简介:目的构建白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶真核表达质粒pcDNA3.1/SAP2.为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础。方法从白假丝酵母菌中提取基因组DNA,以其为模板采用聚合酶链反应(PCR)法获取SAP2基因,将真核表达质粒pcDNA3.1(+)myc-HisC和SAP2基因行EcoRI和XhoI双酶切,琼脂糖凝胶纯化,连接酶切产物,转化TOP10感受态细菌,筛选菌落和测序鉴定。结果经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计相同,并定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)myc-HisC,电泳获得预期的SAP2条带,测序证实为正确的SAP2序列。结论利用真核表达质粒pcDNA3.1(+)myc-HisC可以方便而高效地构建pcDNA3.1/SAP2重组质粒,该质粒能直接激活抗原提呈细胞,可以使重组质粒具有较强的免疫原性和免疫反应性。
简介:【摘要】目的:分析采用藏医涂擦疗法治疗瑞真病(骨性关节炎)产生的不良反应发生率以及临床效果。方法:选取自2022年3月至2023年2月在我院就诊的86例瑞真病(骨性关节炎)患者作为研究对象,采用随机抽样的方式将其分为研究组与常规组两组,每组43例。常规组患者采用常规治疗方式,研究组患者采用藏医涂擦疗法治疗方式,观察和对比两组患者治疗后的不良反应发生率和临床效果。结果:对比后发现,研究组患者的不良反应发生率明显低于常规组患者,满意度比常规组患者偏高。由此可见,两组数据存在较为明显的差异性(P<0.05),具有统计学意义。结论:对瑞真病(骨性关节炎)患者采用藏医涂擦疗法治疗方式,具有非常重要的作用,不仅能够降低患者不良反应发生率,还能够促进患者病情康复,在患者及家属中的满意度较高,值得推广与应用。
简介:目的选择弓形虫RH株主要表面抗原P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素A2/B亚基共同构建在同一真核表达载体pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确.方法用PCR技术分别从弓形虫RH株基因组DNA和pUAB024-CTXA28/B质粒中扩增编码P30、P22基因片段和CTXA2/B,定向重组入pUC18克隆载体,然后酶切释放P30-P22-CTXA2/B复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉索的LB培养基筛选、酶切及测序鉴定.结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和CTXA2/B基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确.结论成功地构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白P30-P22-CTXAA/B在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础.