胞转染率分别为0.615%、99.400%。CCK-8、细胞划痕、Transwell细胞迁移、Matrigel实验结果显示，与对照组比较，缺氧组、LV-vector组细胞增生数量明显增多（t=6.130、4.606 ）、细胞迁移率明显增高（t=4.910、6.702 ）、微孔膜上染色的细胞数量明显增多（t=7.244、6.724 ）、细胞管腔形成能力增强（t=8.345、9.859），LV-191组细胞增生数量明显减少（t=14.710）、细胞迁移率明显降低（t=6.245 ），微孔膜上染色的细胞数量明显减少（t=5.333）、细胞管腔形成能力明显减弱（t=5.892 ），差异均有统计学意义（P≤0.01）。qPCR检测结果显示，与对照组、LV-vector组比较，LV-191组细胞中miR-191 mRNA相对表达量明显上调（t=44.110、42.680），Cyclin D1 （t=29.940、14.010）、CDK6 （t=15.200、7.645）mRNA相对表达量明显下降，差异均有统计学意义（P<0.01）；p21 mRNA相对表达量增高，但差异无统计学意义（t=2.013、2.755，P>0.05）。4组细胞中VEGF mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（F=0.966，P>0.05 ）。结论miR-191可通过上调p21 mRNA表达，下调CDK6、Cyclin D1 mRNA表达，抑制hREC增生、迁移及管腔形成。

简介：摘要目的观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与p21及视网膜新生血管（RNV）形成相关的miRNA。方法实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组，每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型，正常组不做任何处理。小鼠17日龄时，处死小鼠，视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况；光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析；通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本t检验。结果与正常组比较，OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加，差异均有统计学意义（t=18.800、9.025，P<0.05）。与正常组比较，OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个，其中，上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个，按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析，得到1 112个GO条目及50条KEGG通路，其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。结论在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。

简介：摘要目的观察骨形成蛋白4 （BMP4）对人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）中糖酵解水平的影响。方法实验研究。将体外培养的hRMEC分为正常组、4-羟基壬烯醛（HNE）组（4-HNE组）、4-HNE+BMP4处理组（BMP4组）。4-HNE组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE；BMP4组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE刺激6 h后，再加入100 ng/ml重组人BMP4。采用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧（ROS）水平；噻唑蓝比色法检测4-HNE对细胞生存力的影响；细胞划痕实验、Transwell小室法测定4-HNE对细胞迁移能力的影响。采用实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测正常组、4-HNE组细胞中BMP4、SMAD同源物9 （SMAD9） mRNA、蛋白相对表达量。采用Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解代谢水平。组间比较采用单因素方差分析。结果正常组、4-HNE组、BMP4组hRMEC内ROS水平分别为21±1、815±5、810±7。与正常组比较，4-HNE组、BMP4组ROS水平显著升高，差异有统计学意义（F=53.40、50.30，P<0.001）。正常组、4-HNE组细胞生存力分别为1.05±0.05、1.28±0.05；迁移率分别为（0.148±0.005）%、（0.376±0.015）%；穿过小孔的细胞数分别为（109.0± 9.6）、（318.0±6.4）个。与正常组比较，4-HNE组细胞生存力、细胞迁移率、穿过小孔细胞数量明显提高，差异均有统计学意义（F=54.35、52.84、84.35，P<0.05）。4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9 mRNA相对表达量分别为1.680±0.039、1.760±0.011；与正常组比较，差异有统计学意义（F=53.66、83.54，P<0.05 ）。正常组、4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9蛋白相对表达量分别为0.620±0.045、0.860±0.190和0.166±0.049、0.309±0.038；与正常组比较，差异有统计学意义（F=24.87、53.84，P<0.05 ）。正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平分别为1.21±0.12、2.84±0.24、1.78±0.36，2.59± 0.11、5.34±0.32、2.78±0.45和2.64±0.13、5.20±0.28、2.66±0.33；与正常组比较，差异均有统计学意义（4-HNE组：F=86.34、69.75、58.45，P<0.001；BMP4组：F=56.87、59.35、58.35，P<0.05）。4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平比较，差异均无统计学意义（F=48.32、56.33、55.01，P>0.05）。结论BMP4通过糖酵解诱导hRMEC的增生和迁移。

简介：摘要目的观察玻璃体切割手术（PPV）联合地塞米松玻璃体腔植入剂（DEX）治疗重度特发性黄斑前膜（IMEM）的疗效。方法前瞻性临床病例研究。2018年12月至2021年5月于天津医科大学眼科医院检查确诊的重度IMEM患者24例25只眼纳入研究。其中，男性7例7只眼，女性17例18只眼；年龄（57~ 84）岁。IMEM分期为3~ 4期。患眼均行最佳矫正视力（BCVA）、频域光相干断层扫描（SD-OCT）检查。采用SD-OCT仪测量患眼中心凹视网膜厚度（CMT）。将患眼随机分为PPV组、PPV+DEX组，分别为11、14只眼。均行标准经睫状体平坦部三通道25G PPV。手术中均联合白内障超声乳化、剥膜、人工晶状体植入。手术完毕时PPV+DEX组患眼行玻璃体腔注入0.7 mg DEX治疗。手术后1周及1、3、6个月采用手术前相同设备和方法行相关检查，对比观察两组患眼BCVA、CMT变化。组间BCVA、CMT比较采用t检验。结果与手术前比较，手术后1、3、6个月，PPV+DEX组患眼BCVA明显提高（t=3.974、4.639、4.453），CMT显著降低（t=2.955、3.722、4.364 ），差异均有统计学意义（P<0.05）；手术后3、6个月，PPV组患眼BCVA明显提高（t=2.983、4.436），CMT显著降低（t=2.983、3.461 ），差异均有统计学意义（P<0.05）。结论重度IMEM治疗中，DEX可加快患眼手术后早期视力恢复，降低CMT。

简介：摘要目的观察特发性黄斑裂孔（IMH）患眼玻璃体切割联合白内障超声乳化IOL植入手术（联合手术）后屈光状态的变化。方法回顾性临床研究。2016年1月至2019年6月于天津医科大学眼科医院行联合手术的IMH患者51例56只眼纳入研究。其中，男性17例，女性34例；平均年龄（66.79±4.33）岁。所有患眼均行BCVA、检影验光以及眼轴长度（AL）测量。根据SRK-T公式计算IOL度数，预测屈光度（预测值）。患眼平均BCVA为0.20±0.13；平均前房深度为（2.89±0.28）mm；平均△角膜散光度（0.73±0.43）D；平均AL为（22.92±0.70）mm；平均屈光度预测值为（0.10±0.66）D。所有患眼均行标准经睫状体平坦部三通道25G联合手术。手术后6个月，采用与手术前相同的设备和方法测量手术后屈光度实际值（实际值）。预测值与实际值差异比较采用配对t检验。结果手术后6个月，患眼平均屈光度实际值为（-0.19±0.64）D；与手术前屈光度预测值比较，差异无统计学意义（t=1.665，P=0.102 ）；实际值与预测值差值为（-0.33± 0.81 ）D。结论IMH患眼联合手术后屈光状态发生近视漂移；手术前IOL度数预算时可适当预留＋0.3 D左右远视。

简介：摘要目的观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与视网膜新生血管（RNV）有关的miRNA。方法80只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和OIR组，每组40只。OIR组小鼠构建OIR模型，对照组小鼠不做任何处理。小鼠17日龄时，做视网膜荧光铺片，荧光显微镜下观察小鼠RNV发生情况；做视网膜病理切片HE染色，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测对照组与OIR组之间差异表达的miRNA，并行PCR验证。所得差异miRNA靶基因和表达谱分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析。组间两两比较采用独立样本t检验。结果荧光显微镜及光学显微镜观察发现，对照组小鼠视网膜未见无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核；OIR组小鼠视网膜可见大量无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。两组小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量比较，差异有统计学意义（t=9.025，P<0.05）。miRNA芯片分析结果显示，与对照组比较，OIR组有54个miRNA发生了具有统计学差异的表达。其中，上调者47个，下调者7个。miRNA差异表达倍数大于1.25倍者23个，小于0.75倍者5个。PCR验证结果显示，差异表达倍数最高的5个miRNA表达趋势与芯片分析结果一致，差异均有统计学意义（P<0.05）。GO分析共得到1112个差异有统计学意义的条目（P<0.05）；KEGG分析共得到65个差异有统计学意义的条目（P<0.05 ）。结论OIR小鼠视网膜组织中miRNA较正常小鼠视网膜组织有54个表达差异显著的miRNA；表达差异的miRNA可能不同程度参与了RNV的发生发展。