简介：

简介：摘要目的探索神经生长因子（NGF）在小鼠治疗性血管生成中诱导缺血肢体骨骼肌纤维重塑的机制。方法雌性ICR小鼠18只，无特定病原体级，6周龄，体重25~30 g。按随机数字表法分为假手术组（n=6）、空白对照组（n=6）和NGF基因治疗组（n=6）。对空白对照组和NGF基因治疗组小鼠进行后肢缺血造模，在术后第7天对假手术组注射生理盐水，空白对照组小鼠进行空质粒转染，NGF基因治疗组小鼠进行NGF基因转染。在术后第21天对患肢血流灌注评估后进行腓肠肌取材。对3组腓肠肌标本进行苏木精-伊红（HE）染色，CD31和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，实时荧光定量PCR检测肌球蛋白重链（MHC）-Ⅰ、MHC-Ⅱa及MHC-Ⅱb的mRNA表达，Western blot检测NGF和过氧化物酶体增殖物激活受体-β/δ（PPAR β/δ）的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞色素C氧化酶（COX）、异柠檬酸脱氢酶（IDH）和三磷酸腺苷（ATP）表达量。结果术后第21天，NGF基因转染组小鼠患肢血流灌注量为（195.70±9.99）PU，低于假手术组（312.15±17.32）PU（P=0.001），但高于空白对照组（82.11±8.55）PU（P=0.001）。NGF组的肌肉萎缩程度低于空白对照组，NGF基因转染组的毛细血管密度为（0.34±0.05），高于假手术组（0.11±0.03）和空白对照组（0.27±0.04）（均P<0.05）。NGF基因转染组的内皮细胞增殖指数为（0.39±0.19），高于假手术组（0.18±0.01）和空白对照组（0.25±0.14）（均P<0.05）。NGF基因转染组的NGF、PPAR β/δ、COX、IDH、ATP的表达水平，以及MHC-ⅠmRNA表达水平较假手术组和空白对照组均明显升高（均P<0.05）。结论NGF基因转染后能够促进小鼠缺血肢体毛细血管生成，增加其血流灌注，进而诱导骨骼肌肌纤维向Ⅰ型重塑，该过程可能与NGF诱导PPAR β/δ表达，促进骨骼肌细胞有氧代谢有关。

简介：摘要目的探讨miR-223对大鼠心肌细胞纤维化相关通路的保护作用及对Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twist1）、转化生长因子β1受体2（TGFBR2）的表达调控。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2，以TGF-β人工诱导心肌细胞纤维化相关通路活化，分为模型组、miR-223组（转染miR-223过表达慢病毒）以及miR-223-NC组（转染miR-223-NC慢病毒），同时设立正常细胞对照组。免疫组化检测α-SMA的表达情况；实时荧光定量PCR（real-time PCR）测定心肌细胞miR-223、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平；Western印迹法检测心肌细胞Twist1、TGFBR2、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ及α-SMA蛋白水平；双荧光素酶报告基因验证miR-223对Twist1、TGFBR2 3′UTR的靶向调控。结果miR-223组α-SMA阳性心肌细胞平均吸光度（0.089±0.013）明显低于模型组和miR-223-NC组（0.134±0.018，0.132±0.016）；miR-223组心肌collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平与模型组及miR-223-NC组比较显著下降，且差异具有统计学意义（P<0.05）；Twist1、TGFBR2、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ及α-SMA蛋白水平较模型组及miR-223-NC组显著下降，且差异具有统计学意义（P<0.05）；Twist1、TGFBR2 3′UTR野生型双荧光素酶报告质粒与miR-223 mimics共转染293T细胞，荧光素酶活性均显著降低[（0.48±0.06，0.51±0.07）比（0.92±0.17,0.94±0.12）]。结论miR-223可能通过下调Twist1、TGFBR2基因的表达抑制心肌细胞中纤维化相关信号通路活化。

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简介：摘要目的探讨2型糖尿病大鼠缺血预处理（IPC）对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用是否受到糖尿病心肌纤维化的影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型，采用随机数字表法将54只正常大鼠和54只糖尿病大鼠各分成3组（n=18）：（1）空白对照组（C组）；（2）缺血再灌注损伤（IRI）对照组（IRI组）；（3）IPC组；（4）糖尿病空白对照组（DC组）；（5）糖尿病IRI对照组（DIRI组）；（6）糖尿病IPC组（DIPC组）。再灌注结束时采集各组大鼠静脉血，采用酶联免疫法（ELISA）检测血清肌酸激酶心肌型同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）水平；采用Evan′s蓝和氯化三苯基四氮唑（TTC）双染法测定心肌梗死面积（IS）；采用Masson染色计算血管周围纤维化指数（PVCA）和心肌组织胶原容积分数（CVF）。结果本研究建立了稳定有效的长病程2型糖尿病大鼠模型；和正常组大鼠相比，糖尿病组大鼠相同处理组左心室心肌组织CVF和PVCA均显著升高（均P<0.05）。正常组大鼠组内比较，IRI组CK-MB、cTnI水平和IS分别为（12.3±1.1）ng/ml、（1.2±0.3）ng/ml、（52.3±8.1）%，IPC组分别为（6.6±0.8）ng/ml、（0.5±0.1）ng/ml、（25.1±4.7）%，明显降低（均P<0.05）。糖尿病组大鼠组内比较，DIRI组CK-MB、cTnI水平分别为（16.6±2.2）、（1.4±0.3）ng/ml，DIPC组分别为（11.5±0.9）、（1.1±0.1）ng/ml，明显降低（均P<0.05）。与IPC组相比，DIPC组cTnI、CK-MB浓度和IS均明显升高（均P<0.05）。结论长病程的2型糖尿病大鼠存在心肌纤维化，这种心肌纤维化减弱IPC对糖尿病MIRI的保护作用。

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简介：摘要目的通过离体猪肾模型初步探讨使用猪源纤维蛋白粘合剂辅助清除肾结石碎片的可行性。方法在离体猪肾结石模型（含100 mg干燥的、≤ 1 mm人结石组分的猪肾6个，含100 mg干燥的、≤3 mm人结石组分的猪肾6个）中检验输尿管软镜配合12/14Fr输尿管导引鞘。实验组使用网篮-粘合剂取石（≤1 mm结石，n=3；≤3 mm结石，n=3）；对照组仅使用网篮取石（≤1 mm结石，n=3；≤3 mm结石，n=3），对比两组的取石效果、结石清除率和操作时长等。收集健康人尿液，将猪源纤维蛋白粘合剂形成的凝胶放入其中，观察其特性。结果猪源纤维蛋白粘合剂能在生理盐水和尿液中形成凝胶并黏附包裹结石碎片。≤1 mm结石者实验组与对照组的操作时长分别为（14.0±4.2）和（29.0±0.7）min，（P<0.05），结石清除率分别为（90.9±1.4）%和（48.4±15.7）%（P<0.05）；≤3 mm结石者实验组与对照组的操作时长分别为（12.8±4.0）和（30.0±0）min（P<0.05），结石清除率分别为（91.1±5.0）%和（20.7±8.0）%，（P<0.05）。凝胶在健康人尿液和生理盐水中37 ℃静置24 h自行溶解。结论浓度适宜的猪源纤维蛋白粘合剂可用于辅助软镜碎石术中清除小结石碎片。

简介：摘要目的探讨肺功能和涎液化糖链抗原-6（KL-6）在抗合成酶综合征合并间质性肺疾病（ASSD-ILD）与特发性肺纤维化（IPF）中的特点及临床意义。方法回顾性收集2015年5月至2017年5月郑州大学第一附属医院诊治的43例ASSD-ILD患者（其中男12例，女31例）（ASSD-ILD组）及34例IPF患者（其中男28例，女6例）（IPF组）的临床资料，比较两组患者基本信息、肺功能结果[包括用力肺活量占预计值的百分比（FVC%预计值）、第1秒用力呼气容积占预计值的百分比（FEV1%预计值）、FEV1与FVC的比值（FEV1/FVC）、呼气峰值流量占预计值的百分比（PEF%预计值）、用力呼出25%、50%、75%肺活量时的瞬间呼气流量占预计值的百分比（FEF25%预计值、FEF50%预计值、FEF75%预计值）、最大呼气中期流量占预计值的百分比（MMEF%预计值）、肺弥散量占预计值的百分比（DLCO%预计值）]及KL-6水平，分析ASSD-ILD与IPF组中肺功能和KL-6的特点及临床意义。结果ASSD-ILD组FEV1%预计值、FEF50%预计值、FEF75%预计值、MMEF%预计值均显著低于IPF组（均P<0.05），而ASSD-ILD组FVC%预计值、FEV1/FVC、PEF%预计值、FEF25%预计值及DLCO%预计值与IPF组相比差异无统计学意义（均P>0.05）。ASSD-ILD组血清KL-6水平与IPF组相比差异无统计学意义[（1 169±911）比（1 210±908）U/ml，t=0.62，P=0.463]。随访分析表明，ASSD-ILD两年内死亡患者血清KL-6水平显著高于存活患者[（2 060±1 168）比（1 042±858）U/ml，t=2.93，P=0.041]；IPF两年内死亡患者血清KL-6水平也显著高于存活患者[（1 767±865）比（1 089±894）U/ml，t=2.53，P=0.026]。ASSD-ILD组血清KL-6水平与FVC%预计值（r=-0.43，P=0.004）、FEV1%预计值（r=-0.39，P=0.010）及DLCO%预计值（r=-0.41，P=0.006）均呈负相关；IPF组血清KL-6水平与肺功能各项指标均无相关性（均P>0.05）。结论ASSD-ILD患者与IPF患者之间肺功能存在差异，高水平血清KL-6提示患者预后较差。