简介:摘要:白癜风是一种常见的慢性选择性地表皮黑素细胞破坏进而出现皮肤白斑的色素脱失性疾病。这一复杂疾病无论是用单一的免疫机制还是非免疫机制均不能充分解释,目前认为是具有遗传倾向的个体在生物因素、环境因素还有免疫因素的共同作用下构成了白癜风的病理生理基础。代谢组学是一种用于研究疾病引起代谢谱异常的分析技术。外泌体是细胞间信号传递的重要机制。研究发现基于代谢组学分析白癜风患者的血浆外泌体代谢谱异常,以此揭示血浆外泌体对白癜风免疫机制及相关的影响。在这篇综述中,我们研究了白癜风患者血浆外泌体异常的代谢谱特征,就基于血浆外泌体利用代谢组学在白癜风的免疫机制及相关生物标志物的最新研究进展进行论述。
简介:摘要:白癜风是一种由自体表皮黑素细胞进行性破坏引起的色素脱失性皮肤病。其发病机制尚未阐明,目前主要的理论包括遗传、氧化应激、环境因素和自身免疫耐受的破坏等。近年来,外泌体在自身免疫疾病中作用备受关注,研究认为外泌体及其携带的 miRNA 可能以细胞间通讯的方式参与白癜风发病的过程,因此,外泌体的潜在临床价值可能是作为生物标志物和潜在的治疗工具。在这篇综述中,我们研究了外泌体与白癜风的关系,就外泌体miRNA 在白癜风的发病机制以及治疗中的作用的最新研究进展进行论述。
简介:摘要目的筛选慢性乙型肝炎患者经异甘草酸镁(MgIG)治疗前后血浆外泌体的差异蛋白质组。方法分别采集36例MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后的血浆标本(2 ml/例),利用超速离心方法提取血浆外泌体,利用Nanosight NS300颗粒粒度分析仪检测外泌体颗粒的浓度和内径。随机各抽取3例MgIG治疗前后组的血浆外泌体,裂解后提取蛋白,利用胰蛋白酶消化后,用液相色谱串联质谱技术进行label-free差异蛋白质组学分析,筛选出变化倍数1.5倍以上的差异蛋白。利用酶联免疫吸附测定技术对感兴趣差异蛋白的表达量进行验证(n = 30)。计量资料的比较采用配对样本均数的t检验。结果提取的外泌体平均颗粒浓度为2.2×109个/ml,平均粒径为(107±52)nm,与理论血浆外泌体大小值相符,证明成功提取了血浆外泌体。蛋白质组学结果显示,MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后相比较,共筛选出153个差异蛋白,包括85个上调蛋白和68个下调蛋白。酶联免疫吸附实验结果显示,慢性乙型肝炎患者MgIG治疗后组和治疗前组相比较,血浆外泌体中肝细胞生长因子激活剂和肝细胞生长因子样蛋白浓度差异有统计学意义(P < 0.05)。肝细胞生长因子激活剂在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(45.9±9.4)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.9±2.0)μg/ml。肝细胞生长因子样蛋白在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(23.4±4.9)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.8±2.2)μg/ml。酶联免疫吸附实验结果均与蛋白质组学结果一致。结论本研究成功筛选出MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后血浆外泌体差异蛋白质组,为研究MgIG治疗慢性乙型肝炎的分子机制提供实验依据。
简介:目的:探究肺癌患者与肺部良性结节病人血浆外泌体中蛋白质组的差异。方法:收集肺癌与肺部良性结节病人的术前血浆,随机选取肺腺癌病人血浆15例、肺鳞癌病人血浆10例作为实验组,肺部良性结节病人血浆5例作为对照组,采用超速离心法分离得到外泌体,定量质谱鉴定分析肺癌病人与肺部良性结节病人血浆外泌体蛋白质表达的差异性,SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检验提取到的蛋白质。结果:共检测到血浆外泌体蛋白质253个,并初步确定其中18个在肺癌病人血浆外泌体中表达上调,8个在肺癌病人血浆外泌体中表达下调,免疫印迹法验证了上调蛋白质中的补体蛋白C4a。结论:鉴定出26个外泌体差异表达蛋白质,为肺癌早期诊断提供了新的候选分子。
简介:摘要目的测定脓毒症大鼠早期血浆代谢组学指标,寻找不同时间点的脓毒症差异代谢物和相关代谢通路,初步揭示脓毒症大鼠早期的病理生理变化。方法将15只8周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(S组,6只)和脓毒症组(C组,9只),采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型;S组只游离盲肠,不予以结扎和穿孔。造模后2、6、12 h通过眼眶采血收集血浆,利用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用技术测定血浆代谢组学,利用NIST数据库和Feihn代谢组学数据库的标准离子片段谱库比对鉴定内源性代谢物。通过MetaboAnalyst 4.0网站进行多元回归分析,包括主成分分析(principal components analysis,PCA)和偏最小二乘法判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)模式识别各代谢物的变化,筛选相关差异代谢物[P<0.05、变化倍数(fold change)>1.5、变量权重值(variable important in projection, VIP)>1.5],并进一步通过KEGG分析相关代谢通路。结果PCA和PLS-DA模式识别结果显示,各个时间点的C组和S组代谢物之间表现出聚类型分布,不同时间点的C组代谢物之间也呈现聚类型分布。2、6、12 h时点S组与C组之间分别检测出14个、25个和21个差异代谢物。2 h时差异代谢物相关信号通路涉及淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢;6 h时差异代谢物相关信号通路涉及淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、甘氨酸-丝氨酸和苏氨酸代谢、花生四烯酸代谢以及氨酰tRNA生物合成;12 h时差异代谢物相关信号通路涉及半乳糖代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、精氨酸生物合成、丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢以及维生素B6代谢。结论脓毒症大鼠早期血浆代谢物水平呈现显著性的动态差异,血浆差异代谢物的改变可能参与脓毒症的病理生理学过程。
简介:摘要目的检测桥本甲状腺炎患者(Hashimoto′s thyroiditis,HT)甲状腺功能正常组、HT合并亚临床甲状腺功能减退(SCH)组以及对照组外泌体微小RNAs(microRNAs,miRNAs),探讨HT病程中不同甲状腺状态下的miRNA差异表达谱及其相应的生物学功能。方法选取HT甲状腺功能正常者、HT合并SCH患者及健康志愿者各3人,提取外周血浆外泌体进行miRNA高通量测序,统计分析3组间差异表达miRNA,并进行靶基因预测、基因本体功能(GO)及京都基因与基因组百科全书通路(KEGG pathway)分析。结果得到75条差异表达miRNA(log2FC>1且Q-value≤0.001),数据挖掘后获得hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-532-3p等10条核心miRNA。GO分析表明,差异miRNA的靶基因主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程等生物学过程,具备结合、催化活性、转录调节活性等分子功能。KEGG分析得到的通路主要为环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor,ErbB)信号通路、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)信号通路等。结论HT患者血浆外泌体miRNA较健康人存在差异表达,其在甲状腺功能正常与SCH两种不同状态中也存在差异表达。hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p及hsa-miR-532-3p等miRNA可能通过cAMP、ErbB及HIF-1等信号通路在HT病程进展中发挥一定的作用。
简介:摘要目的探讨血浆外泌体环状RNA(circRNA)hsa_circ_0022417在胃癌中的表达及其临床意义。方法选取临床明确诊断胃癌初诊患者60例,慢性胃炎患者30例(疾病对照组)和同期健康体检者30名(健康对照组),分别检测各组血浆外泌体中hsa_circ_0022417的表达水平以及血清CEA、CA19-9的表达。采用ROC曲线评价各项指标诊断胃癌效能。分析血浆外泌体hsa_circ_0022417的表达与胃癌患者临床病理参数的关系。结果胃癌组血浆外泌体hsa_circ_0022417的相对表达水平高于慢性胃炎组和健康对照组,差异有统计学意义[(1.89±0.15)比(0.93±0.08)比(0.75±0.07),F=9.96,P<0.05]。胃癌组织中hsa_circ_0022417的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义[(2.78±0.24)比(1.18±0.11),t=6.08,P<0.05],并且其表达水平与血浆外泌体表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆外泌体hsa_circ_0022417、血清CEA、CA19-9单指标诊断胃癌的曲线下面积分别为0.79、0.68和0.66,3种指标联合检测诊断胃癌的曲线下面积为0.86。血浆外泌体hsa_circ_0022417的相对表达量与肿瘤大小(χ2=6.42,P<0.05)、分化程度(χ2=5.83,P<0.05)、临床分期(χ2=7.14,P<0.01)及淋巴结转移(χ2=5.17,P<0.05)均有关。结论外泌体hsa_circ_0022417在胃癌患者血浆中高表达,对临床胃癌辅助诊断和早期筛查具有重要意义。
简介:摘要目的评估血浆外泌体源环状RNA(circRNA)hsa_circ_0064910在胃癌中的诊断效能,分析其与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法回顾性研究,纳入2019年10月至2020年12月在河南大学第一附属医院入院治疗的60例胃癌患者,30例慢性胃炎患者(疾病对照组)以及同期健康体检的30名健康者(健康对照组)作为研究对象。收集胃癌患者的一般资料,包括肿瘤大小、分化程度、TNM 分期、有无淋巴结转移等。临床治疗前收集患者血液标本,逆转录聚合酶链反应分别检测3组对象血浆外泌体中hsa_circ_0064910的表达水平,电化学发光法检测同一研究对象血清CEA、CA19-9的表达水平。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价hsa_circ_0064910单独诊断及其与CEA、CA19-9联合检测在胃癌患者中的诊断效能。同时分析血浆外泌体hsa_circ_0064910在胃癌患者术前术后的表达差异,以及与胃癌患者临床病理特征的关系。结果胃癌患者血浆外泌体中hsa_circ_0064910的相对表达水平(0.97±0.12)高于慢性胃炎患者(0.47±0.06)(t =2.97,P<0.001)及健康对照组(0.43±0.05)(t =3.23,P<0.001)。ROC曲线分析显示hsa_circ_0064910单指标诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.778,联合CEA、CA19-9指标诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.841,高于CEA(AUC=0.673)、CA19-9(AUC=0.653)单指标及联合检测的诊断效能。临床资料分析表明血浆外泌体hsa_circ_0064910的相对表达量与肿瘤大小(χ²=7.545,P<0.01)、临床分期(χ²=4.571,P<0.05)及淋巴结转移(χ²=6.907,P<0.01)等密切相关。胃癌患者术后血浆外泌体hsa_circ_0064910的相对表达量明显下降(1.21±0.21比0.62±0.11,t =2.463,P<0.01)。结论外泌体源hsa_circ_0064910在术前胃癌患者血浆中相对表达量较高,有望成为胃癌筛查新型无创分子标志物。
简介:摘要目的探究先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)血浆外泌体参与HD发生、发展的可能机制。方法收集2020年4月至2021年7月嘉兴市妇幼保健院收治的14例男性患儿血液样本,将其中7例HD患儿作为实验组,年龄为(18.14±18.17)个月,范围为2~48个月;将年龄范围与实验组患儿相匹配的7例男性非HD患儿作为对照组,年龄为(27.14±13.81)个月,范围为6~48个月。收集14例患儿外周血各8 ml,采用超速离心法分离血浆后提取外泌体。经过透射电镜观察、样品粒径分析、蛋白指标检测和RNA浓度检测鉴定外泌体后,进行外泌体miRNA测序,最后对差异表达的miRNA及其靶基因采用GO富集分析和KEGG富集分析。结果14例样本中均成功分离出外泌体,透射电镜下可观察到形态完整、球形、大小均一的典型外泌体结构。外泌体粒径分析结果显示,实验组与对照组血浆外泌体粒径分别为(144.22±33.98 )nm和(122.99±21.24)nm,两组间的差异无统计学意义(P=0.186)。血浆外泌体浓度分析结果显示,对照组与实验组血浆外泌体浓度分别为(3.39± 3.90)×109和(3.47±4.04)×1010 Particles/ml,两组间的差异具有统计学意义(P=0.002)。外泌体蛋白指标检测结果显示:①对照组与实验组的外泌体蛋白浓度分别为(0.42±0.17)μg/μl和(0.13± 0.12)μg/μl,对照组浓度显著高于实验组,差异具有统计学意义(P=0.004);②对照组和实验组的外泌体特异性阳性标志物CD9和CD81均有不同程度的表达,阴性标志物IgG基本没有表达。外泌体miRNA测序结果显示:①实验组RNA浓度高于对照组,(0.66±0.54 )ng/µl比(0.24±0.10 )ng/µl,两组间的差异具有统计学意义(P=0.011);②共筛选出3个差异性表达的miRNA,包括miR-382上调,miR-29B2和miR-29A下调。运用KEGG分析差异表达的miRNA结果显示,miR-382主要富集于PI3K-Akt信号通路,miR-29A富集于癌症中的蛋白聚糖和Hippo信号通路,而miR-29B2则富集于细胞周期通路。分析miR-382、miR-29B2和miR-29a的靶基因,取完交集后分别得到73、782和770个靶基因。结论HD患儿血浆外泌体中差异性表达的miRNA及其靶基因参与肠神经节细胞的生物学功能、细胞周期等调节,可能与HD的发生、发展机制相关。
简介:摘要目的分析早产和足月儿母乳来源外泌体(breast milk extracellular vesicles,BM-EV)的蛋白质组学差异。方法收集2019年在南京医科大学附属妇产医院出生的早产儿和足月儿母乳各3例,采用超速离心法提取外泌体。初步鉴定外泌体特征后,采用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)定量分析,筛选出早产儿BM-EV中显著上调的差异蛋白质(差异倍数≥1.5且P<0.05),并进行GO和KEGG功能预测及相关信号通路分析。采用Mann-Whitney U检验或Fisher精确概率法进行组间比较。以Pearson相关分析描述样品间蛋白质定量值的相关性。使用t检验比较2组样本间蛋白质丰度的差异,并对结果进行多重校正。应用超几何分布检验,筛选出差异蛋白质中显著富集的GO和KEGG通路条目。结果(1)早产和足月组初产母亲分别为3例和1例。足月儿和早产儿BM-EV存在标记性蛋白分子分化簇9、分化簇81和热休克蛋白70。(2)6个样本组间可比性较好,组内重复性较高,样品间蛋白定量值的相关性最高达0.99。早产和足月儿样本的变异系数分别为11.21%和19.72%,且早产样本的变异系数比较集中。(3)鉴定得到945种蛋白质。早产与足月儿BM-EV之间存在156种差异蛋白质,其中在早产儿BM-EV中有83种上调。早产儿BM-EV中丰度值前3位的蛋白质分别为补体C4a、脂肪酸合成酶和硬化蛋白结构域蛋白-1。(4)GO功能预测中富集度最高的生物过程或细胞成分主要集中在血红蛋白和糖原的合成,参与免疫突触的构成,Fc γ受体信号通路介导的吞噬作用等。KEGG信号通路相关性最高的通路为核糖体相关通路、补体和凝血级联、中性粒细胞胞外陷阱形成和Fc γ受体介导的吞噬作用等。结论早产儿BM-EV中显著上调的差异蛋白质可能通过参与调节早产儿的免疫、胃肠道功能和能量代谢过程,从而发挥保护作用。
简介:摘要目的利用朊病毒感染细胞模型,探索朊病毒清除过程中外泌体内蛋白的差异表达。方法利用同位素标记相对与绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术,分别从朊病毒感染细胞系SMB-S15、对照细胞系SMB-PS以及暴露于白藜芦醇4 d(RES4)和8 d(RES8)的SMB-S15细胞中提取外泌体,并对这些提取的外泌体中蛋白进行蛋白质组学分析。结果从4种细胞来源的外泌体中总计检出4 809种蛋白质,随着朊病毒的清除,外泌体中蛋白质变化多样,其中下调蛋白略多于上调蛋白。可能涉及的重要通路包括帕金森综合症、阿尔兹海默症和亨廷顿病等神经退行性疾病相关通路。结论在用白藜芦醇和硫酸戊糖清除朊病毒过程中,随着朊病毒的清除,细胞间外泌体中蛋白质随之发生变化,提示外泌体可能参与朊病毒在细胞间的传递。