简介:摘要目的构建DNAJA1(DnaJheatshockproteinfamily(Hsp40)memberA1)基因过表达质粒,转染结肠癌细胞株,并对其是否转染成功进行鉴定。方法Real-time聚合酶链反应(PCR)及Westernblot检测6株结肠癌细胞及瞬时转染DNAJA1质粒的细胞中DNAJA1mRNA水平。采用全基因合成法合成DNAJA1编码区序列并克隆入pEGFP-C1载体末端,构建重组质粒pEGFP-C-DNAJA1并进行测序及凝胶电泳鉴定。结果6株结直肠癌细胞中,DNAJA1在HT29和HCT116中的mRNA和蛋白水平最较低,在LOVO和SW620细胞中较高。测序及凝胶电泳结果表明DNAJA1重组质粒构建成功。瞬时转染HT29和HCT116细胞后,与对照组相比,DNAJA1mRNA分别升高约50倍,蛋白表达也明显升高。结论成功构建DNAJA1基因过表达重组质粒,并有较高的转染水平,为进一步的研究提供了条件。
简介:摘要目的分析讨论革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的方法。方法对我院2012年3月-2013年3月间的革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本的细菌鉴定和药敏的方法进行归纳统计,用直接法上机鉴定药敏和常规法鉴定药敏,比较两种方法的鉴定、药敏符合率、发报告时间等。结果直接法和常规法两种方法的鉴定符合率分别100%、93.33%,药敏符合率分别为98.33%、96.67%,发报告时间分别为3-4d、5-6d,鉴定符合率两组相比较具有显著性差异,药敏符合率、发报告时间无显著性差异。结论革兰氏阳性球菌的鉴定相比较革兰氏阴性杆菌等的鉴定有些难度,程序复杂,鉴定的准确率也受到影响,使用全自动血培养仪鉴定药敏更为可靠、方便,但成本高,需要购买鉴定仪,这对于基层医院还是有难度。
简介:摘要目的应用无血清培养基分离U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞,并鉴定相关肿瘤标志物表达。方法体外培养人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞,免疫荧光检测U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞球中CD105表达。采用免疫印迹法检测人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞Nanog和Oct4蛋白表达。采用半定量PCR检测人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞SOX2、Nanog和Oct4mRNA的表达。结果荧光显微镜下可见,U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞球中部分细胞CD105呈阳性表达。免疫印迹检测结果显示人骨肉瘤U2OS细胞株的Nanog和Oct4蛋白相对表达量为0.853±0.404和0.603±0.153,均明显低于U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞0.973±0.305和0.827±0.322(均p<0.05)。半定量PCR检测结果显示U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞SOX2、Nanog和Oct4mRNA的相对表达量为0.190±0.027、0.178±0.025、0.170±0.021,均明显高于人骨肉瘤U2OS细胞株0.032±0.009、0.086±0.016、0.019±0.006(均p<0.05)。结论人骨肉瘤U2OS细胞株中存在肿瘤干细胞,无血清培养可用于分离培养人骨肉瘤肿瘤干细胞。
简介:摘要探讨内窥镜动态影像学检查即鼓膜录像在外伤性鼓膜穿孔法医学鉴定中的应用及意义,对361例366耳的内窥镜动态影像检查,在排除了25耳非外伤性鼓膜穿孔后的结果进行综合分析,了解典型外伤性鼓膜穿孔的形态、位置、大小、边缘情况,为外伤性鼓膜穿孔的法医学鉴定提供客观的依据。
简介:摘要目的对志贺氏菌显色培养基上的假阳性菌进行鉴定,为进一步鉴别志贺氏菌并改良显色培养基提供数据。方法将本实验室前期分离自自来水管网生物膜的52株志贺氏菌显色培养基上假阳性菌,通过生化方法进行进一步鉴定。结果经鉴定52株菌均为革兰阴性非志贺氏菌,分别为9个属假单胞菌属(48.08%)、埃希氏菌属(17.31%)、枸橼酸杆菌属(13.46%)、不动杆菌属(7.69%)、普罗菲登斯菌属(3.85%)、弧菌属(3.85%)、肠杆氏菌属(1.92%)、变形杆菌属(1.92%)、寡养单胞菌属(1.92%)。结论有多种菌可能干扰显色培养基对自来水管网生物膜样本中志贺菌的分离鉴定,假单胞菌属的干扰性最大,需针对这些假阳性菌与志贺氏菌的生理生化特性改良志贺氏菌显色培养基。
简介:摘要目的评价VITEK2-compact微生物鉴定仪对产EsβLs菌株快速检测的可靠性。方法应用标准的纸片扩散方法对临床已分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESβLs进行确证试验。同时,应用VITEK2-compact微生物鉴定仪进行检测,将两种方法在时间和检出率上的差异进行比较。结果同时检测的两种方法,42株肺炎克雷伯菌ESβLs检测符合率达93.5%,66株大肠埃希菌ESβLs检测符合率达96.3%。标准纸片扩散法平均检测时间为18h,而VITEK2-compact微生物鉴定仪的平均检测时间为6.5h。结论VITEK2-compact微生物鉴定仪不仅能快速准确检测产ESβLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,而且结果可靠。