简介:本研究构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立U266-li稳定细胞株,为下一步Bmi-1的功能研究及应用RNAi技术治疗打下基础。设计、合成1对针对Bmi-1mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PMD2G共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染U266细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Westernblot技术分别检测U266稳定细胞中Bmi-1及P14mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较。结果表明,成功构建了针对Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立稳定转染的U266细胞株。有效干扰验证显示,shBmi-1能明显降低Bmi-1的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平则都上调,其差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:成功构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定干扰Bmi-1表达的U266细胞株。
简介:目的探讨PTEN—P13K/AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的调控作用及其机制。方法构建PTEN真核表达载体,转染至胃癌细胞株MKN28中(转染组);同样方法转染空载体和等量的PBS分别作为阴性对照组和空白对照组,检测对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及对P13K、AKT、Caspase-3、Caspase-9的影响。MTT检测细胞生长曲线,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Westernblot检测蛋白的表达。P13K抑制剂LY294002处理未转染PTEN的胃癌细胞株MKN28(处理组);对照组加入等量的PBS,抑制P13K活性后检测细胞凋亡蛋白及凋亡相关蛋白的表达。组间比较采用t检验,时间依赖性检验采用相关分析方法。结果成功构建PTEN真核表达质粒并转染至胃癌细胞株MKN28中,获得稳定过表达PTEN的细胞模型。MTT检测发现转染组胃癌细胞株MKN28生长明显受到抑制,且呈时间依赖性(r=0.938,P〈0.05)。转染组平均凋亡率达到27.86%±4.78%,明显高于阴性对照组的0.01%±0.01%(t=9.527,P〈0.05)。转染PTEN后,转染组P13K蛋白表达量为0.25±0.03,明显低于空白对照组的0.93±0.16及阴性对照组的0.96±0.15(t=7.235,8.883,尸〈0.05)。转染组活化的AKT(P.AKT)蛋白表达量为0.214-0.03,明显低于空白对照组的0.93±0.13及阴性对照组的0.91±0.12(t=9.347,9.802,P〈0.05)。而转染组凋亡相关蛋白Caspase-3及Caspase-9表达量分别为0.86±0.11和0.87±0.12,明显高于阴性对照组的0.16±0.03和0.18±0.04及空白对照组的0.15±0.02和0.16±0.03(t=10.634,10.999,9.448,9.942,P〈0.05)。抑制P13K活性后,处理组细胞凋亡率为28.60%±4.50%,明显高于对照组的0.12%±0.06%(t=10.961,P〈0.05)。Westernblot检测发现处理组P13K和P—AKT的蛋白表达量分别为0.18±0.02和0.11±0.叭,明显低于对�
简介:目的调查长时间血液透析对血液透析患者睡眠质量的影响。方法通过问卷调查和收集临床资料相结合的方法,选取首都医科大学附属北京友谊医院血液净化中心40例维持性血液透析患者进行研究,应用AIS量表、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburghsleepqualityindex,PSQI)量表爱泼沃斯嗜睡、(EpworthSleepinessScale,ESS)量表调查患者的睡眠质量,根据睡眠质量情况将患者配对分组为普通透析组(HemodialysisHD)20人和长程透析组)6个月的临床试验。结果LSHD组患者Kt/V明显高于HD组患者,P值<0.05,2组患者在PSQI量表、ESS量表评分差异存在显著性,LSHD组患者睡眠质量明显高于HD组,P值<0.05。结论维持性血液透析的患者多存在睡眠质量下降的问题,增加透析剂量可以改善睡眠质量。
简介:尤张力蛳修补术是治疗腹股沟疝的常用方法,目前有疝环充填式无张力疝修补术和平片式无张力疝修补术。收集我院2005年3月-2009年3月采用平片式与疝环充填式无张力疝修补术治疗的161例腹股沟疝患者,对其临床资料进行回顾性分析.比较两种于术方法的临床疗效。
简介:目的:观察环磷腺苷葡胺联合银杏达莫治疗各种原因所致的充血性心力衰竭患者的疗效。方法:选择本院2006年3月~2012年3月收治的62例充血性心力衰竭患者(均符合NYHA分级标准Ⅲ~Ⅳ),随机分为两组。对照组(30例)予常规抗心衰处理,包括利尿、扩血管治疗及维持量的洋地黄类强心剂。治疗组(32例)在此基础上加用环磷腺苷葡胺120~150mg及银杏达莫注射液20mL分别加入5%葡萄糖注射液或生理盐水250mL中静脉滴注,每日1次(糖尿病患者葡萄糖水中加适量胰岛素),连用14d。然后针对有效性、安全性进行评估。结果:治疗组总有效率90.6%,对照组为83.3%,两组比较有显著差异(P〈0.05)。两组均有1例因洋地黄禁忌证停用洋地黄制剂。结论:环磷腺苷葡胺联合银杏达莫治疗充血性心力衰竭有效且安全。
简介:目的比较人工膝关节不同孔径的固定表面生物型假体植入兔体内的骨长人情况,为人工膝关节生物学固定方法的改进提供理论依据。方法自行设计制作兔部分限制型人工全膝关节表面置换假体,股骨髁和胫骨平台假体固定表面用激光焊接两层不锈钢网,一组设计为两层不锈钢网孔大小相同,网孔均为(2×2)mm,称大孔假体(实验组假体)。另一组设计为两层不锈钢网孔大小不同,大网孔大小为(2×2)mm,小网孔大小为(1.5×1.5)mm,大网孔钢网焊接在紧贴假体固定表面,小网孔叠放在其外面,称小孔假体(对照组假体)。两组假体两层钢网均错开焊接。30只成年新西兰大白兔随机分成两组,每组15只,分别行左侧人工膝关节置换术,髌骨不置换。术后1、3、6个月处死动物取材,每个时间点各5只,进行硬组织切片染色,计算假体骨界面新生骨形成率,假体与骨界面的骨结合率。结果假体骨界面新生骨形成率,假体与骨界面的骨结合率,实验组大于对照组(P〈0.05)。结论生物型人工膝关节假体的固定表面孔径不同影响假体与骨界面的骨长人,大孔假体骨界面新生骨形成率及假体与骨界面的骨结合率要优于小孔假体。
简介:目的探讨关节镜下经皮空心螺钉结合钢丝环扎治疗髌骨骨折的手术方法,并与传统的开放手术比较,评价其临床疗效。方法2007年3月-2011年4月,采用关节镜下经皮空心螺钉结合钢丝环扎治疗17例髌骨骨折患者(关节镜组),传统的切开复位克氏针张力带手术治疗髌骨23例患者(传统手术组),比较两组患者手术切口大小、骨折愈合时间、Lysholm膝关节评分等,评价其疗效。结果两组患者均获得了临床随访,平均17个月(6~37个月)。手术切口的大小:关节镜组(6.5±1.4)cm,传统手术组(8.4±1.2)cm。术后骨折愈合时间:关节镜组(9.6±1.3)周,传统切开组(11.9±1.7)周。术后Lysholm膝关节评分:关节镜组(85.0±3.7)分,传统切开组(82.7±4.9)分。两组在手术切口大小、骨折愈合时间及术后Lysholm膝关节评分比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论关节镜下经皮空心螺钉结合钢丝环扎治疗髌骨骨折,相对于传统的开放手术创伤小、固定可靠、并发症少、利于早期功能锻炼功能恢复,是治疗髌骨骨折的较佳方法。
简介:目的探讨乳腺癌改良根治术腋窝淋巴结清扫保留肩胛下肌群筋膜的方法对腋窝积液的影响.方法将我院2010年1月~2010年12月确诊乳腺癌并需行乳腺癌改良根治术的患者共178例随机分为保留肩胛下肌群筋膜腋窝淋巴结清扫组(治疗组,n=98)及切除全部肩胛下肌群筋膜腋淋巴结清扫组(对照组,n=80),比较两组在切除淋巴结平均数目、拔引流管时间,腋窝皮下积液发生率及患侧上肢水肿发生率的情况.结果治疗组切除腋窝淋巴结平均数、腋窝皮下积液例数(发生率)、拔管时间、拔管时间超过14天例数及发生患侧上肢水肿例数依次为:15.1个/例,6例(6.1%)、7±0.5天、4例及3例,对照组为14.8个/例、9例(11.3%)、9±0.5天、12例及7例.两组均未发生严重水肿.治疗组与对照组在切除淋巴结平均数目无显著差异,但前者拔管时间较后者短,腋窝皮下积液发生率及患侧上肢水肿发生率均较对照组低,两组差异具有统计学意义.结论保留肩胛下肌群筋膜腋窝淋巴结清扫的方法较常规方法损伤更小,发生腋窝皮下积液及患侧上肢水肿的几率低,不影响肿瘤分期.