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  • 简介:摘要目的观察藜芦醇(Res)对链脲佐菌素诱发的糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)及高糖状态视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法取25只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病模型,确定造模成功20只,按照随机数字表法将模型鼠分为糖尿病模型组和Res灌胃组,另选取10只大鼠作为正常对照组。Res灌胃组大鼠用Res 40 mg/(kg·d)灌胃给药,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用等容量生理盐水灌胃,分别于灌胃后当日(0周)、4、8、12周测定大鼠体质量和经尾尖静脉采血测定血糖浓度,连续给药12周时处死大鼠并取双眼眼球,透射电子显微镜下观察各组大鼠RGCs超微结构变化;采用TUNEL法检测RGCs凋亡情况并计算凋亡指数。将ARPE-19细胞株分为正常对照组、高糖组及Res处理组,分别用含5.5 mmol/L葡萄糖、30 mmol/L葡萄糖和30 mmol/L葡萄糖+10 μmol/LRes的培养基培养48 h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用免疫荧光法及Western blot法检测细胞中bax和bcl-2蛋白表达。结果给药4、8、12周时,Res灌胃组大鼠体质量均高于相应时间点糖尿病模型组(均P<0.01),给药后8、12周时,Res灌胃组糖浓度均低于相应时间点糖尿病模型组(均P<0.01)。透射电子显微镜下可见糖尿病模型组RGCs核染色质凝聚,线粒体肿胀及细胞质空泡化;Res灌胃组RGCs超微结构变化明显轻于糖尿病模型组。Res灌胃组RGCs层和视网膜内核层细胞凋亡指数分别为(18.36±3.37)%和(23.67±8.98)%,分别低于糖尿病模型组的(83.91±9.8)%和(64.26±10.66)%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。正常对照组、高糖组、Res处理组ARPE-19细胞凋亡率分别为(3.11±0.26)%、(11.41±1.06)%和(5.38±0.58)%,Res处理组细胞凋亡率明显低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.01)。高糖组细胞核中bax蛋白荧光明显增强,bcl-2蛋白荧光强度明显减弱;Res处理组细胞核bax蛋白荧光强于正常对照组,但弱于高糖组,Res处理组bcl-2蛋白荧光弱于正常对照组,但强于高糖组。Western blot法检测正常对照组、高糖组和Res处理组bax蛋白相对表达量分别为0.15±0.06、0.31±0.09和0.21±0.08,bcl-2蛋白相对表达量分别为0.80±0.14、0.23±0.09、0.66±0.25;高糖组bax蛋白相对表达量明显高于正常对照组和Res处理组,bcl-2蛋白相对表达量明显低于正常对照组和Res处理组,差异均有统计学意义(均P<0.01);Res处理组bcl-2/bax值明显高于高糖组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Res可抑制糖尿病大鼠RGCs以及高糖环境下RPE细胞的凋亡。

  • 标签: 白藜芦醇 视网膜神经节细胞 视网膜色素上皮细胞 凋亡 凋亡相关蛋白
  • 简介:摘要目的建立白背叶中1个黄酮成分的提取分离方法及其薄层色谱鉴别方法。方法用95%乙醇回流提取背叶,旋蒸回收乙醇,用硅胶拌匀,以石油醚洗脱、乙酸乙酯回流提取,回收浓缩乙酸乙酯部位。取乙酸乙酯部位,上聚酰胺柱,用水和甲醇梯度洗脱,收集60%乙醇馏分,进一步分离纯化;以大波斯菊苷为对照品,背叶为对照药材,硅胶G板为吸附剂,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶3∶0.3)为展开剂,进行薄层色谱鉴别。结果从背叶中分离得到大波斯菊苷,建立了背叶薄层鉴别方法,斑点清晰,分离效果好。结论该方法可准确、快速对白背叶进行鉴别,可更好地控制背叶药材质量。

  • 标签: 白背叶 大波斯菊苷 提取法 色谱法,薄层
  • 简介:摘要目的探讨气态甲醛蓄积对大鼠学习记忆能力及前额皮层、海马区神经颗粒素(neurogranin,Ng)表达的影响,研究藜芦醇(resveratrol,Res)对气态甲醛蓄积所致脑损伤的防治效果。方法成年雄性SD大鼠84只,每组12只完全随机分组法分为对照组(N组)、气态甲醛蓄积低浓度组(FL组)、气态甲醛蓄积中浓度组(FM组)、气态甲醛蓄积高浓度组(FH组)、气态甲醛蓄积低浓度+藜芦醇组(FLR组)、气态甲醛蓄积中浓度+藜芦醇组(FMR组)、气态甲醛蓄积高浓度+藜芦醇组(FHR组),每组12只。采用气态甲醛暴露法建立甲醛染毒动物模型,运用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,采用蛋白免疫印迹法检测前额皮层、海马Ng表达与分布。结果(1)与N组大鼠逃避潜伏期、原平台滞留时间[(19.75±4.08)s,(43.47±2.43)s ]相比,FM、FH组大鼠逃避潜伏期均延长[(25.52±2.98)s 、(27.45±2.39) s,t=-4.97,-5.82;均P<0.01 ],原平台滞留时间均缩短[(30.99±4.21)s、(18.70±2.58)s,t=10.24,25.71;均P<0.01 ]。与FM、FH组等对应甲醛蓄积组相比,FMR、FHR组大鼠逃避潜伏期均明显延长[(21.37±3.80)s 、(24.26±3.56) s,t=1.86,3.93;均P<0.05],原平台滞留时间明显延长[(40.33±3.63)s、(23.46±4.73)s,t=-7.50,-3.95;均P<0.01]。(2)与N组大鼠皮层、海马Ng表达[(0.99±0.03),(1.07±0.03)]相比,FM、FH组大鼠皮层、海马Ng蛋白表达显著降低[(0.62±0.06),(0.39±0.03),(0.77±0.09),(0.46±0.10),t=11.55,14.08,11.51,13.17;均P<0.01]。与FM、FH组等对应甲醛蓄积组相比,FMR、FHR组大鼠皮层、海马Ng表达均有明显升高[(0.94±0.11),(0.48±0.04),(0.95±0.05),(0.60±0.09), t=-5.26,-2.09,-5.32,-2.21;均P<0.05]。结论藜芦醇能改善气态甲醛蓄积所致大鼠学习记忆功能减退,其机制可能是与Ng表达上调有关。

  • 标签: 气态甲醛蓄积 神经颗粒素 学习记忆 白藜芦醇 大鼠
  • 简介:[摘要 ]南水北调中线邢石段南楼弃渣场位于河北省元氏县,经稳定性评估为局部边坡不稳定弃渣场。通过对弃渣场现状情况的分析,针对弃渣场的后期恢复使用,提出切实可行的水土保持加固方案,为减少水土流失、保护生态环境提供科学依据。

  • 标签: [ ] 南水北调中线 弃渣场 水土保持 加固方案
  • 简介:摘要:为了延缓水泥路面“改黑”项目反射裂缝和车辙出现的时间节点,结合南通市洪江路水泥路面改造工程,设计采用高粘弹改性沥青混凝土作为加铺沥青混凝土结构层的下面层,来提高城市旧水泥路面改造工工程的使用年限。

  • 标签: 旧水泥混凝土路面 反射裂缝 高粘弹改性沥青混凝土
  • 简介:【摘要】中职英语教师一定要重视对学生自学能力的培养,因此英语教师应该不断革新教学方法,及时更新教学理念,进而让学生渐渐喜欢上英语并可以主动学习。若把留艺术应用到中职英语的教学之中,那么就能够加深学生学习英语的兴趣和积极性,提高他们的主观能动性,渐渐提高他们的英语能力与素养。

  • 标签: 留白艺术 中职英语 实践 思考
  • 简介:[摘要 ]目的:探讨家属健康教育对降低儿童百破疫苗接种不良反应的效果。方法:采集 2019年儿童百破疫苗接种案例 218例,随机分为对照组与观察组,每组均为 109例,对照组运用常规接种护理,观察组针对家属情况做健康教育,分析各组处理后接种儿童不良反应率、家长接种知识知晓情况。结果:在不良反应率上,观察组 2.75%,对照组 10.09%,对比有统计学意义( p<0.05);在家长接种知识知晓合格率上,观察组各项明显高于对照组,对比有统计学意义( p<0.05)。结论:针对家属做健康教育可以有效提升家属对百破疫苗接种有关知识的了解度,减少儿童百破疫苗接种不良反应。

  • 标签: [ ]家属 健康教育 儿童百白破疫苗接种 不良反应 效果
  • 简介:摘要目的探讨单纯白膜切开的阴茎腹侧延长术纠正尿道下裂中海绵体不对称所致阴茎下弯的效果。方法回顾分析2016年1月至2018年12月间39例利用单纯白膜切开的阴茎腹侧延长术纠正海绵体不对称的尿道下裂患儿(其中36例为浙大儿院泌尿外科病例,3例为嘉兴第一医院泌尿外科病例)。患儿年龄0.5~5岁,中位年龄1.1岁。第一期手术,先给予阴茎皮肤肉膜彻底脱套松解皮肤及筋膜引起的牵拉,再离断尿道板解除短尿道因素,然后测量阴茎背侧长度A和伸直前阴茎腹侧长度B,膜切开术使阴茎完全伸直后测量阴茎腹侧长度C;第二期手术,人工勃起试验观察阴茎下弯情况,测量阴茎背侧长度D和阴茎腹侧长度E。比较阴茎伸直前后背侧腹侧的长度。结果第一期手术中测得阴茎背侧长度A为33~39(35.6±3.2)mm;伸直前阴茎腹侧长度B为28~35(29.8±2.8)mm;伸直后阴茎腹侧长度C为32~38(34.3±2.1)mm。B和C两者差异有统计学意义(P<0.05);A和C差异无统计学意义(P>0.05)。第二期手术中测得阴茎背侧长度D为34~41(36.4±2.5)mm,测得阴茎腹侧长度E为33~40(35.7±3.6)mm,两者差异无统计学意义(P>0.05)。患儿随访0.5~2.5年,平均1.7年。所有患儿根据侧面照片测量勃起时阴茎下弯角度均<15°。结论单纯阴茎腹侧膜切开术有效纠正阴茎海绵体不对称所致阴茎下弯,近期效果佳;术中测量比较腹侧及背侧阴茎的长度可以验证其延长腹侧阴茎的效果。

  • 标签: 尿道下裂 阴茎下弯 阴茎白膜 分期手术
  • 简介:[摘要 ] 目的 观察加味宣承气汤加减治疗轻、中重症胰腺炎的临床疗效,并探讨其作用机制。方法 将 80例轻、中重症急性胰腺炎的患者,随机分为对照组和观察组,各 40例。两组均给予常规西医治疗,观察组加用加味宣承气汤加减口服, 7天为一疗程,观察两组患者治疗前后的中医证候疗效、临床症状、住院时间及血清淀粉酶( AMY)、炎症因子白细胞介素 -6( IL-6)、白细胞介素 -8( IL-8)、血清肿瘤坏死因子 -α( TNF-α)等相关血液检测项目的水平变化情况。结果 观察组中医证候疗效优于对照组( P< 0.05);住院时间、 AMY水平及腹痛腹胀症状恢复正常时间优于对照组(

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  • 简介:摘要 : 市政道路“改黑”是指将原有的灰白色水泥混凝土路面改建为黑色沥青混凝土路面,相较于水泥路面,沥青路面与轮胎间附着力大,行车更加平稳;沥青路面具有优良的吸附性能,可以对车辆行驶过程中产生的扬尘进行有效吸附,防尘性能优越;沥青路面具有弹性,能够减震降噪,且其施工速度快,基本可“夜间施工、白天通车”。沥青路面的诸多优点使得市政道路“改黑”成为国家及相关部门用以优化道路质量、改善城市环境的重要手段,是城市建设发展的趋势。

  • 标签: 注浆补强加固施工 混凝土路面 “白改黑” 注浆孔
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  • 简介:摘要目的观察藜芦醇通过Wnt信号通路对乳腺癌他莫昔芬疗效的影响。方法使用含有二甲基苯蒽的芝麻油成功构建60只SD乳腺癌大鼠模型(所有大鼠均购自中国医学科学院医学实验动物研究所),随机数字表法分为6组,每组各10只。A组为溶栓剂对照组,给予10 mg/kg二甲基亚砜;B组为藜芦醇组,给予10 mg/kg藜芦醇;C组为他莫昔芬组,给予0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬;D组为联合用药组,给予10 mg/kg藜芦醇联合0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬;E组为Wnt信号通路抑制剂组,给予10 mg/kg藜芦醇、0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬联合15 mg/kg的端锚聚合酶抑制剂(IWR)腹腔注射;F组为Wnt信号通路激动剂组,给予10 mg/kg藜芦醇、0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬联合2 mg/kg氯化锂。对各组大鼠进行28 d的观察,比较不同时刻各组大鼠的肿瘤体积、造模后第28天各组大鼠的肿瘤细胞凋亡率及Wnt通路相关蛋白水平。多组间比较采用单因素方差分析。结果成功造模后对各组大鼠进行4周观察,无1例死亡。造模后第14、21、28天时各组大鼠的肿瘤体积间比较差异有统计学意义(F=6.389、5.182、7.276,P<0.05);E组大鼠的肿瘤体积最小,A组大鼠的肿瘤体积最大,其中D组和E组大鼠造模后第14、21、28天时的肿瘤体积均小于C组,且E组小于D组,差异有统计学意义(F=8.427、6.791、7.921,P<0.05);且F组大鼠造模后第14、21、28天时的肿瘤体积均大于E组,差异有统计学意义(F=5.182、8.531、8.676,P<0.05)。各组大鼠的标本中均存在原位缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞,细胞核表现为深浅不同的棕黄色,且分布不均。A组[(1.32±0.16)%]和B组[(2.24±0.41)%]仅能够观察到少数散落的凋亡肿瘤细胞,两组间比较差异无统计学意义(F=1.759,P>0.05);C组[(19.09±4.53)%]和F组的肿瘤细胞凋亡率[(21.42±3.68)%]高于A组和B组(F=7.743、5.536,P<0.05),两组间比较差异无统计学意义(F=2.987、2.051,P>0.05);D组[(27.93±6.69)%]和E组的肿瘤细胞凋亡率[(39.69±6.89)%]明显高于其余4组,且E组高于D组,差异有统计学意义(F=6.883、7.037,P<0.05)。A组大鼠的β-连环蛋白(1.25±0.14)、Wnt2水平(1.10±0.30)均高于其他各组,糖原合成酶激酶3β(GSK3β,0.20±0.05)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β,0.25±0.07)、Lef1水平(0.17±0.03)均低于其他各组;E组大鼠的β-连环蛋白(0.40±0.06)、Wnt2水平(0.30±0.11)均低于其他各组,GSK3β(0.89±0.04)、p-GSK3β(0.97±0.06)、Lef1水平(0.82±0.06)均高于其他各组;且E组大鼠的β-连环蛋白、Wnt2水平均低于D组和F组,且D组低于F组,GSK3β、p-GSK3β、Lef1水平均高于D组和F组,且D组高于F组,差异有统计学意义(F=7.627,P<0.05)。结论藜芦醇可降低β-连环蛋白、Wnt2的表达,提升GSK3β、p-GSK3β、Lef1的表达,抑制Wnt信号通路,提高他莫昔芬的抗肿瘤效果。

  • 标签: 乳腺癌 白藜芦醇 Wnt信号通路 他莫昔芬 疗效
  • 简介:摘要目的了解纹伊蚊成蚊对常用杀虫剂的抗药性,为科学选择和使用杀虫剂提供依据。方法2018年9月在厦门市思明、集美、海沧区和2019年8月在厦门市思明、集美、翔安区,采用勺舀法采集野外纹伊蚊幼虫和卵块,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定纹伊蚊成蚊对7种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。根据死亡率判断抗药性水平:≥98%为敏感群体(S);80%~< 98%为可能抗性群体(M);< 80%为抗性群体(R)。结果2018和2019年纹伊蚊成蚊暴露于0.1%溴氰菊酯、0.4%高效氯氰菊酯、0.5%高效氯氟氰菊酯、1.4%顺式氯氰菊酯、3%氯菊酯、0.5%马拉硫磷、0.05%残杀威7种常用杀虫剂,1 h击倒率分别为95.1%(117/123)、98.3%(115/117)、100.0%(116/116)、99.2%(120/121)、98.4%(123/125)、97.5%(119/122)、100.0%(127/127)和96.7%(118/122)、98.6%(143/145)、100.0%(139/139)、100.0%(149/149)、98.0%(146/149)、96.8%(121/125)、100.0%(126/126)。2018年恢复24 h死亡率分别为91.1%(112/123)、78.6%(92/117)、75.0%(87/116)、88.4%(107/121)、96.0%(120/125)、99.2%(121/122)、100.0%(127/127),2019年恢复24 h校正死亡率分别为74.9%、76.9%、79.5%、91.4%、92.3%、100.0%、100.0%。结论厦门市纹伊蚊成蚊对马拉硫磷和残杀威敏感,对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯等拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性高。要加强抗药性监测,交替使用不同类型杀虫剂,以减少和延缓抗药性的产生。

  • 标签: 白纹伊蚊 成蚊 杀虫药抗药性 拟除虫菊酯类
  • 简介:摘要目的观察藜芦醇对白细胞介素(IL)-1β诱导的椎间盘髓核细胞增殖及炎性反应的影响。方法通过酶序贯消化法获得大鼠椎间盘髓核细胞,并将细胞分为正常组、IL-1β组(20 μg/L)、藜芦醇低、中、高剂量组(IL-1β+12.5、25.0、50.0 μmol/L藜芦醇)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6 mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量,组间比较采用LSD-t检验。结果藜芦醇低、中、高剂量组与IL-1β组比较,细胞活力(0.396±0.040、0.435±0.043、0.517±0.052比0.362±0.036,t=5.856、6.437、6.893,P均<0.05)显著提高;细胞早期[(15.23±1.53)%、(9.54±1.05)%、(3.56±0.36)%比(18.63±1.86)%,t=5.587、6.394、6.885,P均<0.05]及晚期凋亡率[(14.29±1.43)%、(8.34±0.83)%、(4.39±0.44)%比(19.56±1.96)%,t=5.136、6.483、6.679,P均<0.05],TNF-α(3.63±0.36、2.89±0.29、1.96±0.20比4.56±0.36,t=5.436、6.135、5.378,P均<0.05),IL-6(2.98±0.29、2.16±0.22、1.86±0.19比3.78±0.38,t=5.842、5.689、6.234,P均<0.05) mRNA表达量及p-NF-κB p65(0.29±0.03、0.169±0.01、0.065±0.01比0.66±0.06,t=5.632、6.137、6.841,P均<0.05)蛋白表达量均显著降低。结论藜芦醇通过降低NF-κB活性抑制IL-1β诱导的椎间盘髓核细胞增殖及炎性反应。

  • 标签: 白藜芦醇 白细胞介素-1β 椎间盘髓核细胞 细胞凋亡 炎性反应
  • 简介:摘要目的探讨姜黄素和藜芦醇对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织巨噬细胞的影响及相关机制。方法将60只BALB/c小鼠随机平均分为CON组、DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组及Eve+Res组,每组10只。CON组为正常对照组,不进行处理,其余5组均采用3%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)制作UC小鼠模型,即自由饮用3%DSS溶液7 d。DSS组单纯建立模型,DSS+Cur组、DSS+Res组在模型基础上分别每天给予0.4 ml姜黄素、0.4 ml藜芦醇灌胃。Eve+Cur组在模型基础上每天给予0.4 ml姜黄素灌胃后,再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。Eve+Res组在模型基础上每天给予0.4 ml藜芦醇灌胃后,再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。给药7 d后处死小鼠,分离培养各组小鼠结肠组织巨噬细胞。观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分。为观察姜黄素和藜芦醇对巨噬细胞的影响,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活性,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞中自噬相关因子LC3、Beclin-1和Atg12的mRNA和蛋白表达,ELISA法检测巨噬细胞培养上清中细胞炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。为进一步探讨机制,采用ELISA法检测mTOR抑制剂Everolimus对IL-6和TNF-α的影响,采用荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞SIRT1/mTOR信号通路相关因子mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达。结果小鼠无死亡。与CON组相比,DSS组、DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性均明显增高,凋亡率均明显降低,Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显增加(均P<0.05);与DSS组相比,DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性则显著降低,凋亡率均明显增高,Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(均P<0.05)。与CON组相比,DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组、Eve+Res组小鼠DAI明显升高,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,IL-6和TNF-α的表达水平明显升高(均P<0.05);与DSS组相比,DSS+Cur组和DSS+Res组小鼠DAI明显降低,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显升高,IL-6和TNF-α的表达水平明显降低(均P<0.05);而与DSS+Cur组和DSS+Res组相比,Eve+Cur组和Eve+Res组小鼠DAI明显升高,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低,IL-6和TNF-α的表达水平则显著升高(均P<0.05)。结论姜黄素和藜芦醇能够抑制UC小鼠结肠组织巨噬细胞的增殖,促进其凋亡,抑制炎症反应和自噬的发生,而上述作用可能是通过调控SIRT1/mTOR信号通路实现的。

  • 标签: 溃疡性结肠炎 姜黄素 白藜芦醇 巨噬细胞 自噬
  • 简介:摘要塞综合征(BS)是一种病因不明的全身系统性血管炎,特定的环境刺激作用于基因易感的个体是其最可能的发病机制。人类白细胞抗原B51虽然是目前公认的BS易感基因,但其所致的发病风险却不足20%,因而提示人体尚存在其他与BS相关的基因位点。细胞因子是免疫系统的信号传递分子,参与了人体所有免疫应答。近年来许多研究报道了细胞因子基因单核苷酸多态性(SNP)与BS的相关性,其中涉及辅助性T细胞1相关细胞因子、白细胞介素1、白细胞介素17以及趋化性细胞因子等多种炎性反应因子和多个炎性反应通路。这些SNP可影响BS的发病风险,也可影响BS患病个体的表型,上述SNP效力的叠加可能是BS发病的遗传机制。(中华眼科杂志,2020,56:876-880)

  • 标签: 贝赫切特综合征 细胞因子类 多态性,单核苷酸
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  • 简介:摘要目的探讨藜芦醇于脑胶质瘤模型体内增强替莫唑胺抗脑胶质瘤作用的分子机制。方法将人源性恶性胶质瘤细胞系T98G移植入BALB/C-nu雌性裸鼠中构建人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型。造模5 d后将造模成功的48只裸鼠按随机数字表法分为溶剂对照组、藜芦醇组、替莫唑胺组、联合用药组、Wnt信号通路激动剂组、Wnt信号通路抑制剂组,每组8只,并分别予二甲基亚砜10 mg/kg、藜芦醇10 mg/kg、替莫唑胺25 mg/kg、藜芦醇10 mg/kg+替莫唑胺25 mg/kg、藜芦醇10 mg/kg+替莫唑胺25 mg/kg+氯化锂2 mg/kg、藜芦醇10 mg/kg+替莫唑胺25 mg/kg+IWR-1 5 mg/kg腹腔注射,1次/d,持续30 d。给药期间持续观察各组裸鼠的生存状况,每隔5天采用MRI检测肿瘤体积。给药30 d后,采用TUNEL染色检测肿瘤细胞的凋亡情况,采用免疫荧光染色检测肿瘤组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、β-连环蛋白的免疫荧光强度,采用Western blotting检测Wnt信号通路相关蛋白(Wnt2、β-连环蛋白)、MGMT、糖原合成激酶3β(GSK3β)蛋白的表达水平。结果肿瘤体积检测显示:与替莫唑胺组相比,联合用药组、Wnt信号通路抑制剂组造模后第20、25、30、35天的肿瘤体积均明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。与联合用药组相比,Wnt信号通路抑制剂组造模后第20、25、30、35天的肿瘤体积均明显减小,Wnt信号通路激动剂组造模后第20、25、30、35天的肿瘤体积均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL染色显示:与替莫唑胺组相比,联合用药组、Wnt信号通路抑制剂组的肿瘤细胞凋亡率均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与联合用药组相比,Wnt信号通路抑制剂组的肿瘤细胞凋亡率明显升高,Wnt信号通路激动剂组的肿瘤细胞凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色显示:与联合用药组相比,Wnt信号通路抑制剂组中MGMT、β-连环蛋白的免疫荧光强度明显降低,Wnt信号通路激动剂组中MGMT、β-连环蛋白的免疫荧光强度明显增强。Western blotting检测显示:与联合用药组相比,Wnt信号通路抑制剂组中Wnt2、β-连环蛋白和MGMT的蛋白表达均明显降低,GSK-3β的蛋白表达明显升高;Wnt信号通路激动剂组中Wnt2、β-连环蛋白和MGMT的蛋白表达均明显升高,GSK-3β的蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论藜芦醇通过降低Wnt2、β-连环蛋白的表达抑制Wnt信号通路,导致MGMT表达下降,从而增强替莫唑胺抗脑胶质瘤作用。

  • 标签: 白藜芦醇 替莫唑胺 Wnt信号通路 神经胶质瘤