简介:摘要目的评估三种商业化试剂盒对新型冠状病毒奥密克戎变异株核酸检测的效果。方法收集2021年12月北京市监测发现的经测序分析确定为新型冠状病毒奥密克戎变异株的咽拭子标本8份,同时收集北京市2021年11月监测发现的新型冠状病毒德尔塔变异株咽拭子标本5份,用三种针对新型冠状病毒奥密克戎变异株的商业化荧光定量RT-PCR试剂盒进行检测,对检测效果进行比较分析。取其中两份Ct值较低的样本10倍系列稀释5个梯度,用于比较检测试剂的灵敏性。结果三种试剂盒均能特异性地检出8份奥密克戎变异株和5份非奥密克戎株(德尔塔变异株)。试剂A和B的灵敏性高于试剂盒C一个稀释度。结论三种试剂盒均能特异性地检测奥密克戎变异株。试剂盒A核酸用量最少,虽然只检测一个变异位点(Q498R),但该位点是奥密克戎变异株特有的,从而使实验操作和结果判定都更简便。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA同源盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)在脑胶质瘤中的表达及生物学功能。方法首先分析HOXA11-AS在癌症基因组图谱(TCGA)计划数据库(689例)的低级别脑胶质瘤、胶质母细胞瘤以及GTEx数据库(255例)的正常脑组织样本中的表达情况。基于TCGA数据库,进一步分析HOXA11-AS在世界卫生组织(WHO)Ⅱ~Ⅳ级的脑胶质瘤样本中的表达情况。根据HOXA11-AS表达量的中位数分为高表达组和低表达组,并绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较HOXA11-AS低表达组与高表达组脑胶质瘤患者的生存差异。进一步的体外实验以人星形胶质细胞为对照组,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验验证HOXA11-AS在脑胶质瘤U251、U87及LN229细胞株中的表达。U87和LN229细胞株中分别使用携带HOXA11-AS cDNA序列的过表达慢病毒载体构建过表达HOXA11-AS的细胞株,使用空载慢病毒载体构建对照细胞株。U87和LN229细胞株中分别使用siRNA转染敲低HOXA11-AS的表达。进一步通过EdU增殖实验、细胞划痕实验和Transwell实验研究HOXA11-AS对胶质瘤细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果HOXA11-AS在正常脑组织、低级别脑胶质瘤及胶质母细胞瘤中表达量的差异具有统计学意义(P<0.001)。TCGA数据库中,WHO Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤的HOXA11-AS表达量均高于Ⅱ级脑胶质瘤(P<0.001)。全级别脑胶质瘤患者中,HOXA11-AS高表达组(n=344)的总生存期短于低表达组(n=345,P<0.001)。进一步的体外实验中,qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,U87组、LN229组及U251组HOXA11-AS的表达均升高(均P<0.001)。U87和LN229过表达组HOXA11-AS的表达均较其对照组上调(均P<0.001)。U87敲低组、LN229敲低组的HOXA11-AS表达均较其对照组下调(均P<0.001)。EdU增殖实验结果显示,U87和LN229过表达组的EdU阳性率分别高于U87和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的EdU阳性率均下降(均P<0.001)。细胞划痕实验结果显示,U87和LN229过表达组的细胞迁移率分别高于U87和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的细胞迁移率均下降(均P<0.001)。Transwell实验结果显示,U87和LN229过表达组的穿胶细胞数分别多于U87对照组和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的穿胶细胞数均低(均P<0.05)。结论HOXA11-AS在脑胶质瘤中呈高表达,并可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。
简介:目的检测配对盒家族基因1(PAX1)在不同宫颈病变宫颈脱落细胞中的甲基化水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变分子标志物的价值。方法采用焦磷酸测序法检测PAX1基因的甲基化情况。比较正常组织与低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)和宫颈癌组织(各组20例)甲基化水平的差异。并采用受试者工作特性曲线(ROC)确定癌变组与非癌变组之间的判别临界值。结果①正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为(4.57±2.43)%,LSIL组为(3.383±2.364)%,HSIL组为(13.64±13.35)%,宫颈癌组为(26.39±18.53)%,其中正常宫颈组与LSIL组PAX1基因甲基化水平比较,差异无统计学意义(P〉0.05),其他各组间比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。②ROC曲线下面积(AUC)为0.893,提示有较高的诊断价值。取PAX1甲基化水平27%作为临界值,检测灵敏度为97.1%,特异度为85.2%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测对于宫颈癌早期临床诊断具有潜在的诊断价值。
简介:摘要:本文主要以20ng·mL-1,以及100ng·mL-1这两个浓度的NSE检测试剂盒样品为例。运用时间分辨免疫荧光法、化学发光以及电化学发光免疫法、酶联免疫法等方法,测定5种NSE试剂盒的最低检出限、并对线性批间以及批内精密度,以此来进行准确的分析和评价。经过相关实验之后可以发现,5种试剂盒存在着较大的低浓度准确性指标差异,试剂盒不同,其检测结果也存在差异。但是像最低检出限以及精密度等,都能够有效符合检测要求。因此总的来说,国家需要建立关于NSE检测试剂盒的质量检测标准,这样既能够严格控制试剂盒的准确性,同时也能够更好的比较不同试剂盒的检测结果。
简介:【摘要】目的:艾盒灸联合小茴香盐包烫熨法治疗腹腔镜术后腹胀的临床观察。方法:选取130例患者均在2022年2月至2024年1月期间,根据随机数字表法分为2组。对照组65例采用艾盒灸中医理疗方法,观察组65例采用艾盒灸联合小茴香盐包烫熨法。结果:观察组总有效率93.85%高于对照组(P<0.05),观察组术后首次排气时间(25.32±2.2)h短于对照组,腹胀率7.69%低于对照组(P<0.05),观察组中医证候治疗后嗳气(1.30±0.60)分、腹痛(1.34±0.62)分、腹胀(1.62±0.81)分、总积分(4.33±1.61)分低于对照组(P<0.05)。结论:艾盒灸联合小茴香盐包烫熨法治疗腹腔镜术后腹胀效果显著。
简介:目的对食源性致病菌分离株的耐药情况进行调查,掌握我国食源性致病菌的耐药趋势和耐药谱,为指导抗生素在人类临床和动物饲养中的合理应用,控制耐药菌株的传播提供重要的参考性数据。方法根据CLSI推荐的微量肉汤稀释法进行药敏检验,定量测定致病菌的最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)。结果66株单增李斯特菌对亚胺培南、红霉素、环丙沙星、青霉素、左氧氟沙星、四环素、氯霉素、利福平、庆大霉素、氨苄西林、强力霉素耐药;耐药率分别是:9.1%、6.1%、4.5%、4.5%、3.0%、3.0%、3.0%、3.0%、1.5%、1.5%、1.5%。MIC值4~〉128不等。对头孢噻吩、万古霉素、复方新诺明完全敏感。结论吉林省市售食品中检出的单增李斯特存在多种抗生素耐药。有1株6重耐药;1株4重耐药;2株2重耐药。但66株中耐药谱没有一致的菌株。应高度重视和加强食源性单增李斯特菌的耐药性监测,以保证食品安全和人类健康。
简介:摘要目的通过与直接荧光抗体染色法和流感病毒核酸检测方法——逆转录酶-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)比较,探讨免疫荧光法流感病毒抗原检测试剂盒的临床应用价值。方法采用流感病毒抗原检测(免疫荧光法)试剂盒(简称Sofia FIA)、直接荧光抗体染色法(DFA)和RT-PCR方法,对2017年7月至12月,350例发热门诊就诊患者进行病原学检测。结果Sofia FIA方法共检出甲型/乙型流感186例,总阳性检出率53.1%,其中检出甲型流感病毒35.4%,乙型流感病毒17.7%。Sofia FIA与RT-PCR比较,针对甲乙型流感联合检测,敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、一致率、kappa值分别为89.4%、100.0%、100.0%、86.6%、93.7%、0.873;针对甲型流感分别为87.9%、100.0%、100.0%、92.5%、95.1%、0.897;针对乙型流感分别为92.5%、100.0%、100.0%、98.3%、98.6%、0.952。DFA与RT-PCR比较,针对甲乙型流感联合检测,敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、一致率、kappa值分别为83.2%、100.0%、100.0%、80.2%、90.0%、0.800;针对甲型流感分别为82.3%、100.0%、100.0%、89.3%、92.9%、0.847;针对乙型流感分别为85.1%、100.0%、100.0%、96.6%、97.1%、0.902。结论Sofia FIA与DFA方法的敏感性、特异性高,与RT-PCR的一致性高,用于流感的筛查有一定临床意义。
简介:摘要目的探讨同源盒基因D3(HOXD3)在胶质瘤中的表达及其生物学功能。方法回顾性收集中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)和癌症基因组图谱(TCGA)中1001例胶质瘤患者的临床资料及转录组数据,采用单因素方差分析比较不同病理分级胶质瘤间HOXD3表达水平的差异;并根据HOXD3表达水平的均值,分别将CGGA和TCGA数据库中的患者分为HOXD3低表达组与HOXD3高表达组,采用Kaplan-Meier生存分析比较HOXD3高表达组与HOXD3低表达组间生存期的差异,采用单因素回归分析及多因素Cox回归分析明确HOXD3对胶质瘤患者预后的影响;最后通过基因本体(GO)分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析以及基因富集分析(GSEA)探究HOXD3可能参与的信号通路,并采用Pearson相关分析法分析HOXD3与其他基因表达的相关性。结果(1)HOXD3的表达水平随着胶质瘤病理分级的升高逐渐升高(CGGA数据中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的表达水平分别为0.737±0.085、1.323±0.125、1.652±0.083;TCGA数据中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的表达水平分别为0.082±0.008、0.177±0.014、0.259±0.016),不同病理分级间HOXD3表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与HOXD3低表达组相比,HOXD3高表达组患者的生存期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。CGGA数据显示HOXD3表达水平(HR=1.348,95%CI:1.171~1.552,P=0.000)、肿瘤病理分级和异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变状态为胶质瘤患者预后的独立影响因素;TCGA数据显示HOXD3表达水平(HR=2.147,95%CI:1.252~3.681,P=0.005)、年龄、肿瘤病理分级和IDH1突变状态为胶质瘤患者预后的独立影响因素。(3)GO分析、KEGG分析和GSEA结果均提示HOXD3参与细胞周期的调控;Pearson相关分析发现HOXD3的表达水平与多种细胞周期调控基因的表达水平呈明显正相关关系(P<0.05)。结论HOXD3为胶质瘤预后的独立影响因素,其生物学功能与胶质瘤细胞的周期调控相关。
简介:摘要目的探讨叉头盒蛋白P3(FOXP3)基因沉默后对人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学行为的影响及其机制。方法人结肠癌细胞(SW480细胞)购自美国典型培养物保藏中心。将SW480细胞分为FOXP3-小发夹核糖核酸(shRNA)组(转染FOXP3-shRNA)、NC-shRNA组(转染shRNA空载的慢病毒)及Control组(仅加入培养基处理)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXP3基因信使核糖核酸(mRNA)表达;蛋白质印迹法检测Wingless及int-1家族成员3A(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)基因蛋白表达。两组间对比行t检验,多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用SNK检验)。结果FOXP3-shRNA组人结肠癌细胞中FOXP3基因mRNA表达、24、48、72、96 h后吸光度值、侵袭率、Wnt3a和β-catenin蛋白表达显著低于NC-shRNA组和Control组细胞[FOXP3基因mRNA表达分别为0.11±0.04比0.98±0.05、1.05±0.07,24 h吸光度值分别为0.59±0.04比0.65±0.05、0.73±0.06,48 h吸光度值分别为0.67±0.05比0.86±0.06、0.95±0.07,72 h吸光度值分别为0.76±0.06比1.15±0.07、1.26±0.08,96 h吸光度值分别为0.87±0.06比1.34±0.08、1.45±0.09,侵袭率分别为(23.49±1.99)%比(10.38±2.56)%、(10.38±2.56)%,Wnt3a分别为0.22±0.04比0.76±0.05、0.78±0.06,β-catenin分别为0.31±0.03、0.84±0.06、0.87±0.07],凋亡率显著高于NC-shRNA组和Control组细胞[分别为(23.49±1.99)%比(10.38±2.56)%、(10.38±2.56)%],差异有统计学意义(F=20.042、17.233、11.145、13.427、16.538、16.135、54.182、19.341、26.177、16.135,P<0.05)。结论FOXP3基因沉默后可显著抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路基因表达有关。
简介:摘要目的评价Luminex NxTAGTM RPP对17种呼吸道病原体的检测性能。方法通过比较Luminex NxTAGTM RPP试剂盒与一代测序检测临床标本的结果,以评价Luminex NxTAGTM RPP试剂盒的检测性能。结果与一代测序相比,Luminex NxTAGTM RPP试剂盒对流感病毒A型(FluA)、2009甲型H1N1流感病毒(H1N1pdm09)、H3N2亚型流感病毒(H3N2)、流感病毒B型(FluB)、副流感病毒2型(PIV 2)、副流感病毒3型(PIV 3)、副流感病毒4型(PIV 4)、肺炎衣原体(CP)和冠状病毒HKU1(CoV HKU1)检测具有高度一致性;对腺病毒(ADV)、冠状病毒229E(CoV 229E)、冠状病毒OC43(CoV OC43)、呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(RV)、博卡病毒(BoV)的检测结果具有中度一致性。然而对于副流感病毒1型(PIV 1)、偏肺病毒(MPV)两种方法检测一致性较差。结论Luminex NxTAGTM RPP试剂盒本身具有检测准确、高通量与操作时间短等特点,对大多数呼吸道病原体的检测表现出良好的性能。
简介:摘要目的比较四种商品化诺如病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒的效果。方法将美国疾控中心诺如病毒检测方法作为标准方法,使用4种商品化试剂盒对30份已知诺如病毒基因型阳性样本(5种GI和8种GII基因型)和50份腹泻患者粪便样本进行检测,对检测结果进行比较。同时对轮状病毒、星状病毒、肠道腺病毒和札如病毒进行特异性检测。结果30份已知基因型样本四种商品化试剂盒与标准方法均检测阳性。轮状病毒、星状病毒、肠道腺病毒和札如病毒检测阴性。试剂盒A、B、C、D和标准方法分别检测50份腹泻样本,检出率分别为52.0%(26/50)、46.0%(23/50)、50.0%(25/50)、48.0%(24/50)、54.0%(27/50);试剂盒A、B、C、D与标准方法的一致性分别为96.3%、85.2%、92.6%和88.9%。试剂盒C的GI检测范围为104~108 copies/μL,GII检测范围为102~108 copies/μL。结论四种试剂盒均能检测本研究出现的诺如病毒基因型,试剂盒A和C检测效果优于试剂盒B和D。
简介:摘要目的评价两种商品化新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和抗体检测EIA试剂盒的应用性能。方法使用两种商品化SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒(A和B),以疫苗免疫前血清44例、免疫后1个月血清120例、COVID-19患者愈后6个月的恢复期血清64例作为样本盘,进行中和抗体检测,同时通过活病毒微量中和试验(micro-neutralization test,micro-NT)检测上述血清样本的50%中和抗体滴度(50% neutralization titer,NT50)。分析两种商品化试剂盒与活病毒中和试验在定性及定量结果上的一致性。结果定性结果分析发现,以micro-NT检测结果作为标准,A和B试剂盒的阳性符合率分别为97.40%和100.00%;阴性符合率分别为97.30%和95.95%;约登指数分别为0.95和0.96。定量结果分析发现,对于疫苗免疫后样本,A、B试剂盒与micro-NT检测结果的相关系数分别为0.24(P<0.05)和0.52(P<0.000 1);对于恢复期血清样本,A、B试剂盒与micro-NT检测结果相关系数分别为0.81(P<0.000 1)和0.89(P<0.000 1)。结论A和B两种商品化中和抗体检测试剂盒与micro-NT定性结果具有良好一致性,两种试剂盒对恢复期血清样本的中和抗体滴度检测与micro-NT结果表现出了更强的相关性。
简介:摘要目的探讨ATP结合盒转运子E1(ABCE1)在胶质瘤组织的表达及其与细胞增殖、周期和转移的关系。方法选取安阳市人民医院和河南省肿瘤医院2018年12月到2020年12月手术收集的71例神经胶质瘤和癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析ABCE1蛋白表达水平。将神经胶质瘤细胞U251分为对照组和ABCE1 KD组,分别采用对照短发卡RNA(shRNA)和ABCE1 shRNA慢病毒感染建立稳定细胞系,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖;采用流式细胞术分析两组细胞凋亡变化;采用划痕实验和Transwell分析两组细胞迁移能力;采用Western blot分析两组细胞凋亡和迁移相关蛋白表达水平。计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织ABCE1蛋白表达水平(0.87±0.12)明显低于神经胶质瘤组织(2.09±0.22),差异有统计学意义(t=3.109,P<0.05)。对照组细胞吸光度值(1.88±0.22)明显高于ABCE1 KD组(1.30±0.18),差异有统计学意义(t=2.019,P<0.05)。克隆形成实验结果显示,对照组细胞克隆形成率[(59.32±6.09)%]明显高于ABCE1 KD组[(30.12±4.99)%],差异有统计学意义(t=5.891,P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.01±0.34)%]明显低于ABCE1 KD组[(19.43±3.09)%],差异有统计学意义(t=3.011,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(97.43±5.89)个]明显高于ABCE1 KD组[(57.91±4.32)个],差异有统计学意义(t=4.009,P<0.05)。对照组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(1.38±0.31)明显低于ABCE1 KD组(2.01±0.23),差异有统计学意义(t=3.118,P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.19±0.15)明显高于ABCE1 KD组(0.55±0.19),差异有统计学意义(t=2.791,P<0.05)。结论ABCE1蛋白神经胶质瘤组织中表达水平显著增加,并参与胶质瘤细胞的增殖、凋亡和迁移等恶性细胞生物学过程。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-17-5p调控同源盒蛋白(HOXB13)的分子机制。方法从SD大鼠胸主动脉分离和培养血管平滑肌细胞(VSMCs);利用细胞计数试剂盒检测细胞增殖;反转录定量聚合酶链反应检测miRNA和miR-17-5p的表达;细胞转染miR-17-5p mimics、anti-miR-17-5p和小干扰RNA(siRNA)-HOXB13寡核苷酸;荧光素酶报告基因检测miR-17-5p对靶基因的调控;蛋白质印迹法检测蛋白表达。采用单向方差分析和Tukey检验进行统计学分析。结果成功培养出VMSCs,并通过抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫染色进行验证。血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激VSMCs的增殖和诱导表型转换,促进HOXB13表达并降低miR-17-5p表达。荧光素酶报告分析证实miR-17-5p靶向HOXB13 mRNA的3’端-非翻译区下调其表达。anti-miR-17-5p组细胞增殖水平(1.362±0.076)高于阴性对照组(0.795±0.087),而miR-17-5p mimics组细胞增殖水平(0.164±0.057)低于阴性对照组(F=31.865,P<0.01),差异有统计学意义。miR-17-5p/HOXB13轴调控α-SMA和抗增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结论miR-17-5p通过调控HOXB13介导VSMCs的表型转换和增殖。
简介:目的对广东省首例中东呼吸综合征(MERS)病例进行实验室快速诊断,并比较2种不同品牌商品化试剂盒对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的检测效果。方法于2015年5月28日采集首例韩国输入疑似MERS病例的3份咽试子和1份血清样本,以及陆续采集50份密切接触者的咽试子样本,根据WHO和国家MERS实验室检测技术指南推荐的荧光定量PCR方法,分别使用针对upE、ORF1a、ORF1b3个目的基因的3对引物探针开展检测。利用首例MERS病例的阳性核酸提取物分别对A、B2种商品化MERS-CoVRNA荧光定量PCR检测试剂盒的灵敏度和特异度进行评估。结果疑似MERS病例的3份咽拭子样本同时检出upE、ORF1a、ORF1b3个目的基因和1份血清样本同时检出upE、ORF1a2个目的基因,均证实为MERS-CoV核酸阳性。A、B2种试剂盒检测病例的3份咽拭子样本均为MERS-CoV核酸阳性,并能检测到经10倍稀释的MERS-CoV核酸提取物,但均未能检测出病例血清样本阳性。使用国家推荐荧光定量PCR方法及A、B2种商品化试剂盒检测50份病例密切接触者的咽拭子样本的MERS-CoV核酸,结果均为阴性。结论首次对1例输入性MERS病例进行了实验室快速诊断;WHO和国家MERS实验室诊断技术指南中的荧光定量PCR的病毒检测方法,以及A、B2种商品化试剂盒均可用于MERS-CoV感染的实验室诊断。