简介:摘要目的研究曲古抑菌素A(TSA)、紫杉醇(TAX)单独和合用对人宫颈鳞癌Caski细胞系细胞生长和侵袭的作用及对E-钙粘蛋白(E-cad)表达的影响。方法体外培养人宫颈鳞癌Caski细胞系细胞,选择适宜浓度的TSA和TAX作用于Caski细胞,Transwell小室体外侵袭实验检测24小时后对Caski细胞侵袭能力的影响,RT-PCR法检测24小时后E-cad基因的表达。结果(1)Transwell体外侵袭实验结果显示TSA和TAX均可抑制Caski细胞的侵袭能力,两药合用能增强对Caski细胞的侵袭抑制作用。(2)RT-PCR法结果显示TSA和TAX联合能增强TAX对E-cad基因的表达。结论TSA能抑制人宫颈鳞癌Caski细胞的生长,TSA和TAX联用能增强TAX对Caski细胞的侵袭抑制作用,TSA和TAX对Caski细胞的抑制作用与E-cad基因表达上调有关,其作用机制可能与诱导上皮间质转移相关。
简介:目的:构建大鼠CB1(rCB1)基因真核表达载体,检测rCB1基因在细胞中的表达,研究rCB1对人宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增rCB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA3.1(+)质粒,构建pcDNA3.1(+)-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和CaSki细胞,Westernblot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测rCB1的表达及定位,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Westernblot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300bp的载体片段和1500bp的目的片段,测序结果和rCB1基因序列(NM_012784.4)一致。转染HEK293细胞后,rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染CaSki细胞后,rCB1使细胞凋亡率增加(P<0.05);rCB1基因上调Bax、Bad的表达,同时抑制Bcl-2的表达,与空白组比较,其差异具有显著性(P<0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-rCB1真核表达载体,rCB1表达于细胞膜和细胞质,rCB1可以明显促进宫颈癌CaSki细胞凋亡,其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。
简介:摘要目的探讨miR-199a-5p对宫颈癌CaSki细胞放射敏感性的影响及潜在机制。方法体外培养宫颈癌CaSki细胞。采用脂质体Lipofectamine 2000将miR-199a-5p模拟物(miR-199a-5p mimics)转染至宫颈癌CaSki细胞,记为miR-199a-5p组,以转染模拟物对照(mimics control)的CaSki细胞为阴性对照(NC组),以未转染的CaSki细胞为空白对照(Control组),各组细胞经X射线照射后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-199a-5p的表达量,通过克隆形成实验和流式细胞凋亡实验检测miR-199a-5p对CaSki细胞放射敏感性和凋亡的影响,使用生物信息学软件预测miR-199a-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验和蛋白免疫印迹(Western blot)验证miR-199a-5p和甲状腺激素受体相互作用因子4(TRIP4)的靶向关系。结果转染miR-199a-5p mimics后,miR-199a-5p组中miR-199a-5p的表达量显著高于Control组(P<0.05),经X射线照射后,miR-199a-5p过表达更明显(P<0.05);过表达miR-199a-5p降低CaSki细胞克隆形成能力(P<0.05),促进CaSki细胞的凋亡;且过表达miR-199a-5p能够进一步降低放射后细胞的克隆形成,并促进放射后细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实了miR-199a-5p能够靶向负调控TRIP4。结论miR-199a-5p可通过靶向负调控TRIP4的表达提高宫颈癌CaSki细胞的放射敏感性。
简介:摘要目的探讨miR-199a-5p对宫颈癌CaSki细胞放射敏感性的影响及潜在机制。方法体外培养宫颈癌CaSki细胞。采用脂质体Lipofectamine 2000将miR-199a-5p模拟物(miR-199a-5p mimics)转染至宫颈癌CaSki细胞,记为miR-199a-5p组,以转染模拟物对照(mimics control)的CaSki细胞为阴性对照(NC组),以未转染的CaSki细胞为空白对照(Control组),各组细胞经X射线照射后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-199a-5p的表达量,通过克隆形成实验和流式细胞凋亡实验检测miR-199a-5p对CaSki细胞放射敏感性和凋亡的影响,使用生物信息学软件预测miR-199a-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验和蛋白免疫印迹(Western blot)验证miR-199a-5p和甲状腺激素受体相互作用因子4(TRIP4)的靶向关系。结果转染miR-199a-5p mimics后,miR-199a-5p组中miR-199a-5p的表达量显著高于Control组(P<0.05),经X射线照射后,miR-199a-5p过表达更明显(P<0.05);过表达miR-199a-5p降低CaSki细胞克隆形成能力(P<0.05),促进CaSki细胞的凋亡;且过表达miR-199a-5p能够进一步降低放射后细胞的克隆形成,并促进放射后细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实了miR-199a-5p能够靶向负调控TRIP4。结论miR-199a-5p可通过靶向负调控TRIP4的表达提高宫颈癌CaSki细胞的放射敏感性。
简介:摘要目的探讨miRNA-5193(miR-5193)对子宫颈癌Caski细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定子宫颈癌细胞株C33A、SiHa、Caski和正常子宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-5193的表达水平。将Caski细胞分成对照组(不转染,正常培养)、miR-5193阴性对照(miR-NC)组(转染miR-NC模拟物)、miR-5193组(转染miR-5193模拟物)、miR-NC+顺铂组(10 μg/ml顺铂处理转染miR-NC模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂组(10 μg/ml顺铂处理转染miR-5193模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂+NC组(10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3阴性对照载体、miR-5193模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂+Foxp3组(10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3过表达载体和miR-5193模拟物的细胞)。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况;流式细胞术PI单染法检测细胞周期,Annexin V- FITC/PI双染法检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞CDK2、p27、C-caspase-3蛋白表达。应用生物信息学软件预测miR-5193靶基因,采用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果子宫颈癌C33A、SiHa、Caski细胞中miR-5193相对表达量均低于正常子宫颈Ect1/E6E7细胞(0.56±0.06、0.41±0.03、0.23±0.02比1.00±0.10,均P<0.05)。与对照组、miR-NC组比较,miR-5193组、miR-NC+顺铂组、miR-5193+顺铂组细胞增殖活性(吸光度值)降低(0.58±0.06、0.59±0.07比0.38±0.04、0.40±0.05、0.23±0.02,均P<0.05),细胞凋亡率升高[(2.5±0.2)%、(2.7±0.3)%比(12.6±1.2)%、(11.9±1.5)%、(18.9±1.7)%,均P<0.05],G0/G1期细胞比例升高[(50.4±4.2)%、(51.3±6.3)%比(62.3±3.2)%、(61.9±5.8)%、(71.4±5.4)%,均P<0.05],p27、C-caspase-3蛋白表达水平升高,CDK2蛋白表达水平下降。软件预测miR-5193靶基因为Foxp3,并由荧光素酶报告系统确认。与miR-5193+顺铂+NC组相比,miR-5193+顺铂+Foxp3组细胞增殖活性(吸光度值)升高(0.24±0.03比0.65±0.05,t=21.094,P<0.01),G0/G1期细胞比例降低[(71.0±6.4)%比(60.3±4.1)%,t=4.196,P<0.01],细胞凋亡率降低[(19.6±1.6)%比(11.5±1.2)%,t=11.880,P<0.01],细胞中p27、C-caspase-3蛋白表达水平下降,CDK2、Foxp3蛋白表达水平升高。结论体外miR-5193可能通过靶向抑制Foxp3基因提高子宫颈癌Caski细胞对顺铂的敏感性。
简介:摘要目的探讨miRNA-186-3p(miR-186-3p)对子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及与转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的关系。方法将载有miR-186-3p抑制基因、miR-186-3p模拟物的质粒分别转染至子宫颈癌CaSki细胞,分别为miR-186-3p-I组、miR-186-3p-M组;另将转染空载质粒的CaSki细胞作为对照,为miR-186-3p-C组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹法检测各组细胞TGF-β-Smad信号通路相关蛋白表达水平;采用Starbase软件预测miR-186-3p靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果miR-186-3p-M组细胞凋亡率均低于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(7.5±3.2)%比(13.9±0.7)%、(12.7±0.6)%,均P<0.05]。miR-186-3p-M组迁移细胞数[(218±25)个比(168±13)个、(175±13)个,均P<0.001]和侵袭细胞数均多于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(165±21)个比(130±11)个、(142±12)个,均P<0.001]。miR-186-3p-M组TGF-β、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白相对表达量均最低,与另两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。采用Starbase软件预测miR-186-3p与XIST RNA互补结合;双荧光素酶报告基因实验显示,XIST野生型载体+miR-186-3p模拟物质粒共转染的细胞相对荧光素酶活性低于XIST野生型载体+miR-186-3p空载质粒共转染的细胞(P<0.001)。结论miR-186-3p可能直接与XIST RNA结合而下调TGF-β-Smad信号通路活性,进而增强子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭活性。
简介:目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-timePCR检测p16、cyclinD1和CDK4mRNA表达水平;Westernblot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。结果:RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖,其作用24h的IC50值为12.33μmol/L;升高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达,降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值,上调p16的mRNA表达,下调cyclinD1和CDK4的mRNA表达。结论:RCE-4可抑制Caski细胞的增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路激活有关。
简介:摘要母细胞性浆细胞样树突细胞瘤(BPDCN)是一种非常罕见的血液系统恶性肿瘤,全世界报道儿童病例不足百例。BPDCN临床进展呈高度侵袭性,极易累及骨髓,复发率高,中位生存期不足2年。BPDCN尚无标准治疗方案,多采用化疗联合造血干细胞移植的综合治疗方案。为了提高对BPDCN的认识,本文对BPDCN的临床表现、诊断和治疗进展、预后以及儿童病例特点进行综述。