简介:摘要目的探讨K-ras基因对PM2.5染毒人支气管上皮(HBE)细胞部分癌基因和抑癌基因表达的影响。方法于2019年9月,根据K-ras基因mRNA序列,设计合成干扰序列,转染HBE细胞构建K-ras基因沉默细胞。用10、50 μg/ml PM2.5混悬液及10 μmol/L Cr6+分别染毒HBE细胞和K-ras基因沉默细胞,实时荧光定量PCR检测c-myc、c-fos、N-ras、cyclin-D1、p16、p53基因的mRNA表达水平,Western blot检测c-myc和p53蛋白表达水平。结果K-ras基因沉默细胞中K-ras基因mRNA表达水平下降(80.5%±3.6%),K-ras蛋白表达水平下降(58.9%±4.7%)(P<0.01)。各浓度PM2.5染毒HBE细胞组、K-ras沉默细胞组及10 μmol/L Cr6+染毒HBE细胞组、K-ras沉默细胞组c-myc、c-fos、N-ras、cyclin-D1基因mRNA表达水平均高于未染毒相应细胞对照组,p16和p53基因mRNA表达水平低于未染毒相应细胞对照组(P<0.01);10 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-myc、c-fos、p16基因mRNA表达水平低于10 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组,p53基因mRNA表达水平高于10 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组(P<0.01);50 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-fos、N-ras、cyclin-D1、p16和p53基因mRNA表达水平均低于50 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组(P<0.01)。50 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒HBE细胞组,p53蛋白表达水平低于未染毒HBE细胞组(P<0.05);50 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒K-ras沉默细胞组(P<0.05)。结论PM2.5可引起HBE细胞癌基因表达升高,K-ras基因沉默能抑制PM2.5诱导HBE细胞癌基因的表达。
简介:摘要目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)长期作用于永生化人支气管上皮细胞(HBE细胞)致其恶性转化过程中,核因子-E2相关因子2(Nrf2)对细胞凋亡的调控作用。方法用含0.0和1.0 μmol/L NaAsO2的培养基培养HBE细胞,分别为对照组和染砷组。用含1.0 μmol/L NaAsO2处理HBE细胞至43代,建立恶性转化模型。检测细胞染砷后不同代数(0、1、8、15、22、29、36、43代)各指标的动态变化,包括用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白和Nrf2蛋白的表达情况。用Nrf2小干扰RNA(siRNA)转染恶性转化的HBE细胞(T-HBE细胞)来沉默Nrf2,验证Nrf2蛋白的沉默效果,并检测凋亡率和凋亡相关蛋白的表达。结果随着染砷代数增加,HBE细胞凋亡率呈下降趋势(0、1、8、15、22、29、36、43代分别为0.370 ± 0.029、0.443 ± 0.069、0.357 ± 0.046、0.330 ± 0.016、0.273 ± 0.050、0.160 ± 0.024、0.110 ± 0.022、0.097 ± 0.012,F趋势 = 22.981,P < 0.05),与0代细胞比较,第22、29、36、43代细胞的凋亡率均较低,差异均有统计学意义(P均< 0.05)。随着染砷代数增加,染砷组细胞促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、活化的caspase-3(cleaved-caspase-3)、转录因子C/EBP的同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)的表达均呈下降的趋势(F趋势 = 22.356、3.738、6.130、8.061,P均< 0.05),抗凋亡蛋白髓样细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、Bcl-2蛋白表达呈上升趋势(F趋势 = 58.201、7.691,P均< 0.05)。分别与0代和同代对照组细胞比较,22代及以后染砷组细胞caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达,15代及以后染砷组细胞CHOP、Mcl-1、Bcl-2蛋白表达,29代及以后染砷组细胞Bax蛋白表达,差异均有统计学意义(P均< 0.05);而各代染砷组细胞caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-12和cleaved-caspase-12蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均> 0.05)。分别与0代和同代对照组细胞比较,8代及以后染砷组细胞Nrf2蛋白表达差异均有统计学意义(P均<0.05)。与Con siRNA(对照)转染组T-HBE细胞比较,Nrf2 siRNA转染组T-HBE细胞的凋亡率较高(P < 0.05)。与Con siRNA转染组T-HBE细胞比较,Nrf2 siRNA转染组T-HBE细胞的Nrf2、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达均较低(P均< 0.05),cleaved-caspase-3/caspase-3、caspase-3、cleaved-caspase-3、CHOP、Bax蛋白表达均较高(P均< 0.05)。结论Nrf2可能通过Bcl-2、Mcl-1和Bax调控线粒体凋亡途径、通过CHOP调节内质网凋亡途径,抑制HBE细胞的凋亡,参与NaAsO2致HBE细胞恶性转化的过程。
简介:[摘 要]:无梁楼盖是一种对施工和使用非常友好的楼盖体系,经常应用于对净空、层高比较敏感的地下室楼板和多层商业、办公楼中,但是无梁楼盖的实际应用受到了规范、软件以及频繁发生的工程事故的影响,应用一度受到限制。本文介绍了一种在美国广泛应用的抗剪切栓钉,并比较了中美规范对于抗冲切验算的差异,在建筑劳务用工日趋紧张的大环境下,重新评价无梁楼盖的可靠性、经济性和适用性。
简介:摘要 本文通过对目前建筑工程结构设计工作中,抗浮设计的总结,使我们结构设计人员能掌握这些内容的设计方法、在满足相关规范要求的前提下顺利完成此部分内容的结构施工图工作。
简介:摘要:在抗击新冠肺炎疫情表彰大会上,习近平总书记对伟大抗疫精神作出深刻概括:“生命至上、举国同心、舍生忘死、尊重科学、命运与共。”在抗疫实践中,中国共产党始终坚持以马克思主义的基本理论作为行动指南,运用马克思主义立场观点方法来解决中国抗疫实际问题,与人民一道共历共创,形成了抗疫精神这一宝贵精神结晶。抗疫精神体现了马克思主义与时俱进的鲜明品质,蕴藏着丰富深刻的哲学智慧,是新时代中国精神的生动诠释和闪亮标识。
简介:摘要:随着经济发展和城市化建设步伐的加快,庞大的地下公共管线形成了交错复杂的蜘蛛网,在城市的扩张与改造中旧有的管线及缆线错综复杂,给城市建设带来很大的不便,建设综合管廊可以有效解决此类问题。城市地下综合管廊为地下构筑物,其防水的要求较其他建筑物较高,在设计和施工中需重点考虑。综合管廊主体结构防渗原则是“以防为主,多道防线,截、堵结合,刚柔相济”因地制宜,综合治理。主要通过采用防水混凝土、合理的级配、优质的外加剂、合理的分缝、科学的细部处理来解决综合管廊钢筋混凝土主体的防渗。本文依托于某市政综合管廊工程,主要介绍针对选择优质的外加剂,确定合理的级配,以及在施工技术中的研究与应用。