简介:摘要目的本研究旨在探讨绝经后女性骨质疏松症(osteoporosis,OP)中分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein-2,SFRP2)基因DNA甲基化对转录和蛋白表达的影响,及miR-152-3p对SFRP2基因甲基化水平调控的分子机制。方法选择2017年9月至2020年9月于衡水市人民医院骨科就诊的绝经后OP患者作为研究对象,并纳入同期在本院进行体检的200例自然绝经健康女性作为对照组。定量检测OP患者和对照组的SFRP2基因甲基化水平;采用定量实时聚合酶联反应检测SFRP2基因mRNA和miRNA-148a的相对表达量;使用酶联免疫吸附测定法检测SFRP2和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)的蛋白表达水平;使用miRNA-152-3p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)处理SD大鼠成骨细胞,检测DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平。结果OP组的SFRP2基因甲基化水平为(3.87±0.76)%,显著低于对照组(6.36±1.44)%(t=4.632,P<0.001);OP组的SFRP2基因mRNA表达量为3.35±0.79,显著高于对照组(2.28±0.52)(t=4.858,P<0.001);OP组的SFRP2基因蛋白表达水平为(4.15±0.62)pg/ml,显著高于对照组(2.83±0.51)pg/ml(t=4.858,P<0.001);OP组的miRNA-152-3p相对表达量为(3.14±0.76),显著高于对照组(1.63±0.51)(t=5.318,P<0.001);SD大鼠成骨细胞转染miR-152-3p后,mimic组的DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平显著降低,inhibitor组的DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平显著升高(P<0.001)。结论miR-152-3p可通过DNMT1调控SFRP2基因甲基化水平并参与OP的发生发展。
简介:摘要目的探讨miR-124-3p和miR-506-3p在蛋白C(protein C,PROC)降低中的作用及机制。方法将PROC 3'-UTR野生型(PROCwt)和PROC 3'-UTR突变型(PROCmut)克隆构建到含萤火虫荧光素酶报告质粒中(Luc-PROCwt和Luc-PROCmut),利用双荧光素酶报告体系检测相对荧光素酶酶活性,明确miR-124-3p和miR-506-3p与PROC的靶基因关系及其紧密性。将miR-124-3p mimics和miR-506-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至HL-7702细胞,检测对照组(NC)、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组的细胞增殖率,PROC mRNA表达水平,PROC、COX-2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平和细胞凋亡水平,并采用单因素和双因素方差分析比较各组间的差异。结果双荧光素酶报告体系检测显示,NC+Luc-PROCwt组、miR-506-3p+Luc-PROCwt组、miR-124-3p+Luc-PROCwt组、NC+Luc-PROCmut组、miR-506-3p+Luc-PROCmut组和miR-124-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性分别为6.98±0.07、2.01±0.05、2.67±0.06、8.13±0.26、6.91±0.14和8.41±0.13。与NC+Luc-PROCwt组相比,miR-506-3p+Luc-PROCwt组与miR-124-3p+Luc-PROCwt组的荧光素酶活性均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.01);与NC+Luc-PROCmut组相比,miR-506-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显降低,miR-124-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显升高,组间比较,差异亦均有统计学意义(P<0.01和P=0.018 1)。CCK-8检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组96 h时细胞增殖率分别为0.506±0.016、0.323±0.021、0.329±0.011、0.570±0.007和0.562±0.007。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞增殖率均有所下降,组间差异均有统计学意义(P均<0.01);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞增殖率均有所上升,组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达量分别为1.00±0.08、0.31±0.09、0.34±0.04、1.73±0.28和1.75±0.36。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组PROC mRNA表达水平均明显降低,组间差异均有统计学意义(P=0.002 6和0.003 2);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达水平均明显上升,组间差异亦均有统计学意义(P=0.001 8和0.001 6)。Western-blot检测显示,与NC组相比,miR-506-3p组与miR-124-3p组PROC与Bcl-2蛋白表达水平下调,COX-2和Bax蛋白表达水平上调;miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC与Bcl-2蛋白表达水平上调,COX-2和Bax蛋白表达水平下调。Annexin V-FITC/PI检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率分别为(10.27±0.57)%、(21.50±1.44)%、(13.52±0.40)%、(1.12±0.08)%和(7.63±0.40)%。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞凋亡率均明显升高,组间差异均有统计学意义(P均<0.01);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率均明显降低,组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。结论PROC是miR-506-3p和miR-124-3p的靶基因,miR-506-3p和miR-124-3p可能通过抑制肝细胞增殖、促进肝细胞凋亡和抑制PROC mRNA表达引发PROC蛋白表达水平降低。
简介:摘要目的通过采集肿瘤患者放疗前后外周血,探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响,以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法,检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化,分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果放疗后,患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t=4.97,Z=-2.77,P<0.05)。不同的肿瘤类型中,乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t=3.47、2.47、2.87,P<0.05),消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z=-1.99,P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05),而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t=2.04、-3.34、-2.29,P<0.05)。结论放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达,其有作为辐射生物学标志物的潜力。
简介:目的:研究miR-152分子对NK细胞杀伤JEG-3细胞效应的影响。方法:在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre-miRNA-control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h进行NK细胞的细胞毒测定,观察各组NK细胞对JEG-3细胞的杀伤效应。结果:与对照组相比,实验组NK细胞对JEG-3细胞的平均杀伤率显著增高(P〈0.05),且随着效靶比的增高,杀伤率也增大。空白对照组与阴性对照组之间的NK细胞杀伤能力无显著差异(P〉0.05)。结论:miR-152可以提高NK细胞对滋养细胞的杀伤作用。
简介:摘要目的探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料,根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例),SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血,采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28,1.94±0.85比0.51±0.12,P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92,2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45,P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40,3.62±1.37比2.08±0.91,P值均<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95%CI0.886~0.997)比0.860(95%CI0.797~0.924)、0.822(95%CI0.765~0.880)],其灵敏度为98.3%,特异度为84.6%。相关分析显示,SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关(r=0.835,P<0.001)。结论AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高,两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。
简介:摘要目的探讨miR-605-3p是否影响肺癌细胞A549的增殖和细胞活力。方法转染合成的miR-605-3p模拟物过表达miR-605-3p为过表达组,转染合成的miR-605-3p抑制剂敲低miR-605-3p为敲低组,通过CCK-8和MTT检测2组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。通过miRDB在线分析miR-605-3p潜在底物,并通过荧光素酶报告实验验证并分析潜在底物的作用。结果过表达组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均下降(t=12.45、15.38,P值均<0.05);敲低组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均上升(t=11.54、8.45,P值均<0.05)。miR-605-3p靶向TRIB3的3′端非编码区(t=17.32,P值均<0.05)。过表达TRIB3后,肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均上升(t=10.45、9.04,P值均<0.05)。敲低TRIB3后,肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均下降(t=8.43、17.43,P值均<0.05)。过表达miR-605-3p后,TRIB3的表达下降,β-catenin进入细胞核的量减少;敲低miR-605-3p后,TRIB3的表达上升,β-catenin进入细胞核的量增加。同时敲低miR-605-3p和TRIB3或miR-605-3p和β-catenin,发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t=0.42、0.61,P值均>0.05);过表达TRIB3的同时敲低β-catenin,发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t=0.56、0.21,P值均>0.05)。结论miR-605-3p靶向TRIB3抑制β-catenin的入核水平,抑制肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。
简介:摘要miR-142-3p是一种长约19~24核苷酸的短链非编码小RNA,通过转录后调控的方式广泛参与机体疾病的发生、发展进程,参与调控炎症反应及免疫细胞功能,与炎症性疾病如骨关节炎、脓毒症及免疫相关性疾病多发性硬化、系统性红斑狼疮等相关,并可以通过外泌体运输至靶组织,miR-142-3p有望成为免疫炎症性疾病治疗的新靶点。
简介:microRNA是一种内源性非编码小RNA,通过与靶mRNA的序列互补配对的方式调节靶mRNA的翻译。microRNA多导致靶mRNA翻译受抑,甚至导致靶mRNA降解而失去功能,从而使相应的基因表达受影响。miR-409-3p在胃癌组织中呈低表达,并与胃癌的浸润深度和淋巴结转移成负相关。本篇综述重点阐述其在胃癌的增殖、侵袭、转移的过程中出现的变化和相应发挥的作用,以期为胃癌的诊断及治疗提供新思路。
简介:摘要目的探讨血浆微小RNA-21-3p(miR-21-3p)和miR-551-5p表达水平对急性胰腺炎(AP)的诊断及预后预测的价值。方法采用前瞻性观察性研究,选择2017年1月1日至2019年12月31日海南省第三人民医院收治的AP患者作为研究对象。根据病情严重程度将患者分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组和重症急性胰腺炎(SAP)组,均于入院次日采集空腹静脉血,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆miR-21-3p及miR-551-5p表达水平。以患者康复出院或死亡作为研究终点。另外以同期50例健康体检者作为健康对照组。用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平对SAP诊断及预后评估的价值。采用Pearson法分析SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平的相关性。结果共入选164例AP患者,其中MAP 72例,MSAP 47例,SAP 45例。SAP患者中存活27例,死亡18例;MAP组和MSAP组无死亡病例。AP患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于健康对照组〔miR-21-3p(2-ΔΔCt):2.17±0.90比0.65±0.12,miR-551-5p(2-ΔΔCt):1.80±0.73比0.42±0.08,均P<0.01〕;且随病情程度加重,患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平逐渐升高(F值分别为11.635、10.204,均P<0.01),SAP组血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平明显高于MSAP组和MAP组〔miR-21-3p(2-ΔΔCt):3.16±1.08比1.85±0.71、1.70±0.64,miR-551-5p(2-ΔΔCt):2.63±0.95比1.52±0.46、1.36±0.40,均P<0.01〕。ROC曲线分析显示,miR-21-3p与miR-551-5p联合诊断SAP的ROC曲线下面积(AUC)和95%可信区间(95%CI)明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.898(0.841~0.960)比0.820(0.763~0.882)、0.806(0.748~0.867),Z1=4.480、Z2=4.916,均P<0.05〕,其敏感度为90.7%,特异度为85.0%。SAP死亡组患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于存活组〔miR-21-3p(2-ΔΔCt):3.75±1.17比2.66±0.87,miR-551-5p(2-ΔΔCt):3.17±1.04比2.24±0.83,均P<0.01〕。ROC曲线分析显示,miR-21-3p与miR-551-5p联合预测SAP患者死亡的AUC和95%CI明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.933(0.875~0.996)比0.856(0.794~0.917)、0.816(0.759~0.874),Z1=4.395、Z2=5.520,均P<0.05〕,其敏感度为95.2%,特异度为87.5%。相关性分析显示,SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平呈显著正相关(r=0.827,P<0.001)。结论血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平升高与AP患者病情严重程度呈正相关,二者联合检测对SAP诊断和预后评估具有较好的价值。
简介:摘要:近年来,随着恶性肿瘤对人类健康的危害越来越大,在基因水平上对恶性肿瘤进行研究成为新的突破点。微小RNA(microRNA,miRNA)被证实与恶性肿瘤的发生及发展有关。本文就miR-520a-3p在各种恶性肿瘤中的表达、作用及调控机制作一简要综述。
简介:摘要目的探讨术前检测前列腺癌患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平对预测术后复发转移的价值。方法选择2016年10月至2019年10月平煤神马医疗集团总医院收治的120例前列腺癌患者作为研究对象。按照在随访期内是否出现复发转移分为复发转移组(47例)与术后未复发转移组(73例)。比较两组患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平;分析术后复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p的表达水平与临床病理学特征之间的关系;分析血清miR-148a-3p及miR-139-5p水平在预测前列腺癌术后复发转移的受试者工作特征曲线图。结果术后复发转移组血清miR-148a-3p及miR-139-5p相对表达水平均高于术后未复发转移组(P均<0.05)。术后复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平与肿瘤TNM分期、Gleason评分均具有显著的相关性(P均<0.05)。miR-148a-3p及miR-139-5p两项指标绘制受试者工作特征曲线分析结果表明,两项指标曲线下面积差异均有统计学意义(P均<0.01)。miR-148a-3p表达水平取4.45 ng/ml时的敏感度为91.5%,特异度为83.2%;miR-139-5p表达水平取7.34 ng/ml时的敏感度为73.5%,特异度为79.2%。结论术后复发转移前列腺癌患者术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p相对表达水平显著上升,且与TNM分期、Gleason评分呈正相关,二者在预测前列腺癌术后复发转移中的敏感度及特异度均较好,对临床评估前列腺癌患者预后状况具有一定的价值。
简介:摘要目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织miR系列基因表达水平与手术疗效的相关性。方法分别收集2013年10月至2017年4月的同时收集25例NSCLC手术患者的癌组织和癌旁组织冰冻样本,以及手术前和手术后2周的血清样本。组织totalRNA抽提使用ThemirVanamiRNAIsolationKit(Ambion,Austin,Texas,USA)。血清的totalRNA使用microRNAsIsolationKit(AppliedBiosystems,ForsterCity,CA,USA)抽提。totalRNA溶于DEPC处理水中,零下80度保存。RNA浓度使用Nanodrop2100(NanoDrop,Wilmington,DE)测量。采用qRT-PCR方法检测NSLCLC患者手术前、后血清miR系列基因表达水平,判断血清miR系列基因表达水平与手术效果的关系。结果NSLCLC患者的组织中miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1基因表达与癌旁组织存在显著差异(P<0.01)。NSLCLC患者手术后的血清miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1基因表达与手术前存在明显差异(P<0.05)。结论miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1基因表达水平在NSCLC患者癌组织内明显升高,手术切除后血清基因表达明显下降。血清miR系列基因有可能成为预测NSCLC手术预后的分子标志物。
简介:摘要目的探讨miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞凋亡与增殖的影响。方法获取并培养大鼠原代星形胶质细胞,将miR-301a-3p agomir以及antagomir分别转染至细胞。分Blank组、miR-NC对照组、miR-301a组、antagomir组,每组设3个复孔,每孔2×105个细胞,CCK8实验检测各组细胞的增殖能力变化;用流式细胞术及Caspase-3活性检测分析细胞凋亡的情况。结果与Blank组(48 h:0.83±0.09;72 h:1.20±0.21;96 h:1.65±0.17)和miR-NC组(48 h:0.79±0.10;72 h:1.12±0.25;96 h:1.60±0.15)相比,miR-301a组(48 h:1.16±0.07;72 h :1.56±0.11;96 h:2.13±0.14)细胞的增殖能力显著提高(P<0.05),miR-301a组细胞的凋亡率显著下降(Blank组:10.44±1.33,miR-NC组:9.84±1.40,miR-301a组:4.32±0.51,P<0.05);而antagomir组(48 h:0.52±0.12;72 h:0.72±0.09;96 h:1.01±0.15)细胞转染后增殖能力较Blank组和miR-NC组显著降低(P<0.05),antagomir组细胞的凋亡率显著升高(Blank组:10.44±1.33,miR-NC组:9.84±1.40,antagomir组:21.41±2.57,P<0.05)。结论miRNA-301a-3p过表达促进大鼠星形胶质细胞的增殖,抑制细胞的凋亡通路,降低细胞的凋亡,从而调控大鼠星形胶质细胞的生物学功能。
简介:背景:研究发现miR-142-3p低表达于多种肿瘤组织和细胞系中,并且有研究发现TUG1/miR-142/ZEB2轴可抑制膀胱癌增殖并诱导其凋亡。目的:观察miR-142-3p在膀胱癌干细胞中的表达水平,探讨其对S1PR3的靶向调控作用及对膀胱癌干细胞干性的影响。方法:从新鲜人膀胱癌组织中分离培养原代膀胱癌细胞,采用流式细胞仪筛选出CD44^+细胞与CD44~-细胞,Western-blot检测2种细胞中Nanog、Oct4蛋白的表达,qRT-PCR检测2种细胞中miR-142-3p基因的表达。将miR-142-3pmimic(实验组)、miR对照质粒(对照组)分别转染至CD44^+细胞,48h后,采用MTS实验检测细胞增殖能力,软琼脂克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组细胞转移能力,Western-blot检测细胞中pPi3k和pAkt蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中S1PR3基因表达。将稳定转染的2种细胞分别注射至裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)右侧腋下,4周后检测肿瘤体积。将S1PR3-突变型+miR-142-3pmimic、S1PR3-突变型+miR对照质粒、S1PR3-野生型+miR-142-3pmimic、S1PR3-野生型+miR对照质粒分别转染至CD44^+细胞,48h后检测各组荧光素酶活性。结果与结论:①CD44v+细胞中miR-142-3p基因表达显著低于CD44-细胞(P<0.05);CD44^+细胞中Nanog、Oct4蛋白表达显著高于CD44^-细胞,证实CD44^+细胞为膀胱癌干细胞;②实验组膀胱癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力及转移能力明显低于对照组(P<0.05);③实验组膀胱癌干细胞中pPi3k和pAkt蛋白表达弱于对照组,S1PR3基因表达低于对照组(P<0.05);④实验组裸鼠体内肿瘤体积小于对照组(P<0.05);⑤与相比,S1PR3-突变型+miR-142-3pmimic组荧光素酶活性显著低于S1PR3-突变型+miR对照质粒组(P<0.05),S1PR3-野生型+miR对照质粒组和S1PR3-野生型+miR-142-3pmimic组荧光素酶活性无差异(P>0.05);⑥结果表明,miR-142-3p在膀胱癌干细胞中低表达,其可能通过负调控S1PR3下调PI3K/AKT�
简介:MicroRNAs(miRNAs)aresmall,non-codingRNAsthatnegativelyadjustgeneexpressioninmultifariousbiologicalprocesses.However,theregulatoryeffectsofmiRNAsonSchwanncellsremainpoorlyunderstood.PreviousmicroarrayanalysisresultshaveshownthatmiRNAexpressionisalteredfollowingsciaticnervetransaction,therebyaffectingproliferationandmigrationofSchwanncells.ThisstudyinvestigatedwhethermiR-148b-3pcouldregulatemigrationofSchwanncellsbydirectlytargetingcullin-associatedandneddylation-dissociated1(Cand1).Up-regulatedexpressionofmiR-148b-3ppromotedSchwanncellmigration,whereassilencingofmiR-148b-3pinhibitedSchwanncellmigrationinvitro.FurtherexperimentsconfirmedthatCandlwasadirecttargetofmiR-148b-3p,andCandlknockdownreversedsuppressionofthemiR-148b-3pinhibitoronSchwanncellmigration.TheseresultssuggestedthatmiR-148b-3ppromotedmigrationofSchwanncellsbydirectlytargetingCandlinvitro.
简介:摘要目的探讨微小RNA(miRNA)-4795-3p通过靶基因表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制胃癌细胞增殖和侵袭。方法本研究于2020年6月至12月分别转染阴性对照模拟物(阴性对照组)和miR-4795-3p模拟物(miR-4795-3p组)至胃癌BGC823细胞。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检验转染效率。淋巴细胞增殖检测(MTS)法和Transwell实验检测BGC823细胞的增殖情况及侵袭能力。生物信息学软件miRcode预测miR-4795-3p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-4795-3p与靶基因的结合。qRT-PCR和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测靶基因的表达。采用SPSS 21.0软件分析数据,组间比较应用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果miR-4795-3p组和阴性对照组BGC823细胞中miR-4795-3p表达分别为(1.02±0.11)和(11.04±1.23),阴性对照组miR-4795-3p表达明显低于miR-4795-3p组(t=8.14,P<0.01)。与阴性对照组比较,miR-4795-3p组BGC823细胞吸光度值明显下降(P<0.05),细胞侵袭数明显减少(P<0.01)。miR-4795-3p与EGFR存在互补结合位点,miR-4795-3p可互补结合EGFR(P<0.01)。与阴性对照组比较,miR-4795-3p组BGC823细胞中EGFR表达明显降低(P<0.01)。结论miR-4795-3p通过靶向负调控EGFR抑制胃癌BGC823细胞的增殖和侵袭能力。
简介:摘要目的研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒,通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数;免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状病毒蛋白表达情况的影响;Western blot分析miR-125b-1-3p参与调控的相关蛋白表达情况。结果轮状病毒感染细胞后,miR-125b-1-3p的表达水平明显上调,上调miR-125b-1-3p后,轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数下降,下调miR-125b-1-3p后,轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数明显升高;上调miR-125b-1-3p的表达水平后轮状病毒蛋白荧光数下降,下调miR-125b-1-3p后,病毒蛋白荧光数增加;轮状病毒感染细胞16 h后PI3K/Akt通路活性受到抑制,上调miR-125b-1-3p能够抑制PI3K/Akt通路的活化。结论miR-125b-1-3p通过调控PI3K/Akt通路抑制轮状病毒的复制。研究结果为探讨miR-125b-1-3p和PI3K/Akt通路之间的具体调控机制研究提供了实验基础,为轮状病毒抗感染治疗提供了靶点。
简介:摘要目的检测过敏性哮喘患儿外周血微小核糖核酸-511-3p(miR-511-3p)表达水平,并分析其意义。方法本研究为病例对照研究。采用随机整群抽样法,选取徐州市儿童医院2019年4月至2021年4月收治的122例过敏性哮喘患儿,并于同时间段招募118名健康儿童志愿者,分别记为疾病组与健康组。2组均取外周血,采用实时逆转录-聚合酶链反应检测miR-511-3p表达并比较;比较疾病组不同哮喘严重程度患儿外周血miR-511-3p表达水平;比较2组血清炎症因子水平[白细胞介素10(IL-10)、IL-17、IL-22]、血清免疫球蛋白E(IgE)和全血嗜酸粒细胞(EOS)比率;采用Pearson法分析疾病组外周血miR-511-3p表达与血清炎症因子水平、IgE水平和全血EOS比率的相关性。结果疾病组外周血miR-511-3p表达水平低于健康组(t=10.13,P<0.05),且中度组和重度组哮喘患儿外周血miR-511-3p表达水平均低于轻度组哮喘患儿(t值分别为5.41、14.81,P值均<0.05),重度组哮喘患儿miR-511-3p表达水平低于中度组哮喘患儿(t=11.27,P<0.05);疾病组血清IL-17、IL-22、IgE水平和全血EOS比率均高于健康组(t值分别为34.22、28.03、43.63、44.17,P值均<0.05),血清IL-10水平低于健康组(t=23.59,P<0.05);疾病组外周血miR-511-3p表达水平与血清IL-17、IL-22、IgE水平和全血EOS比率均呈负相关(r值分别为-0.73、-0.80、-0.80、-0.82,P值均<0.05),与血清IL-10水平呈正相关(r=0.83,P<0.05)。结论过敏性哮喘患儿外周血miR-511-3p表达水平低,与病情严重程度有关,且与炎症反应、血清IgE水平和全血EOS比率均相关。