简介:背景:髓核间充质干细胞(nucleuspulposusmesenchymalstemcells,NPSCs)在椎间盘损伤退变修复中具有重要应用价值,诱导髓核间充质干细胞向类髓核细胞分化是关键步骤.目的:探讨联合使用骨形态生成蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)和转化生长因子β3(transforminggrowthfactorβ3,TGF-β3)诱导髓核间充质干细胞向类髓核细胞分化的可行性及效果.方法:取3月龄大鼠尾椎髓核组织,分离培养髓核间充质干细胞,并进行形态学观察、三系分化鉴定和流式细胞术检测干细胞表面抗原.将培养获得的NPSCs分为4组,对照组、20ng/mlTGF-β3组、100ng/mlBMP-2组和20ng/mlTGF-β3+100ng/mlBMP-2组,分别加入不同组合的细胞因子对NPSCs进行诱导培养.采用CCK-8增殖实验检测各组细胞因子毒性,在诱导第7天、第14天提取mRNA进行实时定量RT-PCR检测各组髓核特异基因Aggrecan、SOX-9、Collagen-2、Krt19的相对表达量;在诱导第14天进行阿利新蓝染色检测细胞外基质的表达量,对比各组染色强度来比较各组NPSCs分化程度.结果:成功从髓核组织分离NPSCs并进行鉴定.原代细胞培养11d后传至P3代,贴壁细胞呈纺锤长梭形,旋窝样生长.CCK-8实验结果显示,加入细胞因子组细胞增殖水平在培养3d后较对照组升高,但3组之间无统计学差异,排除由细胞增殖导致的胞外基质增多.RT-PCR结果显示,在诱导第7天时加入细胞因子组髓核特异基因的表达较对照组均升高(P<0.05),在第14天时,20ng/mlTGF-β3+100ng/mlBMP-2组髓核特异基因的表达较20ng/mlTGF-β3组和100ng/mlBMP-2组升高(P<0.05).阿利新蓝染色结果显示,20ng/mlTGF-β3+100ng/mlBMP-2组细胞外基质分泌明显高于其他组.结论:联合使用TGF-β3和BMP-2能够有效诱导NPSCs向类髓核细胞分化,可为下一步应用NPSCs治疗椎间盘退变打下基础.
简介:目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR)γ激动剂曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响。方法以曲格列酮处理体外培养的肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,分化标记物E-钙黏蛋白和清蛋白分别用免疫细胞化学和溴甲酚绿法检测,化学发光法检测肿瘤标记物AFP。Westernblot检测细胞周期蛋白D1、c—myc蛋白的表达。结果曲格列酮以浓度依赖性方式抑制肝癌细胞生长,使细胞周期明显阻滞于G0/G1,并诱导E-钙黏蛋白表达。经曲格列酮处理后,清蛋白分泌量显著增加,AFP明显下降,细胞周期蛋白D1、c-myc蛋白表达水平下降。结论曲格列酮可诱导肝癌细胞分化,抑制其生长,其机制可能涉及下调细胞周期蛋白D1和c-myc蛋白表达。
简介:摘要目的在体外培养的大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)中检测神经生长因子受体TrkA的表达,为将来ADSCs和NGF联合应用于大鼠压力性尿失禁治疗的动物试验研究提供理论依据。方法分离并培养SD大鼠ADSCs,采用Westernblot方法检测ADSCs中TrkA的表达情况,采用MTT法观察NGF对ADSCs增殖的作用。结果Westernblot实验结果表明,ADSCs中的TrkA表达明显升高。MTT实验结果表明NGF能有效的促进ADSCs的增殖,与空白对照组相比,增值率有显著差异(P<0.05),且有明显的量效剂量关系。结论ADSCs的NGF特异性受体TrkA表达显著,外源性的NGF能有效的促进ADSCs的增殖。
简介:摘要目的对矽肺患者血液中转化生长因子-β1的表达水平进行分析讨论。方法2014年2月至2015年2月期间,贵州省第三人民医院接收矽肺患者共计75例,作为本次试验的试验组,此外,选择同期健康体检者75例作为本次试验的对照组,比较两组试验人员血清中转化生长因子-β1水平。结果对照组血清中转化生长因子-β1含量为(21.4±3.57)pg/ml,试验组患者为(51.3±10.60)pg/ml,且试验组中矽肺一期、二期、三期患者血清中转化生长因子-β1水平分别为(39.3±7.58)pg/ml、(50.5±9.49)pg/ml、(64.1±11.35)pg/ml,上述差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论对于矽肺患者来说,其血清中转化生长因子-β1可明显升高,且升高与病情严重程度成正比,建议作为诊断矽肺及判断病变程度的指标之一。
简介:目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)对大鼠部分肝移植术后肝功能的影响。方法建立大鼠30%肝移植模型。分实验组、对照组,每组60只,分别于术后注射鼠重组VEGF、生理盐水。在术后0、12、24、72、168h监测血清ALT、AST、透明质酸(hyaluronicacid,HA)变化。光镜下观察肝窦结构破坏及炎性细胞浸润程度。结果在72h,实验组血清ALT、AST、HA较对照组明显降低(t=4.681,4.252,2.853,P〈0.05)。实验组肝窦内皮细胞结构破坏及炎性细胞浸润程度均较对照组明显减轻。结论VEGF能明显改善大鼠部分肝移植术后肝功能。这可能与其减轻肝窦内皮细胞损害和炎性细胞浸润程度有关。
简介:【摘要】目的 在 体外培养的 大鼠脂肪源性干细胞( ADSCs) 中 检测神经生长因子受体 TrkA的 表达,为将来 ADSCs和 NGF联合 应用于大鼠压力性尿失禁治疗的动物试验研究提供理论依据。方法 分离并培养 SD大鼠 ADSCs, 采用 Western blot方法检测 ADSCs中 TrkA的表达情况, 采用 MTT法观察 NGF对 ADSCs增殖的作用。结果 Western blot实验结果 表明, ADSCs中 的 TrkA表达明显升高 。 MTT实验结果 表明 NGF能有效的促进 ADSCs的增殖, 与空白对照组相比, 增值率有显著差异 ( P< 0.05),且有明显的量效剂量关系。结论 ADSCs的 NGF特异性受体 TrkA表达显著, 外源性的 NGF能有效的促进 ADSCs的增殖。
简介:1资料与方法我科1998年12月~20O0年3月用碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)治疗烧伤患者创面120例。采用自身对照,男72例,女48例,年龄1~62岁,烧伤面积2%~30%,面部烧伤25例,躯于烧伤30例,四肢烧伤65例,浅Ⅱ度烧伤80例,深Ⅱ度烧伤37例,肉芽创面3例,面积6~40cm2,皆在肉芽形成10~15d用药。入院后常规清创,广谱抗生素抗感染及对症处理。40例创面使用暴露疗法,即将贝复济直接喷雾于清创后创面,2次/d,直至成膜。40例创面使用半暴露疗法,即用单层消毒石蜡油纱布覆盖后,再喷加贝复济,3~4次/d。剩余40例创面使用包扎疗法,即在创面喷洒贝复济后用10~15层纱布
简介:小鼠体外巨核系祖细胞培养表明,重组鼠白细胞介素-3(IL-3),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-6(IL-6)及红细胞生成素(EPO)均有不同程度刺激巨核系祖细胞生长的活性。其最适浓度分别为100U/ml,5ng/ml,20ng/ml与1U/ml。对巨核细胞集落刺激作用最强的是IL-3,IL-6与GM-CSF次之,EPO最弱。在种植2×10~5骨髓单个核细胞中分别获得45±3,25±2,20±3及10±2个巨核细胞集落。