简介:为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2+、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为:在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2+浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。
简介:为探明各影响因素对工序加工质量的影响,采用田口方法——稳健性设计对筛分加料工序进行了较为系统的质量评价与参数优化。结果表明:1)热风温度对加料后叶片平均含水率和温度的影响均为最大,简体转速对加料后叶片平均含水率和温度的影响均为最小;2)物料流量对加料后叶片含水率和温度的波动影响均为最大,筒体转速对含水率的波动影响最小,蒸汽压力对温度的波动影响最小;3)为减小加料后叶片含水率和温度的波动,以质量损失最小化为原则,各因素水平最适组合为:热风温度75℃、蒸汽压力0.35MPa、物料流量4000kg/h、筒体转速13.5r/min;4)综合各因素对加料后叶片含水率和温度的影响大小,可将热风温度和物料流量视为重要因素,蒸汽压力视为调节因素,简体转速视为次要因素。
简介:本研究利用Me2Em4正反向引物组合对影响梾木属SRAP-PCR反应体系的Mg2+、Taq聚合酶、dNTP和引物浓度4个因素进行L9(34)正交试验,采用正交设计直观分析及方差分析对影响SRAP反应的4个因素进行分析,并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结果表明,梾木属SRAP-PCR20μL反应体系的最佳组合为:Taq聚合酶2.0U、Mg2+浓度1.5mmol/L、dNTP浓度0.15mmol/L、Primer浓度0.30mmol/L、模板DNA浓度5.5mg/L以及含有2μL不含Mg2+的10倍稀释缓冲液。各因素对梾木SRAP-PCR反应的影响大小依次为:dNTP、Taq聚合酶、Mg2+和Primer。最后运用优化体系从100对SRAP引物组合中筛选出26个多态性SRAP标记,可用于梾木属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。
简介:TILLING(TargetingInducedLocalLesionsInGenomes)即定向诱导基因组局部突变技术,是近年发展起来的一种高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究从PCR模板量及酶切体系中CELI的酶量两个方面对家蚕TILLING技术的检测体系进行了优化。结果表明:本实验在应用TILLING技术筛选家蚕突变体过程中,用于PCR扩增的家蚕基因组DNA模板最佳用量为20ng;CELI酶切的20μL反应体系中,加入的最适酶量为0.5μL(本实验室从芹菜中自提的CELI酶10倍稀释液)。本研究初步对TILLING技术应用于家蚕化学诱导突变检测体系进行了优化,为TILLING技术在家蚕功能基因组研究中的应用奠定了基础。
简介:背景:在风险和不确定性的情况下,森林管理的决策是不确定的,因为这一站的发展不能准确预测未来的木材价格是未知的。确定的计算可能会导致偏见的意见,最佳的森林管理。在树的生长,再生,和木材价格包括不确定性的情况下,优化连续覆盖管理的北方森林。方法:预期和自适应优化方法。的自适应方法优化的保留价格函数,而不是固定的切割年。不同木材品种未来价格进行交叉相关的自回归模型。使用一个模型,描述了交叉和不同物种和年再生结果相关模拟在生长模型的高度变化。树的增长预测与个别树模型,预测的基础上,气候变化引起的增长趋势,这是随机的预测。残差的确定性的直径增长模型进行了模拟。他们由随机树的因素和交叉和自相关时间。结果:分析因素,木材价格在一定的管理计划的净现值计算中最不确定的不确定性。生长和气候趋势不显著的风险和不确定性比树生长。随机预期优化导致更多样化的后切架结构比确定性优化获得。当风险和不确定性被包括在分析中时,切割间隔较短。结论:自适应优化和管理导致14%-6%的净现值比管理,是基于预期的优化。增加森林土地所有者的风险规避LED在成熟林早扦插。风险态度对优化结果的影响较小。
简介:采用改良CTAB法提取了降香黄檀(DalbergiaodoriferaT.Chen)新鲜叶片和硅胶干燥后放置3个月的叶片基因组DNA,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。结果显示新鲜的降香黄檀叶可以得到质量较高的DNA,硅胶保存后部分叶片所提的DNA有降解。优化后反应体系为:25μL反应体系中包括,模板的DNA20ng,TaqDNAPolymerase2.5U,Mg^2+5mmol·L^-1,dNTP0.3mmol·L^-1,引物(S37)0.4μmol·L^-1。反应条件为94℃预变性4min;94℃,30s,36℃1min,72℃2min,40个循环;72℃延伸10min.
简介:为有效利用SSR-PCR技术分析国家一级重点保护植物银缕梅的遗传多样性,采用正交试验设计L16(43),即3因素4水平,对影响SSR-PCR扩增结果的因素(引物,模板DNA浓度和循环数)进行优化筛选,并在此基础上对聚丙烯酰胺凝胶上样量进行优化,建立了适合银缕梅的最佳SSR-PCR反应体系:10μL2×PCRMix、40ng模板DNA、10μmol/L引物,其余用ddH_2O补齐至20μL。PCR扩增程序为:95℃预变性15min,95℃变性30s,57.5℃退火1.5min,72℃延伸1min,30个循环,循环结束后,60℃延伸30min,扩增产物4℃保存。聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量以1.5~2.0μL为最佳。利用优化后体系进行引物筛选,从18对引物中筛选出11对具有多态性引物,说明该反应体系具有良好的稳定性。该体系的建立可以为今后利用SSR标记对银缕梅遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供基础。