简介:摘要目的探讨空气颗粒物(PM)及香烟烟雾提取物(CSE)对人肺泡上皮细胞(A549细胞)和单核细胞(THP-1细胞)源性巨噬细胞功能的影响。方法采用不同浓度的PM与CSE单独或叠加体外刺激A549细胞和THP-1细胞,应用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达,实时聚合酶链式反应检测巨噬细胞极化标志物,免疫蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达。结果与空白对照组比较,0.5% CSE、50 mg/LPM单独刺激即可抑制A549细胞增殖;二者叠加刺激后,较CSE单独刺激组能够进一步抑制该细胞增殖活性,促进细胞凋亡;同时,在CSE存在时,PM可进一步促进A549细胞和THP-1细胞产生的炎症因子白细胞介素6及白细胞介素1β。PM单独或与CSE叠加均可降低A549细胞表达occludin。实时聚合酶链式反应结果显示,CSE与PM叠加进一步促进THP-1细胞表达CD80 mRNA。结论PM能够进一步加重CSE暴露所导致的气道上皮抑制增殖、促进凋亡、炎症及巨噬细胞向M1型极化。
简介:摘要目的观察桑叶提取物对妊娠糖尿病模型大鼠血糖及胰岛β细胞增殖的影响。方法制备妊娠糖尿病大鼠模型。32只模型大鼠按随机数字表法分为模型组、二甲双胍组、桑叶提取物低剂量组和桑叶提取物高剂量组,每组8只。选取8只正常孕鼠作对照,为正常组。低、高剂量组分别灌胃桑叶提取物0.5、1.5 g/kg,二甲双胍组大鼠灌胃200 mg/kg盐酸二甲双胍混悬液,模型组和正常组灌胃等体积无菌生理盐水。连续干预4周。采用HE染色观察各组大鼠胰腺组织病理学改变。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖水平。采用全自动生化检测仪检测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠空腹胰岛素水平,并计算大鼠胰岛抵抗指数、胰岛素敏感指数。采用放射免疫计数器检测血清SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA水平。采用MTT法检测胰岛β细胞增殖情况。Western blot法检测周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)、磷酸化视网膜母细胞瘤基因(phosphorylated retinoblastoma, pRB)、E2F1基因编码蛋白(E2F1)表达。结果与模型组比较,桑叶提取物低、高剂量组空腹血糖、TC、TG、LDL-C水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);空腹胰岛素、胰岛抵抗指数降低(P<0.05),胰岛素敏感指数升高(P<0.05);血清SOD[(360.62±27.96)U/ml、(401.62±25.66)U/ml比(293.45±31.36)U/ml]、CAT[(10.26±2.07)U/ml、(12.26±0.96)U/ml比(8.26±2.44)U/ml]、GSH-Px[(790.23±47.87)U/ml、(880.63±40.62)U/ml比(716.62±45.62)U/ml]活性升高(P<0.05),MDA[(30.89±3.28)mmol/ml、(40.42±2.06)mmol/ml比(44.85±5.33)mmol/ml]水平降低(P<0.05);造模后48、72 h,与模型组比较,桑叶提取物低、高剂量组胰岛β细胞增殖率升高(P<0.01);桑叶提取物低、高剂量组CDK4[(1.15±0.42)、(1.35±0.59)比(0.75±0.22)]、pRB[(1.11±0.58)、(1.54±0.64)比(0.67±0.20)]、E2F1[(1.06±0.39)、(1.27±0.18)比(0.48±0.12)]蛋白表达升高(P<0.05)。结论桑叶提取物可改善妊娠糖尿病模型大鼠血糖、血脂、胰岛素水平,通过调控CDK4-pRB-E2F1通路相关蛋白,促进胰岛β细胞增殖。
简介:摘要目的探讨青钱柳提取物抗糖尿病大鼠氧化应激的作用。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导SD雄性大鼠高糖血症,随机分为模型组、青钱柳提取物低、中、高剂量给药组和罗格列酮药物对照组。给药4周后(正常对照组仅正常喂食和水),按试剂盒要求测定空腹血糖值、血糖耐受力、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA);荧光分光度法测定半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量,Western blot法测定胰腺组织中细胞色素C(cyt-C)的蛋白表达情况。结果青钱柳提取物可显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠的血糖升高,增强大鼠的血糖耐受力,改善SOD活性和MDA的含量、Caspase-3的水平及改变胰腺组织中的cyt-c蛋白的表达,和模型组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论青钱柳提取物具有一定的降血糖作用,其可能作用机制为抗氧化应激保护胰腺组织细胞的功能。
简介:摘要目的探讨川乌提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法分别用2.5 g/L(AR 2.5 g/L组)、5.0 g/L(AR 5.0 g/L组)和7.5 g/L(AR 7.5 g/L组)川乌提取物处理HUVECs(购自中国科学院上海细胞库),对照组(Con)未行川乌提取物处理。将微小RNA(miRNA,miR)-NC(miR-NC组)、miR-589(miR-589组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)和anti-miR-589(anti-miR-589组)分别转染至HUVECs中;将anti-miR-NC、anti-miR-589、pcDNA3.1、pcDNA3.1-蛋白激酶B1(Akt1)转染至HUVECs细胞后用5.0 g/L的川乌提取物处理,分别标记为AR 5.0 g/L+anti-miR-NC组、AR 5.0 g/L+anti-miR-589组、AR 5.0 g/L+pcDNA3.1组和AR 5.0 g/L+pcDNA3.1-Akt1组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-589的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-589和Akt1的靶向关系。两组间比较采用t检验。多组间比较采用SNK-q检验。结果不同浓度川乌提取物组HUVECs细胞增殖活性、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和miR-589表达均显著低于Con组(F=107.822、86.321、136.234,P<0.05),凋亡率、p21和bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达显著高于Con组(F=95.875、124.365、107.541,P<0.05)。miR-589组HUVECs增殖活性、Cyclin D1和bcl-2蛋白表达显著高于miR-NC组(t=15.358、31.109、8.971,P<0.05),凋亡率、p21和bax蛋白表达显著低于miR-NC组(t=23.124、21.175、11.364,P<0.05),抑制miR-589表达可逆转川乌提取物对HUVECs增殖和凋亡的作用。miR-589可靶向调控Akt1的表达。结论川乌提取物可抑制HUVECs增殖并促进细胞凋亡,可能与调控miR-589/Akt1有关。
简介:摘要目的阐明鲜冬虫夏草冷水提取物对香烟提取物(CSE)单一刺激以及复合流感病毒感染的体外抗炎作用。方法用紫外高效液相色谱法分析鲜冬虫夏草冷水提取物核苷类成分,硫酸-苯酚法检测样品总糖含量,超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测样品SOD活力。细胞活力检测试剂盒检测CSE和鲜冬虫夏草冷水提取物对人支气管上皮细胞(16HBE)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)的细胞毒性;以CSE刺激16HBE细胞48 h和THP-1细胞8 h建立炎症模型,加入不同浓度(1 000、500、250 mg/L)鲜冬虫夏草冷水提取物,用定量聚合酶链反应方法检测炎症因子mRNA的表达水平。在此基础上,构建CSE刺激48 h后感染甲型流感病毒24 h的16HBE细胞模型,以相同的方法评价药物对炎症因子mRNA表达的影响。最后,利用免疫荧光技术观察鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE致黏液蛋白5AC(MUC5AC)高分泌的抑制作用。结果(1)鲜冬虫夏草冷水提取物总核苷含量为0.423%,总糖含量为18.69%,SOD活力为14 736.5 U/ml。(2)高、中浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE细胞的白细胞介素6(IL-6)mRNA表达有明显抑制活性(t值分别为6.514、5.156,P值均<0.05),高浓度可显著抑制MUC5AC的mRNA表达(t=8.922,P<0.05)。(3)高、中、低浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激THP-1细胞的肿瘤坏死因子α的mRNA表达均有明显抑制作用(t值分别为9.549、9.616、8.573,P值均<0.05),对IL-6的mRNA的表达也均有抑制作用(t值分别为4.458、5.399、4.151,P值均<0.05)。(4)高浓度药物干预后,MUC5AC荧光在16HBE细胞胞浆的表达明显减少。结论鲜冬虫夏草冷水提取物在16HBE和THP-1细胞的炎症模型中显示出较好的抗炎活性,并且可抑制16HBE气道上皮细胞MUC5AC高分泌。本研究揭示了冬虫夏草兼具潜在治疗慢性阻塞性肺疾病炎症和黏液高分泌两大病理生理特征的药用特色。
简介:摘要目的探讨丹参提取物调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)通路改善重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的作用机制。方法以逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠(1 ml/kg)法建立SAP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、丹参提取物(1.5 g/kg)组、ML385(Nrf2/ARE通路抑制剂,剂量:20 mg/kg)组和丹参提取物(1.5 g/kg)+ML385(20 mg/kg)组。测量腹水量,计算W/D比值(W/D=湿重/干重);以苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肺组织病理,并进行Holfbauer评分;以全自动血气分析检测仪检测动脉血气指标;试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和肺组织活性氧(ROS)水平,以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织出现肺泡壁毛细血管明显扩张变厚,肺泡间隔变大,肺间质充血、水肿、炎性细胞大量浸润等病理损伤症状,腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO2、血清MDA水平显著升高(P<0.05),PaO2、氧合指数(OI)、血清SOD水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,丹参提取物组大鼠上述病理损伤症状减轻,腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO2、血清MDA水平降低(P<0.05),PaO2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,ML385组大鼠上述病理损伤症状加重,腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO2、血清MDA水平升高(P<0.05),PaO2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达降低(P<0.05)。与丹参提取物组比较,丹参提取物+ML385组大鼠上述病理损伤症状加重,腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO2、血清MDA水平升高(P<0.05),PaO2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达降低(P<0.05)。结论丹参提取物可通过激活Nrf2/ARE信号保护急性胰腺炎肺损伤大鼠的肺组织。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-133b对烟草提取物(CSE)诱导的人小气道上皮细胞间充质转化的影响及其调控机制。方法基因表达数据库(GEO数据库)中搜索慢性阻塞性肺疾病患者气道上皮细胞miR的表达谱芯片,寻找差异表达的miR并用实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)验证;小气道上皮细胞(HSAEpiC)根据干预方式不同分为对照组、CSE组、CSE+miR-133b抑制剂转染组(抑制剂组),CSE+miR-133b抑制剂对照转染组(抑制剂对照组)。观察各组细胞形态变化,qRT-PCR法检测各组miR-133b、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA、Smad2 mRNA、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA与波形蛋白(Vimentin)mRNA,酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹法(Western blot)检测细胞上清液及细胞E-cadherin与Vimentin蛋白水平。结果在GSE53519发现9个差异表达的miR,验证后发现miR-133b在HSAEpiC细胞模型中表达差异最为显著。CSE诱导HSAEpiC细胞形态改变,miR-133b抑制剂能部分逆转细胞形态变化。CSE诱导HSAEpiC细胞上皮表型标志物E-cadherin mRNA及蛋白表达减少、间质表型标志物Vimentin mRNA及蛋白表达增多(F=9.09、12.35、7.57、101.87,P=0.015、0.007、0.023、0.000);miR-133b抑制剂能部分逆转E-cadherin Vimentin mRNA及蛋白表达(F=40.59、27.74、15.87、20.42,P=0.000、0.001、0.004、0.002)。CSE诱导HSAEpiC细胞TGF-β1 mRNA、Smad mRNA表达增多,miR-133b抑制剂部分逆转TGF-β、mRNA、Smad mRNA的改变(F=17.25、64.15,P=0.003、0.000)。结论miR-133b可能通过TGF-β/Smad通路调控CSE诱导的HSAEpiC细胞上皮间充质转化。
简介:摘要目的探讨复方牛胎肝提取物片对慢性乙肝早期肝硬化患者血清肝纤维化指标水平的影响。方法选取2016年1月至2018年6月余姚市人民医院收治的慢性乙肝早期肝硬化患者96例,随机数字表法将其分为对照组(48例)与观察组(48例)。对照组口服恩替卡韦治疗,观察组口服恩替卡韦+复方牛胎肝提取物片治疗,连续治疗6个月。比较两组患者治疗效果、血清肝纤维化指标水平变化以及安全性等指标。结果两组患者治疗1、3、6个月HBV NDA转阴率比较差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前相比,两组患者治疗后血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸酶(HA)水平降低(P<0.05);观察组患者治疗后血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT、AST、总TBIL水平明显低于对照组(P<0.05);两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方牛胎肝提取物片可以降低慢性乙肝早期肝硬化患者机体血清肝纤维化指标水平,改善患者肝功能。
简介:摘要目的探讨佛甲草提取物对肾母细胞瘤细胞的生物学行为的影响及其作用机制。方法不同浓度的佛甲草提取物作用于肾母细胞瘤细胞(美国典型菌种保藏中心)后,流式细胞术检测细胞周期,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-183表达。转染miR-183抑制剂至肾母细胞瘤细胞下调miR-183表达后,检测细胞周期、迁移和侵袭及Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达改变。双荧光素酶报告基因验证miR-183与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)调控关系。多组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验)。结果佛甲草提取物作用细胞后细胞周期G0~G1期增加(F=171.952,P<0.05),S期缩短(F=229.976,P<0.05),细胞迁移和侵袭数显著减少(F=229.976、414.157,P<0.05),细胞中miR-183表达显著降低(F=524.898,P<0.05),Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(F=489.091、314.763,P<0.05),E-cadherin的蛋白表达显著升高(F=547.549,P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-183组细胞周期G0~G1期增加(t=18.177,P<0.05),S期缩短(t=17.548,P<0.05),迁移和侵袭细胞数显著减少(t=23.476、22.082,P<0.05),细胞中Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(t=24.601、22.808,P<0.05),E-cadherin的蛋白表达显著升高(t=26.833,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-183可与PTEN靶向结合。结论佛甲草提取物可能通过下调miR-183表达阻滞肾母细胞瘤细胞周期进程,抑制细胞迁移和侵袭。
简介:摘要目的探讨鸭跖草调控NADPH氧化酶4(Nox4)对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡及炎性因子表达的影响。方法利用H/R诱导H9c2细胞损伤,用不同浓度鸭跖草提取物处理细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Nox4蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Nox4 mRNA表达。用si-Nox4转染H9c2细胞,并经H/R处理,观察抑制Nox4对H/R心肌细胞H9c2的细胞活性、凋亡,以及SOD、MDA、LDH和炎性因子的影响。用pcDNA3.1-Nox4转染H9c2细胞,并用鸭跖草提取物和H/R处理,评价其对H9c2细胞活性、凋亡,以及SOD、MDA、LDH和炎性因子的影响。结果H/R处理后,H9c2细胞的存活率和SOD活性显著降低,细胞凋亡率以及Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nox4 mRNA、Nox4蛋白表达量明显增加(P<0.05)。10 μg/ml和20 μg/ml鸭跖草提取物显著提高H/R处理后H9c2细胞的细胞存活率、SOD活性,明显降低凋亡率和Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nox4 mRNA、Nox4蛋白表达量(P<0.05),与抑制Nox4表达的作用结果一样。过表达Nox4能逆转鸭跖草提取物对H/R诱导的心肌细胞活性、SOD活性的促进作用,和对细胞凋亡以及对Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6表达的抑制作用。结论鸭跖草通过调控Nox4表达保护H/R诱导的心肌细胞损伤,提高细胞活性,并抑制细胞凋亡及炎性因子表达。
简介:【摘要】 目的:研究三叶青叶总酚类的提取工艺。方法:回流提取法,以总酚类提取率、得膏率为评价指标,采用单因素结合正交试验设计法,优化提取工艺影响因素包括料液比、提取时间、乙醇体积分数和提取次数。结果:三叶青叶总酚类提取最佳工艺为:回流提取法,提取时间120 min,提取3次,料液比1:25,乙醇体积分数70%。结论:采用单因素结合正交试验设计法考察三叶青总酚类成分的提取工艺,获得其最佳提取工艺参数,为三叶青叶总酚类的开发利用奠定实验基础。
简介:摘要:电子证据是指以数字形式存在的证据信息,是信息时代变革的必然产物。本文以警务实战位基础,深度结合一线警务工作的重难点,提出了将数字取证平台的数据提取功能带到一线警务实战中,在保证电子证据的合法性、完整性的前提下,设计了一种智能设备数据提取装置。该设备能够弥补当前电子证据实地取证的空白,提高基层干警工作效率。