学科分类
/ 25
500 个结果
  • 简介:Objective:ToestablishafluoregenicprobequantitativeRT-PCR(FQ-RT-PCR)methodfordetectionoftheexpressionofMDR1geneintumorcellsandtoinvestigatetheexpressionofMDR1geneinpatientswithlungcancer.Methods:ThefluorogenicquantitativeRT-PCRmethodfordetectionoftheexpressionofMDR1genewasestablished.K562/ADMandK562celllinesor45tumortissuesfrompatientswithlungcancerwereexaminedonPEAppliedBiosystems7700SequenceDetectionmachine.Results:theaveragelevelsofMDR1geneexpressioninK562/ADMcellsandK562cellswere(6.86±0.65)×107copies/mgRNAand(8.49±0.67)×105copies/mgRNA,respectively.Theformerwas80.8timesgreaterthanthelatter.Eachsamplewasmeasured10timesandthecoefficientvariation(CV)was9.5%and7.9%,respectively.VariouslevelsofMDR1geneexpressionweredetectedin12of45patientswithlungcancer.Conclusion:QuantitativedetectionofMDR1geneexpressionintumorcellswasachievedbyusingFQ-RT-PCR.FQ-RT-PCRisanaccurate,andsensitivemethodandeasytoperform.Usingthismethod,lowlevelsofMDR1geneexpressioncouldbedetectedin24%ofthepatientswithlungcancer.

  • 标签: Fluorogenic 量的 RT-PCR/MDR1 Expression/Real 时间 察觉
  • 简介:姚开虎副研究员非常高兴邀清到意大利佛罗伦萨大学附属AnnaMeyer儿童医院ChiaraAzzari教授来北京儿童医院做学术访问,在您“侵袋性细菌感染分子学诊断:一个有川临床一具”报告中谈到采用分子诊断方法评估意大利肺炎链球菌疾病负担工作,这些经验对中国开展相关工作具有很好借鉴意义。

  • 标签: 北京儿童医院 RT-PCR方法 细菌感染 分子学诊断 检测 佛罗伦萨
  • 简介:摘要本文通过荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR,分别对191例临床粪便样本进行GⅠ、GⅡ型诺如病毒快速检测,优化反应条件,筛选出最优反应体系,对两种方法特异性、灵敏性进行检测分析。发现两种方法均可较好检测出GⅠ、GⅡ型诺如病毒。其中常规RT-PCR阳性样本数为142,检出率为74.34%,最低检出限为103copies/μl,标准曲线均呈现出良好线性关系,扩增效率分别为101.336%、103.558%;荧光定量RT-PCR阳性样本为163,检出率为85.34%,最低检出限为102copies/μl,批内、批间重复试验标准差范围为0.10~0.59,变异系数范围为0.43%~2.84%,重复性良好。两种方法检出率有显著差异(P<0.05),且对星状病毒、腺病毒以及肠道病毒等均无交叉反应,GⅠ、GⅡ型诺如病毒之间也无交叉反应。荧光定量RT-PCR在灵敏度方面占优,建议在临床检测中应用。

  • 标签: RT-PCR 荧光定量RT-PCR GⅠ GⅡ型诺如病毒
  • 简介:摘要新冠肺炎爆发,战“疫”是全世界面临重要任务,而快速确诊是疫情防控基础。根据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》以及《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南(第四版)》记载,利用实时荧光 PCR进行核酸检验是主要诊断手段。作为当下新冠肺炎确诊“金标准”,实时荧光 PCR功不可没。但通过新闻报道,我们不难发现当前诊断依然存在确诊慢、假阴性等问题。何为实时荧光 PCR?为何还不能完全快速准确地诊断新冠?如何改进?今天我们就从专利视角,聚焦实时荧光 PCR,为大家揭开其神秘面纱。

  • 标签: 新馆病毒 PCR 专利 假阴性 检测速度
  • 简介:摘要目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV全部基因序列,使用MEGA-X完成多序列比对分析,选择针对S段基因高保守区设计引物和探针,分别对检测反应特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立方法可以特异性地检测WUXV,并且与多种虫媒病毒无交叉反应;反应灵敏度较高,最低检测下限为1 pfu/ml;同一样品重复检测循环阈值(Ct)批间变异系数均小于1.00%;用本研究建立TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本,其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV大批量样本筛查。

  • 标签: 武乡病毒 实时荧光定量RT-PCR 检测
  • 简介:摘要目的对桂林市一起旅游团体腹泻疫情进行诺瓦克病毒Ⅰ型(NVGⅠ型)和Ⅱ型(NVGⅡ型)检测分型,为疫情处理及时做出准确判断。方法用实时荧光探针(RT-PCR)方法对腹泻病人样本特异引物进行核酸扩增检测。结果通过用实时荧光PCR法对28份样品进行快速检测,NVGⅠ型阳性6份(21.4﹪),NVGⅡ型阳性3份(10.7﹪),NVGⅠ型和NVGⅡ型同时阳性1份(3.6﹪),阴性19份(67.9﹪)。结论实时荧光PCR在诺瓦克病毒检测中能起到快速、准确和高灵敏效果,对病人病情及时诊断治疗和对突发疫情快速控制和处理起到了积极作用。

  • 标签: NV GⅠ型 NV GⅡ型 实时荧光PCR
  • 简介:TA克隆构建含MOC1基因cDNA片段重组质粒,作为TaqMan定量检测水稻分蘖基因MOC1mRNA标准品,建立了检测方法。采用RTPCR方法,从水稻分蘖芽总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增MOC1基因中设计目的片段,将纯化目的片段与pMD19-TSimple载体连接,转化宿主菌JM-109,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。建立了MOC1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达10^2拷贝,线性范围为10^2-10^7拷贝,阈值循环数与PCR体系中起始模板对数值之间有着良好线性关系(r=0.999),扩增效率高(E=92.8%)。成功建立了MOCI基因实时荧光PCR定量标准品,且TaqMan荧光定量RTPCR方法可对水稻分蘖基因MOC1mRNA表达进行准确定量。

  • 标签: 水稻 分蘖 基因表达 实时定量RT—PCR TAQMAN探针
  • 简介:ObjectiveToinvestigatetheoccurrenceandpossiblemechanismsofapoptosisincochlearepitheliumandspiralganglionneuronsaftermefloquinetreatment.MethodsWeusedquantitativeRT-PCRapoptosis-focusedgenearrays(96-well,84apoptosisrelatedgenes)toassesschangesofgeneexpressioninthecochlearbasilarmembrane(haircells-supportingcells)andspiralganglionneuronsofratcochlearorganotypicculturestreatedwith100μMmefloquinefor3h.ResultsSignificantup-ordown-regulationingeneexpressionwasdetectedin23genesinthecochlearbasilarmembrane,andin32genesinthespiralganglionneuronscomparedwithtime-matchedcontrols.Therespondinggenescouldbeclassifiedaspro-oranti-apoptotic,andweremainlyimplicatedintheBcl-2,Caspase,Card,IAP,TNFligand/TNFreceptor,Deathdomain/Deatheffectordomain,DNAdamage/p53,andNF-kappaBfamilies.Syntheticanalysissuggestedthatthesefamiliescouldberevisedtotwomajorpathwaysmainlyinvolvedinthedeathreceptor-mediatedsignalingpathwayandapoptoticmitochondrialpathway.Inaddition,itwasfoundthatnumerousanti-apoptoticgenessuchasBcl2a1,Birc1b,Birc3,Birc4,Bnip1,Cflar,Il10,Lhx4,Mcl1,Nfkb1,Prlr,Prok2,andTNFweregreatlyup-regulatedinthecochleartissue,whichmightimplytheco-existenceofprotectiveresponseinthecellsattheearlystageofmefloquine-induceddamage.

  • 标签: RT-PCR检测 DNA损伤 细胞凋亡 耳蜗 肿瘤坏死因子受体 阵列
  • 简介:摘要随着时代进步,社会发展,大多数疾病已经可以得到很好治愈,但是大规模流感病毒爆发,仍然困扰着我们,特别是甲型H1N1流感。流感病毒传染性强,变异性强传播速度快,爆发后难以控制,极大危害了社会安定和谐,,影响了人们生活质量。所以及早点了检测发现流感病毒是抑制病毒传播,控制流感病毒爆发程度最为关键步骤。现在国内外常用检测流感病毒方法主要有血清学检测、核酸扩增法检测、细胞培养法、流感病毒抗原检测法等。但是这些常用方法耗费大量时间和精力,不适用于流感病毒快速检查。相反,荧光定量RT-PCR是各种检测方法中最灵敏、最有效、最准确。所以对于荧光定量RT-PCR检测流感病毒应用研究是有很大医学价值。

  • 标签: 荧光定量RT-PCR 检测 流感病毒 应用
  • 简介:随着现代分子生物学技术发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究中根据NCBIGenBank中收录SPCSV病毒外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技(北京)有限公司生产QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在一管内完成,大大降低了外源物质污染及RNA降解几率,可作为甘薯SPCSV病毒快速检测方法。

  • 标签: 甘薯 退绿矮化病毒 RT-PCR检测技术
  • 简介:【摘要】:新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒 (2019-nCoV)引起一种急性呼吸道传染疾病,可迅速发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正代谢性酸中毒和出凝血功能障碍,严重威胁患者生命健康安全。经相关学者对新型冠状病毒毒株检验研究后,确认通过实时荧光 RT-PCR核酸检测可对新型冠状病毒进行临床诊断,可以早发现、早诊断、早治疗或尽早与其他病毒感染者进行鉴别诊断。

  • 标签: 2019新型冠状病毒 病原学 RNA反转录 聚合酶链式扩增 核酸检测
  • 简介:Abstract:TheP24antigentest,HIVRNAPCRtest,HIVisolation/cultureandfourth-generationHIVuniformAg/AbassayarebeingutilizedindiagnosingacuteHIVinfectionindifferentlabs.ManyfactorslimittheuseofscreeningforacuteHIVinhigh-riskpopulations,inblooddonorsandduringvoluntaryHIVtesting,including,cost,technique,sensitivityandspecificity.InthisreviewweexploreanewNAATmethodwhichinvolvesHIVRNART-PCRonpooledsamples.Thistechniqueisabletoscreenforacuteinfectionsinalargetestingvolumeandmayheusedasascreeningmethodinhigh-riskpopulationsandblooddonors.

  • 标签: 公用池 RNA RT-PCR化验 诊断 急性HIV传染病 灵敏性
  • 简介:摘要目的对咸阳市首例甲型H1N1流感病例进行病毒核酸检测,为此后疫情防控提供参考;方法采集病人1份咽拭子标本,使用两种不同厂家试剂,利用实时荧光RT-PCR法检测1进行甲型H1N1流感病毒核酸检测;结果结果显示两种试剂RT-PCR反应体系扩增曲线都有明显对数增长,且Ct值符合质量控制标准,为甲型H1N1流感病毒核酸阳性,同一份咽拭子标本送陕西省疾控中心复检,结果为甲型H1N1流感病毒核酸检测为阳性;结论这名病人为1例甲型H1N1流感病毒感染者密切接触者,由于及时采用灵敏度高,特异性强,检测时间短实时荧光定量RT-PCR方法检测,快速确诊了病例,为疫情控制争取了时间,防止了2代病例出现。

  • 标签: 甲型流感 实时荧光RT-PCR 检测
  • 简介:MDR1基因表达与肿瘤细胞耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达方法中RT-PCR检测MDR1过程中一般使用β肌动蛋白作为外参照,通过计算MDR1cDNA与β肌动蛋白cDNA比值来表示MDR1基因表达。这样只能得到MDR1基因相对β肌动蛋白基因表达,而不能测出其绝对表达。而且扩增

  • 标签: 多药耐药基因 定量检测 RT-PCR法 基因表达 β肌动蛋白 MDR1基因
  • 简介:摘 要:气溶胶传播途径被世卫组织认为是造成大面积病毒传播主要原因。且封闭空间内空气流通较弱,携带有病毒颗粒气溶胶可以更长时间悬浮于空气中,从而易导致更高病毒感染率。开发针对人员密集场所一体化全自动快速实时监测系统,将有望实现空气中病毒颗粒高效富集和快速实时监测,遏制疫情蔓延。项目的成功实施,不仅可以有效解决环境病毒难以实时检测问题,填补环境病毒检测领域市场空白,而且可以促进核酸检测和气体检测设备跨行业融合发展,催化相关技术领域快速产业化发展。

  • 标签: 病毒气溶胶 环境检测 公共卫生 基础设施
  • 简介:摘 要:在此次疫情传播过程中,由于气溶胶颗粒可悬浮于空气中,并随空气流动扩散,因此气溶胶传播途径被世卫组织认为是造成大面积病毒传播主要原因。封闭空间内空气流通较弱,携带有病毒颗粒气溶胶可以更长时间悬浮于空气中,从而易导致更高病毒感染率。本文讨论了气溶胶采样技术及现有PCR技术发展水平,分析了开展病毒高效快速检测与监控现实可能性,解决如何在疑似高危险感染区域和人员密集场所(如医院、车站、商场)空气中及早发现潜在传染源现实需求。

  • 标签: 病毒气溶胶 环境检测 公共卫生 基础设施
  • 简介:摘要目的建立一种人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction)快速检测方法。方法根据人星状病毒ORF1b基因保守序列设计扩增引物和特异性荧光探针,建立星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,并对该方法特异性、灵敏度和稳定性进行评价,同时应用该方法对实际临床样本中星状病毒进行检测。结果所建立的人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好特异性和稳定性,灵敏度可达102拷贝/μl,对星状病毒临床样本检测后,检出率达100%。结论本文所建立的人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好特点,可应用于临床星状病毒病原检测和流行病学调查。

  • 标签: 人星状病毒 实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针
  • 简介:摘要目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体、HCVRNA联合检测用于丙型肝炎诊断临床价值,并研究本地区丙型肝炎感染和流行情况。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HCVRNA、解离-增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFIA)定量检测HCV抗体。结果715例初诊为丙型肝炎患者中,HCV抗体阳性85例(11.89%),HCVRNA阳性107例(14.96%),两者共同阳性76例(10.63%),其中男性49例(64.47%),女性27例(35.53%),主要集中在35-45岁之间。结论单独检测HCV抗体或HCVRNA均有一定缺陷,二者联合检测可提高丙型肝炎检出准确率;RT-PCR技术灵敏度较高,对HCVRNA检出率较高。丙型肝炎在门诊就诊者中阳性检出率较高,且以中青年为主,男女性别感染检出率无差异。

  • 标签: 丙型肝炎病毒 RT-PCR DELFIA
  • 简介:摘要目的探讨实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸在疾病诊断中应用。方法从中国疾病预防控制信息系统选取截至2020年3月5日录入河南省COVID-19实验室检测数据和病例基本信息。所有信息都由当地医院和疾控中心录入系统,医院或者区县疾控中心负责采样,河南省各省辖市疾控中心负责核酸检测。结果共纳入6 714份标本,SARS-CoV-2核酸检测阳性率为23.82%。标本来源于3种诊断类型,确诊病例1 200例,疑似病例2 178例,无症状感染者77例,SARS-CoV-2感染核酸确诊率为36.96%(1 277/3 455)。所有诊断类型标本中,鼻拭子、痰液和咽拭子SARS-CoV-2核酸检测阳性率分别为19.38%、28.59%、23.53%,差异有统计学意义(χ2=15.896,P<0.01)。确诊病例呼吸道标本SARS-CoV-2核酸检测阳性率为63.10%。鼻拭子、痰液和咽拭子核酸阳性率分别为50.80%、58.71%、65.21%,差异有统计学意义(χ2=18.612,P<0.01)。所有诊断类型发病后当天、1周、2周、3周、4周和5周及5周以上呼吸道标本SARS-CoV-2核酸检测阳性率依次为43.51%、23.98%、22.82%、12.17%、14.46%、13.21%,在确诊病例中阳性率依次为89.03%、86.57%、52.30%、17.53%、17.69%和24.14%。结论实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2核酸是最有效早期病原学诊断方式,COVID-19发病后1周内核酸检出率最高,核酸检出时间最晚是发病后38 d。

  • 标签: 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 实时荧光RT-PCR