简介:目的探讨微小RNA-3960(miR-3960)在结肠癌组织中的表达情况及其临床意义。方法收集2014年1月至2016年12月经手术切除的结肠癌组织及对应癌旁组织40例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-3960的表达水平,分析miR-3960表达与结肠癌临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润程度、淋巴结转移和TNM分期)的关系。结果结肠癌组织中miR-3960的表达水平为0.462±0.291,低于癌旁组织的0.981±0.531,差异有统计学意义(P〈0.01);miR-3960表达与结肠癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(均P〈0.05),但与性别、年龄和肿瘤大小无关(P〉0.05)。结论miR-3960在结肠癌组织中表达下调,且与TNM分期、浸润深度、分化程度和淋巴结转移有关,可能与结肠癌的发生、发展有一定关系。
简介:目的探讨微小RNA-20a(miR-20a)对宫颈癌SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响及可能机制。方法采用Lipofectamine2000脂质体法将miR-20a抑制剂和阴性对照载体分别转染SiHa细胞株。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测两组细胞中miR-20a的表达以验证转染效果,细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验及MTT法分别检测miR-20a的表达抑制对SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响;荧光素酶报告实验及Westernblotting验证miR-20a对下游预测靶基因自噬相关蛋白7(ATG7)的调控作用。结果QPCR检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-20a抑制剂组SiHa细胞中miR-20a的表达量显著降低(P〈0.01),证明转染模型构建成功。细胞迁移实验显示,转染48h后,阴性对照组细胞的划痕愈合率为(75.68±5.94)%,高于抑制剂组的(38.24±7.68)%(P〈0.01)。Transwell细胞侵袭实验显示,转染48h后,阴性对照组穿膜细胞数为(96.35±10.23)个,多于抑制剂组的(23.54±7.26)个(P〈0.01)。MTT法检测显示,阴性对照组和抑制剂组细胞增殖能力的差异无统计学意义(P〉0.05)。与阴性对照组相比,转染miR-20a模拟物+ATG7野生型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性显著下降(P〈0.01),而转染miR-20a模拟物+ATG7突变型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性无显著变化(P〉0.05);Westernblotting检测显示,与阴性对照组比较,抑制剂组细胞ATG7蛋白表达量显著增加(P〈0.01)。结论降低miR-20a的表达能显著抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力,但细胞增殖能力不受影响,这可能与miR-20a直接作用于其下游靶基因ATG7并调控其表达紧密相关。
简介:目的探讨微小RNA-216(miR-216)是否影响胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨耐药。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测胰腺癌吉西他滨耐药细胞株BxPC-3和非耐药株CFPAC-1中的miR-216表达水平;采用Lipofectamine2000脂质体法将miR-216模拟物(mimics组)及抑制剂(inhibitor组)分别转染BxPC-3细胞,以进行脂质体转染的BxPC-3细胞为对照组,采用QPCR检测转染48h后各组miR-216表达水平,CCK-8法检测转染24、48、72h后各组吸光值以评价增殖率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测各组转染48h后的细胞凋亡率,CCK-8法检测各组对吉西他滨的半数抑制浓度(IC50)。利用生物信息学数据库miRBase预测miR-216的靶基因,利用cytoscape3.5.1及其插件CluGO将其进行GeneOncology(GO)功能注释。结果BxPC-3细胞中miR-216表达量为3.010±0.901,高于CFPAC-1细胞的1.049±0.074(P〈0.05);对照组、mimics组和inhibitor组的miR-216表达量依次为1.130±0.145、4.843±0.782和0.256±0.145,差异有统计学意义(P〈0.05)。与对照组比较,mimics组的细胞增殖水平升高而凋亡率降低,inhibitor组的增殖水平降低而凋亡率升高,差异有统计学意义(P〈0.05)。对照组、mimics组和inhibitor组的IC(50)值为(2.134±0.591)μg/ml、(4.518±0.862)μg/ml和(0.481±0.073)μg/ml,BxPC-3细胞转染inhibitor后对吉西他滨的耐药性降低,转染mimics后对吉西他滨的耐药性增强(P〈0.05)。miR-216的预测靶基因共有138个,GO功能主要富集于与肿瘤发生发展相关的细胞增殖、凋亡与侵袭迁移过程。结论miR-216在胰腺癌耐药细胞株中表达上调且可以诱导胰腺癌细胞增殖,暗示其可以发挥类似促癌基因的作用且参与吉西他滨耐药过程,有可能成为胰腺癌早期诊断和新型生物治疗的靶点。
简介:目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物(mimics组)和阴性对照(NC组),以未转染的MGC-803细胞为对照组;采用实时定量PCR(QPCR)检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率,MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,分别采用QPCR和Westernblotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9mRNA和蛋白水平,同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果QPCR结果显示,对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368,与对照组和NC组比较,mimics组的miR-148a-3p水平升高(P<0.05)。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱(P<0.05)。mimics组MGC-803细胞凋亡率为(15.2±1.6)%,高于对照组的(3.5±0.9%)%和NC组的(4.5±1.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组和NC组比较,mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调,而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡,可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用,调控miR-148a-3p/MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。
简介:Objective:TostudytheeffectofantisenseVEGFRNAonratC6gliomasinvivoandfindoutthefeasibilityofantiangiogenesistherapywithantisenseVEGFRNAformalignantgliomas.Methods:ParentalratC6gliomacellsandC6cellstransfectedwithantisenseVEGFcDNAwereimplantedintracerebrallyandsubcutaneouslyintoSDratsascontrolandtransfectedgroup.RatsbearingcerebralandsubcutaneousC6gliomasweretreatedwithantisenseVEGFcDNAastreatedgroupandsenseVEGFcDNAandemptyvectorascontroloftreatedgroup.Thegeneralmanifestation,survivaltime,MRIandhistopathologicalchangesofallratswereobserved.Thevolumeofsubcutaneouslyimplantedtumorswasdeterminedregularly.InsituhybridizationandimmunohistochemicalstainingwereusedfordetectionofVEGFgeneexpressionofgliomaswhilePCNAimmunostainingandTUNELmethodforexaminationofproliferationactivityandapoptosisofgliomas,respectively.Results:Thesurvivaloftheratsintransfectedandtreatedgroupwasprolonged.Thereweretworatssurvivingover90dinthetreatedgroupandtheirtumorsdisappeared.TheVEGFgeneexpression,thenumberofmicrovesselsandtheproliferationactivityweredecreasedandalargeamountofapoptoticcellscouldbefoundincerebralandsubcutaneousgliomasintreatedandtransfectedgroups.Conclusion:VEGFisoneofthecandidategenesforgenetherapyofmalignantgliomas.AntisenseVEGFRNAcombinedwithothertherapiesshouldbestudiedfurtherforenhancingthetherapeuticeffectofmalignantgliomas.
简介:Objective:ThepresentstudyaimedtoinvestigatecircularRNA(circRNA)expressioninuvealmelanoma(UM).Methods:First,weusedmicroarraytocomparetheexpressionprofilesofcircRNAinfiveUMsamplesandfivenormaluveatissues.Next,bioinformaticsanalyses,includinggeneontology(GO)analysisandpathwayanalysis,wereappliedtostudythesedifferentiallyexpressedcircRNAstopredictpathogenicpathwaysthatmaybeinvolved.Quantitativereal-timepolymerasechainreaction(qRT-PCR)in20UMsamplesand20normaluveasampleswasusedtoconfirmthecircRNAexpressionprofilesobtainedfromthemicroarraydata.Finally,weanalyzedtheinteractionbetweenvalidatedcircRNAsandtheirpotentialcancer-associatedmiRNAtargets.Results:Intotal,50,579circRNAs[foldchange(FC)≥2.0;P<0.05],including20,654up-regulatedand29,925down-regulatedcircRNAs,wereidentifiedasdifferentiallyexpressedbetweenUMtissuesandnormaluveatissues.WeusedqRT-PCRtoverifysevendysregulatedcircRNAsindicatedbythemicroarraydata,includinghsacirc0119873,hsacirc0128533,hsacirc0047924,hsacirc0103232,hsa-circRNA10628-6,hsacirc0032148andhsacirc0133460,whichmaybepromisingcandidatestostudyfuturemolecularmechanisms.Conclusions:Thisstudyexplored,forthefirsttime,theabnormalexpressionofcircRNAsinUManddescribedtheexpressionprofileofcircRNAs,providinganewpotentialtargetforthemechanismofUMandfuturetreatmentofUM.
简介:Longnon-codingRNAs(lncRNAs)refertoagroupofRNAsthatareusuallymorethan200nucleotidesandarenotinvolvedinproteingeneration.Instead,lncRNAsareinvolvedindifferentregulatoryprocesses,suchasregulationofgeneexpression.DifferentlncRNAsexistthroughoutthegenome.LncRNAsarealsoknownfortheirrolesindifferenthumandiseasessuchascancer.HOTAIRisanlncRNAthatplaysaroleasanoncogenicmoleculeindifferentcancercells,suchasbreast,gastric,colorectal,andcervicalcancercells.Therefore,HOTAIRexpressionlevelisapotentialbiomarkerfordiagnosticandtherapeuticpurposesinseveralcancers.ThisRNAtakespartinepigeneticregulationofgenesandplaysanimportantroleindifferentcellularpathwaysbyinteractingwithPolycombRepressiveComplex2(PRC2).Inthisreview,wedescribethemolecularfunctionandregulationofHOTAIRanditsroleindifferenttypesofcancers.
简介:客观干扰素(IFN)和ribavirin(RBV)的联合是为丙肝的标准治疗病毒(HCV)感染。HCV遗传型2a对治疗证明了更顺从,但是它的功效是还有限的。这研究试图在HCV遗传型2a感染的一种情况中调查差的反应的机制。方法:我们从一个病人分析了HCVRNA的动态变化,与HCV遗传型2a感染了,显示出差的virological回答到是的IFN/RBV判定了12在由HCV的治疗的开始以后的星期克隆定序。然后,我们构造了subgenomic日语有人性化的Gaussia的暴发性的hepatitis-1(JFH1)replicon和不同妄想的replicons酶基因。妄想的replicons从subgenomicJFH1replicon,NS5A区域被病人顺序从pre/posttreatment在代替被导出,并且到IFN的妄想的replicons危险性被相对Gausia酶活动评估。预告的处理HCV定序的结果显得几乎一致,并且quasispecies变化是进一步的在12星期治疗以后简化的更多。而且,quasispecies变化似乎相对,在NS5A更多样化为IFN反应关键的一个区域,和每妄想的replicons展出了不同反应到IFN。结论在长期的感染的功课期间,HCV人口似乎被使适应病人免疫学的系统,并且推进被IFN/RBV治疗的联合选择,显示quasispecies可以完全与IFN的与那些不同的目标由另外的药的增加消除了。另外,到IFN的妄想的replicon的各不同的反应与氨基酸变化在或在在长期的感染和IFN/RBV治疗期间决定NS5A的区域(ISDR)的IFN敏感附近有关是最可能的。
简介:目的探讨甲状腺微小乳头状癌(papillarymicrocarcinomaofthyroid,PMCT)的临床病理特点。方法分析84例PMCT的淋巴结转移率与患者性别、发病年龄、病灶数目及有无伴发良性病变或同时患有对侧甲状腺乳头状癌等因素的相关性。结果84例PMCT中,男11例、女73例,男、女性的平均发病年龄分别为51.7和47.4岁,淋巴结转移率分别为45.45%和10.96%(P=0.003)。84例PMCT中,57例伴发甲状腺其他良性病变,9例同时患有另一叶甲状腺乳头状癌,66例淋巴结转移率为6.06%(4/66),明显较单纯PMCT者的50.0%(9/18)为低(P=0.000)。以45岁为界〈45岁和≥45岁组的淋巴结转移率分别为10.81%,19.15%(P=0.294)。多灶与单发结节者淋巴结转移率分别为17.65%和7.46%,(P=0.314)。结论PMCT淋巴结转移率与病灶数目及患者年龄不相关(P〉0.05),与性别及有无伴发甲状腺其他病变相关(P〈0.05)。男性PMCT淋巴结转移率较高,单纯PMCT淋巴结转移率较高。
简介:环状RNA(circularRNAs,circRNAs)是一种新型的内源性非编码RNA,与其他线性RNA不同,它形成共价闭合连续的环形结构,在真核生物的转录组中占有很大的比例。这些circRNAs主要来源于内含子或者外显子,通过反向拼接或套索内含子方式产生。近来研究发现,circRNAs在细胞质中富集,具有保守性和相对稳定性,这些特性赋予了circRNAs许多潜在的功能,例如充当微小RNA(miRNA)海绵,结合RNA相关的蛋白质,形成RNA蛋白复合体从而调节基因的转录。有证据表明circRNAs在消化道肿瘤中可能发挥重要的作用并且能够作为某些疾病的诊断性或预测性生物标记物。本文结合国内外的最新研究报道,对circRNAs在消化道肿瘤中的研究进展作一综述,以期为消化系统肿瘤预测、诊断和治疗提供新的思路。
简介:目的探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)在胃癌组织中的表达及其意义。方法用免疫组织化学SP方法检测21例胃溃疡组织、30例不同时期胃癌组织中MCM5的表达。结果MCM5高表达于胃癌细胞核,胃癌组织中的MCM5表达率为63.3%(19/30),胃溃疡组织中MCM5表达率4.7%(1/21),两者相比差异有统计学意义(P〈0.05);Ⅳ期胃癌患者的MCM5表达明显高于Ⅱ-Ⅲ期的表达(P〉0.05),Ⅱ-Ⅲ期的表达明显高于Ⅰ期(P〈0.01)。结论MCM5与胃癌发生、发展相关,可作为新的胃癌增殖标志物。