简介:Objective:TostudytheeffectofantisenseVEGFRNAonratC6gliomasinvivoandfindoutthefeasibilityofantiangiogenesistherapywithantisenseVEGFRNAformalignantgliomas.Methods:ParentalratC6gliomacellsandC6cellstransfectedwithantisenseVEGFcDNAwereimplantedintracerebrallyandsubcutaneouslyintoSDratsascontrolandtransfectedgroup.RatsbearingcerebralandsubcutaneousC6gliomasweretreatedwithantisenseVEGFcDNAastreatedgroupandsenseVEGFcDNAandemptyvectorascontroloftreatedgroup.Thegeneralmanifestation,survivaltime,MRIandhistopathologicalchangesofallratswereobserved.Thevolumeofsubcutaneouslyimplantedtumorswasdeterminedregularly.InsituhybridizationandimmunohistochemicalstainingwereusedfordetectionofVEGFgeneexpressionofgliomaswhilePCNAimmunostainingandTUNELmethodforexaminationofproliferationactivityandapoptosisofgliomas,respectively.Results:Thesurvivaloftheratsintransfectedandtreatedgroupwasprolonged.Thereweretworatssurvivingover90dinthetreatedgroupandtheirtumorsdisappeared.TheVEGFgeneexpression,thenumberofmicrovesselsandtheproliferationactivityweredecreasedandalargeamountofapoptoticcellscouldbefoundincerebralandsubcutaneousgliomasintreatedandtransfectedgroups.Conclusion:VEGFisoneofthecandidategenesforgenetherapyofmalignantgliomas.AntisenseVEGFRNAcombinedwithothertherapiesshouldbestudiedfurtherforenhancingthetherapeuticeffectofmalignantgliomas.
简介:目的构建表达Nogo受体(NgR)特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上,设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功,为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。
简介:目的探讨HCVRNA定量与丙型肝炎临床及病理的关系及判断疗效。方法采用美国PE公司生产的5700型荧光定量PCR仪,对665例丙型肝炎病毒单纯感染的慢性肝炎及肝硬化患者行HCVRNA定量检测,对部分患者行血生化及肝穿刺病理检查,用不同类型干扰素治疗。结果慢性丙型肝炎的HCVRNA定量值比肝炎肝硬化高(P〈0.001)。20例患者的HCVRNA定量与肝脏病理分析,HCVRNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系。但肝组织炎症程度与血清生化指标有一定相关性,血清丙氨酸转氨酶的高低与肝组织的炎症程度成正相关。32例用不同干扰素治疗,疗效与HCVRNA值可能有关,HCVRNA值越低,效果越好。结论HCVRNA定量慢性丙型肝炎比肝炎肝硬化高,HCVRNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系,干扰素治疗疗效与HCVRNA值可能有关。HCVRNA定量是丙型肝炎诊断和观察抗病毒治疗的一项可靠指标。
简介:本文对两种具有抗HIV-1活性的药物与RNA的相互作用进行了探讨.紫外Tm测定及CD光谱结果表明,两种药物均可与polyA@polyU相互作用,影响其构象的改变.流式细胞仪分析提示药物可不同程度地影响cos-7亚二倍体细胞含量,其中ribavirin的作用更显著.
简介:瞄准:由transfecting观察肝炎B复制和表示的抑制基于向量的小干扰RNA(siRNA)pGenesil-HBVX指向HBVX基因区域进HepG2.2.15房间。方法:pGenesil-HBVX被构造并且transfected进经由lipofection的HepG2.2.15房间。HBV抗原分泌物被决定在由解决时间的immunofluorometric试金(TRFIA)的transfection以后的24,48,和72h。HBV复制被荧光检验细胞质的病毒的蛋白质的量的PCR,和表示被免疫组织化学决定。结果:进上层清液的HBsAg和HBeAg的分泌物被发现被28.5%和32.2%禁止(P<0.01),并且在38.67%(P<0.05)并且42.86%(P<0.01)在在pGenesil-HBVXtransfection以后的48h和72h分别地。为细胞质的HBsAg染色的Immunohistochemical在HepG2.2.15房间显示出类似的衰落在transfection以后的48h。在文化上层清液以内的HBV染色体的数字显著地也被减少48h和由荧光PCR确定了的72hpost-transfection(P<0.05)。结论:在HepG2.2.15房间,HBV复制和表示被指向编码区域的HBVX的基于向量的siRNApGenesil-HBVX禁止。
简介:Abstract:TheP24antigentest,HIVRNAPCRtest,HIVisolation/cultureandfourth-generationHIVuniformAg/AbassayarebeingutilizedindiagnosingacuteHIVinfectionindifferentlabs.ManyfactorslimittheuseofscreeningforacuteHIVinhigh-riskpopulations,inblooddonorsandduringvoluntaryHIVtesting,including,cost,technique,sensitivityandspecificity.InthisreviewweexploreanewNAATmethodwhichinvolvesHIVRNART-PCRonpooledsamples.Thistechniqueisabletoscreenforacuteinfectionsinalargetestingvolumeandmayheusedasascreeningmethodinhigh-riskpopulationsandblooddonors.
简介:目的探讨原发性肝细胞癌RNA,DNA定量测定的临床意义。方法应用流式细胞分析技术。对64例原发性肝细胞癌(PHC)RNA,DNA含量进行定量分析。并对病人进行1-5.5年的随访。结果RNA指标和DNA指标对PHC的临床病理诊断符合率分别为93.7%和75.0%,RNA指标更敏感,双指标联合应用与临床病理诊断符合率为96.8%;DNA倍体与年龄,HCV感染密切相关(P<0.05)。与性别,AFP水平,HBsAg及瘤体大小无关;DI随组织学分级的增高而增加(P<0.05)。RNA和DNA含量与预后密切相关(P<0.01-0.05)。结论RNA,DNA含量可作为PHC诊断及判断预后的理想指标,RNA及DNA双指标同时应用优于任一单项指标。
简介:目的观察整合素β1对人表皮干细胞(KSC)增殖与分化的影响。方法选择人整合素β1RNA干扰靶点特异性的寡核苷酸,连接到小干扰RNA(siRNA)表达质粒pSilencer3.1/H1上,将其转染到KSC中,并根据转染的方式将KSC分为非转染、转染空载体、转染si整合素β1-1、转染si整合素β1-2、转染siNegative5个部分。通过蛋白质印迹法检测各部分KSC整合素β1蛋白的表达水平,并筛选出最有效的阳性载体,将其命名为si整合素β1进行后续实验;通过逆转录聚合酶链反应检测各部分KSC整合素β1mRNA的表达水平,上述检测均重复测定5次。结果非转染、转染空载体的KSC不能抑制整合素β1蛋白的表达;转染si整合素β1-1、si整合素β1-2的KSC能够在蛋白水平抑制整合素β1的表达,并且后者效果强于前者,抑制效率达到60%-70%,将其命名为si整合素β1;si整合素β1使KSC中整合素β1mRNA水平明显下降,抑制效率约达70%。结论重组质粒转染KSC后可下调整合素β1mRNA及其蛋白的表达。
简介:目的探讨端粒酶RNA(hTR)和反转录酶(hTERT)在银屑病皮损中的表达情况以及它们与角质形成细胞增殖关系。方法应用原位杂交方法检测银屑病皮损hTR、hTERTmRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测Kj-67抗原表达,并对hTR、hTERTmRNA的表达与Ki-67抗原表达进行相关性分析。结果hTR表达在基底细胞、棘细胞、颗粒层细胞和所有有核细胞的胞浆,与细胞的增殖情况无关;其表达强度和阳性细胞百分率各组之间无明显差异(P〉0.05)。而hTERT的表达与细胞增殖状态有关,主要表达在基底细胞层和棘细胞层下方,表达强度和阳性细胞百分率要明显高于正常皮肤(P〈0.05)。Ki-67抗原主要表达在细胞生发层和分裂旺盛的组织;它的表达与hTERT的表达呈正相关(r=0.674,P〈0.01);而与hTR(r=-0.295,P〉0.05)无关。结论hTERTmRNA在银屑病皮损中的表达明显升高,与细胞增殖活性有关。hTR的表达和细胞增殖活性无关。
简介:AIM:Toinvestigatetheeffectsofc-mybantisenseRNAoncellproliferationandtheexpressionofc-myb,TGF-β1andα1-Ⅰcollageninculturedhepaticstellatecells(HSC)fromrats.METHODS:Recombinantretroviralvectorofc-mybantisensegene(pDOR-myb)wasconstructed,andthentransfectedintoretroviralpackagecelllinePA317bymeansofDOTAP.ThepseudovirusesproducedfromtheresistantPA317cellswereselectedwithG418toinfectHSCsisolatedfromratlivers.Thecellproliferationwasmeasuredby3-[4,5-Dimethylthiazolzyl]-2,5-diphenyltetrazo-diumbromide(MTT)method.Theexpressionofc-myb,α1-ⅠcollagenandTGF-β1rnRNA,andc-mybproteininHSCswasdetectedwithsemi-quantitivereversetranseription-polymerasechainreaction(RT-PCR)andWestern-blotrespectively.RESULTS:HSCsfromratswereisolatedsuccessfullywiththeviability>98%.InthepDOR-mybinfectedHSCs,thecmybproteinexpression,cellproliferation,andα1-ⅠcollagenandTGF-β1mRNAexpressionwererepressedsignificantlycomparedwiththeircorrespondingcontrolgroups(P<0.01).CONCLUSION:c-mybplaysakeyroleinactivationandproliferationofHSC.c-mybantisenseRNAcaninhibitcellproliferation,α1-ⅠcollagenandTGF-β1mRNAexpression,suggestingthatinhibitionofc-mybgeneexpressionmightbeapotentialwayforthetreatmentofliverfibrosis.