简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤易感性候选基因9(CASC9)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响，明确微小RNA-195-5p(miR-195-5p)与lncRNA CASC9的靶向关系。方法收集2017年4月至2018年5月间湖北省襄阳市中西医结合医院40例行手术切除并经组织病理学确诊的胰腺癌组织及相应癌旁正常胰腺组织，选取4株胰腺癌细胞(AsPC-1、HPAC、BxPC-3、PANC1)和正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7，采用实时定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA CASC9表达。将BxPC-3细胞分为si-CASC9组(转染靶向lncRNA CASC9的siRNA)、si-control组(转染与lncRNA CASC9不匹配的siRNA)和CASC9组(转染lncRNA CASC9过表达质粒)、CASC9/miR-195-5p组(共转染CASC9过表达质粒和miR-195-5p mimics)。采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达，采用生物信息学和荧光素酶实验分析CASC9和miR-195-5p的靶向关系。结果胰腺癌组织lncRNA CASC9表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(4.70±1.25比2.15±0.82，P＝0.04)，胰腺癌细胞株AsPC-1、HPAC、BxPC-3、PANC1细胞lncRNA CASC9表达量分别为1.43±0.12、1.86±0.13、2.03±0.14、1.73±0.15，均显著高于HPDE6-C7细胞的1.00±0.10(P值均<0.001)，其中以BxPC-3细胞的表达量最高。si-CASC9组细胞较si-control组细胞的增殖活性显著下降(细胞培养第3天0.57±0.05比0.72±0.04，P＝0.01；第4天0.75±0.07比0.95±0.07，P＝0.02)；Bax表达上调(1.39±0.13比1.07±0.11，P＝0.03)，Bcl-2表达显著下调(1.44±0.11比1.71±0.12、P＝0.04)。CASC9/miR-195-5p组细胞增殖活性较CASC9组显著下降(P值<0.005)；Bax表达水平显著高于CASC9组(0.68±0.04比0.56±0.03，P＝0.01)，Bcl-2表达显著低于CASC9组(1.05±0.03比1.47±0.04，P<0.001)。结论lncRNA CASC9靶向结合miR-195-5p可逆转CASC9促进胰腺癌细胞增殖和抑制胰腺癌细胞凋亡的作用。

简介：摘要目的探究miR-377-5p对食管癌细胞TE-1放射敏感性的影响及机制。方法TE-1细胞转染miR-377-5pmimic和miR-377-5pmimic NC构建过表达miR-377-5p细胞。对转染后的TE-1细胞照射后采用平板集落形成实验检测细胞放射生物学参数(D0、Dq、SF2)，Transwell小室法检测细胞侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，CCK8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，免疫印迹检测AKT1和GSK-3β磷酸化水平。结果2、4、6、8 Gy照射的集落形成率均显著下降(P<0.05)，且在同一剂量下miR-377-5pmimic组细胞集落形成率均显著低于miR-377-5pmimic NC组(P<0.05)。相比于miR-377-5pmimic NC组，miR-377-5pmimic组D0、Dq、SF2均显著下降(P<0.05)，放射增敏比为1.34(D0值比)；0 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力显著下降，细胞凋亡水平显著上升，细胞周期被阻滞于G1期，AKT1和GSK-3β磷酸化水平显著下降(P<0.05)；4 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力下降，细胞凋亡水平显著上升，G1期显著延长，AKT1和GSK-3β磷酸化水平亦显著下降(均P<0.001)。结论miR-377-5p能够增加食管癌细胞TE-1的放射敏感性，其机制可能是抑制AKT1/GSK-3β信号通路。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1（MCM3AP antisense RNA 1，MCM3AP-AS1）靶向调控微小RNA-876-5p（miR-876-5p）对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本，及卵巢癌细胞系（CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90）和正常卵巢上皮细胞系（HOSE）。采用实时定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平；建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型，采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖，采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平；采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为（8.45±0.86），高于癌旁组织（4.45±0.45）；在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3（1.53±0.12），SKOV3（1.82±0.23），OVCAR3（1.34±0.12），高于正常卵巢上皮细胞HOSE（1.00±0.10）；下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭；lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的研究姜黄素通过激活miR-192-5p/PI3K/Akt信号通路抑制肾母细胞瘤增殖并诱导细胞凋亡。方法采用CCK-8法探讨姜黄素对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖的影响，并探究其合适的作用浓度；V-FITC/PI检测SK-NEP-1细胞的凋亡率；荧光素酶报告试验验证miR-192-5p和PI3K的结合活性；RT-PCR检测miR-192-5p mRNA的表达水平；Western blot检测PI3K和Akt的蛋白质表达水平。结果姜黄素能够显著抑制SK-NEP-1细胞的增殖，并诱导细胞凋亡，且呈剂量依赖性。RT-PCR检测结果表明姜黄素能够显著提高miR-192-5p的表达。此外，miR-192-5p显著抑制细胞的增殖并诱导其凋亡，且能够增强姜黄素对SK-NEP-1细胞的作用。荧光素酶报告试验结果表明miR-192-5p能够靶向结合PI3K，Western blot结果表明姜黄素可通过介导miR-192-5p的表达抑制PI3K和Akt的蛋白质表达水平。结论姜黄素能够抑制肾母细胞瘤细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制是通过介导miR-192-5p的表达并进一步抑制下游PI3K/Akt信号通路来实现的。

简介：摘要目的评价大鼠炎性痛形成时脊髓神经元P2X7受体与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/IL-1β信号通路的关系。方法SPF级健康成年雄性Wistar大鼠，体重180～220 g，取鞘内置管成功的大鼠40只，采用随机数字表法分为5组(n＝8)：对照组(CON组)、炎性痛组(IP组)、炎性痛＋二甲基亚砜组(IP-DMSO组)、炎性痛＋P2X7受体拮抗剂A740003组(IP-A组)和炎性痛＋P2X7受体激动剂ATP组(IP-ATP组)。采用右后足踝关节腔内注射完全弗氏佐剂50 μl的方法制备炎性痛模型，CON组于右后足踝关节腔内注射等容量生理盐水。于造模前1 d、造模后即刻、1、2和3 d时，IP-DMSO组鞘内注射1%二甲基亚砜10 μl，IP-A组鞘内注射A740003 0.1 nmol(溶于10 μl二甲基亚砜中)，IP-ATP组鞘内注射ATP 150 nmol(溶于10 μl二甲基亚砜中)。于造模后3 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。采用ELISA法检测右后足踝关节组织前列腺素E2(PGE2)含量和脑脊液IL-1β浓度。然后处死大鼠，取L4-6脊髓组织，采用Western blot法检测NLRP3、casepase-1和IL-1β的表达，采用免疫荧光法检测P2X7与神经元特异性核蛋白(NeuN)、NLRP3与NeuN的共表达情况。结果与CON组比较，IP组关节组织PGE2含量升高，其余4组MWT降低，TWL缩短，脑脊液IL-1β浓度升高，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达上调(P<0.05)；与IP组比较，IP-A组MWT升高，TWL延长，脑脊液IL-1β浓度降低，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达下调，IP-ATP组MWT降低，TWL缩短，脑脊液IL-1β浓度升高，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达上调(P<0.05)，IP-DMSO组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。脊髓P2X7与NeuN存在共表达，NLRP3与NeuN存在共表达。结论脊髓神经元P2X7受体可通过激活NLRP3/IL-1β信号通路，参与了大鼠炎性痛的形成。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA CDKN2BAS(lncRNA CDKN2BAS)是否通过靶向微小RNA(miRNA，miR)-98-5p影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞hFOB1.19(购自上海通派生物科技有限公司)与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1(购自美国典型菌种保藏中心)中CDKN2BAS、miR-98-5p的表达水平；按照随机数字表法随机分组为si-con组、si-CDKN2BAS组、miR-con组、miR-98-5p组、si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组、si-CDKN2BAS ＋anti-miR-98-5p组，噻唑蓝(MTT)法检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞增殖活力的影响；流式细胞术检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞凋亡能力的影响；Transwell小室实验检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响；双荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS是否靶向miR-98-5p；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)的表达量。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果hFOB1.19细胞与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1中CDKN2BAS的表达水平分别为1.05±0.28、4.26±0.42、3.65±0.56、4.02±0.46、3.75±0.41，miR-98-5p的表达水平分别为0.98±0.06、0.41±0.05、0.64±0.07、0.57±0.06、0.47±0.05，与hFOB1.19细胞比，骨肉瘤细胞株中CDKN2BAS表达明显上调(F＝80.889，P<0.05)，miR-98-5p表达明显下调(F＝130.868，P<0.05)，差异均有统计学意义；沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞存活率分别为(68.57±8.63)%、(64.68±7.24)%，迁移细胞数分别为(98.43±11.51)、(93.46±12.54)个，侵袭细胞数分别为(47.93±6.84)、(38.64±6.69)个，沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞增殖活力明显降低(F＝37.873、60.131，P<0.05)，细胞迁移及侵袭能力明显减弱(F＝159.281、189.097，167.638、302.502，P<0.05)，Ki-67、MMP-2、MMP-9、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显降低(F＝101.455、161.465、196.590、149.229、157.759、55.555，P<0.05)，而细胞凋亡率明显升高(F＝260.694、270.939，P<0.05)，p21、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高(F＝88.672、448.342、202.034、118.338、121.661、290.273，P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实CDKN2BAS靶向抑制miR-98-5p的表达；与si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组比较，si-CDKN2BAS＋anti-miR-98-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强(t＝4.546、10.682、5.648，P<0.05)，细胞凋亡能力明显减弱(t＝6.996，P<0.05)，差异均有统计学意义。结论lncRNA CDKN2BAS通过靶向负调控miR-98-5p的表达影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。

简介：AbstractBackground:Pancreatic cancer (PC) is a highly deadly malignancy with few effective therapies. We aimed to unmask the role that long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene 6 (SNHG6) plays in PC cells by targeting far upstream element binding protein 1 (FUBP1) via microRNA-26a-5p (miR-26a-5p).Methods:SNHG6 expression was predicted by bioinformatics, followed by verification via reverse transcription quantitative polymerase chain reaction. Then, the interactions among SNHG6, miR-26a-5p, and FUBP1 were detected through online software analysis, dual luciferase reporter assay and RNA pull-down. After that, cells were treated with different small interfering RNAs and/or mimic to determine the interactions among SNHG6, miR-26a-5p, and FUBP1 and their roles in PC cells. Finally, the role of SNHG6 in tumor growth in vivo was evaluated by measuring the growth and weight of transplanted tumors in nude mice. A t-test, one-way and two-way analysis of variance were used for data analysis.Results:Compared with that in normal tissues, SNHG6 was highly expressed in PC tissues (1.00 ± 0.05 vs. 1.56 ± 0.06, t= 16.03, P < 0.001). Compared with that in human pancreatic duct epithelial cells (HPDE6-C7), SNHG6 showed the highest expression in PANC-1 cells (1.00 ± 0.06 vs. 3.87 ± 0.13, t= 34.72, P < 0.001) and the lowest expression in human pancreatic cancer cells (MIAPaCa-2) (1.00 ± 0.06 vs. 1.41 ± 0.07, t= 7.70, P= 0.0015). Compared with the levels in the si-negative control group, SNHG6 (0.97 ± 0.05 vs. 0.21 ± 0.06, t = 16.85, P < 0.001), N-cadherin (0.74 ± 0.05 vs. 0.41 ± 0.04, t= 8.93, P < 0.001), Vimentin (0.55 ± 0.04 vs. 0.25 ± 0.03, t= 10.39, P < 0.001), and β-catenin (0.62 ± 0.05 vs . 0.32 ± 0.03, t= 8.91, P < 0.001) were decreased, while E-cadherin (0.65 ± 0.06 vs. 1.36 ± 0.07, t= 13.34, P < 0.001) was increased after SNHG6 knockdown or miR-26a-5p overexpression, accompanied by inhibited cell proliferation, migration, and invasion. SNHG6 overexpression exerted the opposite effects. SNHG6 upregulated FUBP1 expression by sponging miR-26a-5p. Silencing SNHG6 blocked the growth of PC in vivo.Conclusion:Silencing SNHG6 might ameliorate PC through inhibition of FUBP1 by sponging miR-26a-5p, thus providing further supporting evidence for its use in PC treatment.

简介：AbstractBackground:Long non-coding RNAs (lncRNAs) play key roles in human cancers. In our previous study, we demonstrated that lncRNA FKBP prolyl isomerase 9 pseudogene 1 (FKBP9P1) was highly expressed in head and neck squamous cell cancer (HNSCC) tissues. However, its functional significance remains poorly understood. In the present study, we identify the role and potential molecular biologic mechanisms of FKBP9P1 in HNSCC.Methods:Quantitative real-time polymerase chain reaction was used to detect the expression of FKBP9P1 in HNSCC tissues, matched adjacent normal tissues, human HNSCC cells (FaDu, Cal-27, SCC4, and SCC9), and human immortalized keratinocytes cell HaCaT (normal control). Cal-27 and SCC9 cells were transfected with sh-FKBP9P1-1, sh-FKBP9P1-2, and normal control (sh-NC) lentivirus. Cell counting kit-8 assay, colony formation assay, wound healing assay, and trans-well assay were used to explore the biologic function of FKBP9P1 in HNSCC cells. Furthermore, western blotting was used to determine the mechanism of FKBP9P1 in HNSCC progression. Chi-squared test was performed to assess the clinical significance among FKBP9P1 high-expression and low-expression groups. Survival analyses were performed using the Kaplan-Meier method and assessed using the log-rank test. The comparison between two groups was analyzed by Student t test, and comparisons among multiple samples were performed by one-way analysis of variance and a Bonferroni post hoc test.Results:FKBP9P1 expression was significantly up-regulated in HNSCC tissues (tumor vs. normal, 1.914 vs. 0.957, t = 7.746, P < 0.001) and cell lines (P < 0.01 in all HNSCC cell lines). Besides, the median FKBP9P1 expression of HNSCC tissues (1.677) was considered as the threshold. High FKBP9P1 level was correlated with advanced T stage (P = 0.022), advanced N stage (P = 0.036), advanced clinical stage (P = 0.018), and poor prognosis of HNSCC patients (overall survival, P = 0.002 and disease-free survival, P < 0.001). Knockdown of FKBP9P1 led to marked repression in proliferation, migration, and invasion of HNSCC cells in vitro (P all < 0.01). Mechanistically, silencing FKBP9P1 was observed to restrain the PI3K/AKT signaling pathway.Conclusions:Silencing lncRNA FKBP9P1 represses HNSCC progression and inhibits PI3K/AKT (phosphatidylinositol 3 kinase/AKT Serine/Threonine Kinase) signaling in vitro. Therefore, FKBP9P1 could be a potential new target for the diagnosis and treatment of HNSCC patients.

简介：摘要目的探讨经腹膜外途径C.R.P.C.四步法腹腔镜根治性前列腺切除术治疗局限性前列腺癌的安全性和疗效。方法回顾性分析2015年4月至2017年12月同济医院收治的102例前列腺癌患者的病例资料。年龄(67±5)岁。术前总PSA值(45.32±18.33)ng/ml。前列腺体积(42±12)cm3。102例均行磁共振检查和前列腺穿刺活检确诊为前列腺癌，临床分期cT1c～cT3b期。102例均在全麻下行经腹膜外途径腹腔镜根治性前列腺切除术。术中采用C.R.P.C.四步法，即控制背深静脉复合体(control dorsal deep venous complex，C)；识别前列腺膀胱交界面、精囊层面、狄氏间隙层面3个解剖层面(recognize three anatomical layers，R)；保留尿道括约肌和膀胱颈(preserve urethral sphincter and bladder neck，P)；连续行尿道吻合(continuous anastomosis between urethra and bladder neck，C)，特别注意3、5、7、9点方向4针。记录手术时间、术中出血量、住院时间和术后并发症。结果本组102例手术均顺利完成。手术时间平均92(55～156) min。出血量平均105(55～185) ml。无中转开放手术。1例(0.98%)术前中度贫血患者(血红蛋白65 g/L)术后予输血治疗。病理检查结果显示15例(14.70%)切缘阳性。术后1周内2例(1.96%)发生尿外渗，经牵拉尿管并延长尿管留置时间后恢复正常。术后随访(26.4±3.5)个月。术后6个月11例(10.78%)出现PSA复发；术后12个月2例发生Ⅰ～Ⅱ度尿失禁，1例发生排尿困难。结论C．R.P.C.四步法腹腔镜根治性前列腺切除术易学易记，能够使初学者掌握根治性前列腺切除术的程序化手术操作步骤。本方法术后并发症少，肿瘤控制效果较好。

简介：摘要目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK）-肌质网Ca2+-ATP酶2α（sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2α, SERCA2α）信号通路在大鼠心肌缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury, I/RI）中的作用。方法采用随机数字表法将45只雄性SD大鼠（体重250~300 g）分为A组、B组和C组（每组15只），其中A组用于测定心肌梗死面积，B组用于检测心肌组织p38MAPK和SERCA2α蛋白量，C组用于检测心肌组织SERCA2α mRNA。分别将A组、B组和C组组内大鼠按随机数字表法分为3组（每组5只）：假手术组（Sham组）、缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）组（I/R组）、I/R+SB203580组（I/R+S组）。I/R+S组于术前1 h腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580（2 mg/kg），其余两组于术前1 h仅注射等体积生理盐水。采用结扎冠状动脉左前降支（left anterior descending, LAD）30 min后再灌注10 min的方法建立大鼠心肌I/RI动物模型。再灌注结束后，动脉血气分析法监测大鼠内环境状态，Western blot法检测心肌组织磷酸化p38MAPK（phospho-p38MAPK, p-p38MAPK）、SERCA2α蛋白水平，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法检测心肌组织SERCA2α mRNA水平，伊文蓝及2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyl tetrazolium chloride, TTC）双染色法测定心肌缺血和心肌梗死面积。结果各组大鼠血气分析结果差异无统计学意义（P>0.05）。与Sham组比较，I/R组与I/R+S组心肌梗死面积与心肌组织中p-p38MAPK蛋白水平明显增加（P<0.05）、SERCA2α蛋白及mRNA水平明显降低（P<0.05）。与I/R组比较，I/R+S组心肌梗死面积明显减少、p-p38MAPK蛋白水平明显降低（P<0.05），SERCA2α蛋白和mRNA水平明显升高（P<0.05）。结论p38MAPK可能通过介导SERCA2α参与大鼠心肌I/RI。

简介：摘要目的探讨miR-133a-5p靶向细胞间黏附分子1(ICAM1)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的影响。方法双荧光素酶报告基因分析法验证miR-133a-5p对ICAM1的靶向作用。体外用LPS诱导A549细胞，分为对照组、LPS组、LPS＋阴性对照(miR-NC)组、LPS＋miR-133a-5p组、LPS＋小干扰RNA(si)-NC组、LPS＋si-ICAM1组。采用实时荧光定量PCR检测miR-133a-5p和ICAM1 mRNA的表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测ICAM1、Bcl-2、Bax和活化半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白的表达；酶联免疫吸附检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果与对照组比较，LPS组A549细胞miR-133a-5p的表达水平(0.39±0.04比1.00±0.09)显著降低，ICAM1的表达水平(0.86±0.08比0.39±0.03)显著升高，细胞凋亡率[(27.65±2.47)%比(8.13±0.89)%]显著升高，IL-6[(624.59±51.42) ng/L比(194.25±18.43) ng/L]和TNF-α[(548.35±51.42) ng/L比(174.26±19.43) ng/L]的分泌显著增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与LPS＋miR-NC组比较，LPS＋miR-133a-5p组A549细胞凋亡率[(13.46±1.38)%比(28.71±2.54)%]显著降低，IL-6[(296.43±23.51) ng/L比(635.86±55.41) ng/L]和TNF-α[(321.14±30.56) ng/L比(563.24±49.52) ng/L]的分泌显著减少，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与LPS＋si-NC组比较，LPS＋si-ICAM1组A549细胞凋亡率[(13.65±1.64)%比(23.51±2.33)%]显著降低，IL-6[(324.15±29.41) ng/L比(625.39±52.59) ng/L]和TNF-α[(334.65±20.46) ng/L比(534.97±51.42) ng/L]的分泌显著减少，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-133a-5p能减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤，其机制可能与下调ICAM1表达有关。

简介：摘要目的探讨微小RNA（miR）-216a-5p在妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘中的表达及其对滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响及可能机制。方法收集2018年10月至2019年10月烟台市烟台山医院的28例GDM孕妇（GDM组）和28例正常孕妇（对照组）胎盘组织，将体外培养HTR-8/SVneo细胞分为空白组（正常培养）、模拟物（mimics）-NC组（转染mimics-NC）和miR-216a-5p mimics组（转染miR-216a-5p mimics），采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中miR-216a-5p表达水平，Transwell实验检测各组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移，免疫印迹法（Western blot）检测各组HTR-8/SVneo细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指E盒结合蛋白-1（ZEB1）和N-钙黏附分子（N-cadherin）蛋白表达，双荧光素酶报告基因实验检测miR-216a-5p和ZEB1的靶向关系。结果与对照组比较，miR-216a-5p在GDM组胎盘组织中表达明显升高（2.86±0.35 vs 0.96±0.07, P<0.05）；与mimics-NC组比较，miR-216a-5p mimics组细胞中miR-216a-5p和E-cadherin蛋白表达水平明显升高[（1.01±0.08）vs（22.48±3.26），（0.25±0.03）vs（0.68±0.05）]，而细胞侵袭、迁移能力和细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达水平明显降低[（106.83±9.35）vs（59.16±5.28），（205.48±18.25）vs（87.32±6.50），（0.65±0.05）vs（0.35±0.02），（0.55±0.04）vs（0.32±0.03），（0.50±0.03）vs（0.36±0.02）]（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-216a-5p可与ZEB1靶向结合。结论miR-216a-5p在GDM患者胎盘组织中表达上调，可能通过靶向调控ZEB1表达抑制滋养层HTR-8/SVneo细胞转移。

简介：摘要目的探讨CK5/6、DSG3、P40、TTF-1、CK7、NapsinA在非小细胞肺癌(NSCLC)活检小标本中鳞状细胞癌(SCC)与腺癌(AC)的表达及其鉴别意义。方法采用免疫组化SP法检测2016年1月至2017年12月在滕州市中心人民医院住院治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)120例活检小标本中CK5/6、DSG3、P40、TTF-1、CK7、NapsinA表达，并结合NSCLC的临床特征进行分析。结果CK5/6、DSG3和P40在肺鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达率分别为100.0%(56/56)、89.3%(50/56)和96.4%(54/56)，特异度分别为90.6%、100.0%和100.0%；NapsinA、TTF-1、CK7在肺腺癌(AC)组织中的表达率分别为81.3%(52/64)、90.6%(58/64)和93.8%(60/64)，特异度分别为100.0%、92.9%和96.4%。CK5/6、DSG3和P40在SCC组织中的表达与在AC组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)，NapsinA、TTF-1、CK7在AC组织中的表达较SCC组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论CK5/6、DSG3、P40、TTF-1、CK7、NapsinA在非小细胞肺癌活检小标本SCC与AC的鉴别诊断中具有重要意义。

简介：摘要微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小的非编码RNA，长度为18～24个核苷酸，可转录后调控蛋白质的表达。miR-155在促进炎症反应尤其是动脉粥样硬化中发挥重要作用，近来研究发现，miR-155在过敏性哮喘中也起着不可或缺的作用。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate，S1P)是一种有效的脂质介质，已被广泛认为是人体内重要的血管和免疫功能调节剂。1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2，S1PR2)是S1P的一种受体，S1PR2通过与G蛋白不同的α亚基耦联激活不同的信号通路而发挥不同的生物学功能。S1P/S1PR2在血管发育，炎症反应及过敏反应中扮演着重要的角色。本篇综述主要对miR-155以及S1P/S1PR2在动脉粥样硬化和过敏性猝死之间的联系进行阐述。

简介：摘要目的探讨宫颈活检病灶组织中P16和Ki-67蛋白在高危人乳头瘤病毒(HPV)感染同时液基薄层细胞学(TCT)检测异常的患者中阳性表达情况，以及预测早期宫颈癌发生的应用价值。方法回顾性总结2016年1月至2017年7月于临海市中医院行HPV-DNA检测和TCT检查患者，选择高危HPV(16和18亚型阳性)和TCT异常患者共120例，经阴道镜宫颈活检病灶组织进行病理诊断，同时进行P16和Ki-67蛋白免疫组化染色。结果120例患者中HPV-16阳性66例，18阳性34例，16和18均阳性20例；TCT报告未明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞(ASC)6例，低级别鳞状上皮内病变(LSIL)46例，高级别SIL(HSIL)60例，宫颈鳞状细胞癌(SCC)8例；病理诊断炎症5例，上皮内瘤样病变(CIN)105例，SCC 10例。P16和Ki-67蛋白阳性表达率在炎症、CIN和SCC患者中逐渐升高[0.0%(0/5)、36.2%(38/105)、70.0%(7/10)，χ2＝4.382，P＝0.036；0.0%(0/5)、40.0%(42/105)、80.0%(8/10)，χ2＝5.945，P＝0.015]。对CIN患者共随访21～36个月，中位时间29.5个月，共26例进展至SCC，进展至SCC患者随访截止时P16和Ki-67蛋白阳性表达率显著高于未进展患者[61.5%(16/26)比39.2%(31/79)，χ2＝3.934，P＝0.047；69.2%(18/26)比41.8%(33/79)，χ2＝5.905，P＝0.015]。结论宫颈活检组织中P16和Ki-67蛋白在高危HPV感染同时TCT异常患者中具有差异性表达，病理诊断SCC中P16和Ki-67蛋白阳性表达率显著高于CIN患者，并且随访进展至SCC的CIN患者P16和Ki-67蛋白阳性表达率也明显高于未进展者，提示P16和Ki-67蛋白对预测早期宫颈癌发生具有重要价值。

简介：摘要目的探讨黄连碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞损伤的影响及其机制。方法用0.3 mmol/L的MPP+处理SK-N-SH细胞作为PD细胞模型，记为MPP+组，以正常培养的细胞作为空白对照组。用浓度分别为10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L的黄连碱预处理4h后再用0.3 mmol/L的MPP+处理作为不同浓度黄连碱处理组。将miR-con、miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后再用0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++miR-con组、MPP++miR-146a-5p组；将anti-miR-con、anti-miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后用20 μmol/L的黄连碱预处理4h及0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++Cop+anti-miR-con组、MPP++Cop+anti-miR-146a-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率；Western blotting实验检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平。结果与空白对照组比较，MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低，活化caspase-3表达水平显著升高，细胞凋亡率显著升高，CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。黄连碱处理及miR-146a-5p过表达后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中细胞存活率显著升高，活化caspase-3表达水平显著降低，细胞凋亡率显著降低，CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对SK-N-SH细胞增殖促进和凋亡抑制的作用。黄连碱处理后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中p-AKT、p-PI3K表达水平显著升高，低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对p-AKT、p-PI3K表达水平的促进作用。结论黄连碱可促进细胞存活，抑制MPP+诱导的细胞凋亡，其机制可能与miR-146a-5p及PI3K/AKT信号通路有关。

简介：摘要目的探讨癌易感性候选基因19（CASC19）调控微小RNA-449b-5p（miR-449b-5p）的表达后对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响。方法（1）培养子宫颈癌细胞系HeLa细胞，予不同剂量（分别为0、2、4、6、8 Gy）的X线照射，实时荧光定量PCR技术检测HeLa细胞中CASC19 mRNA和miR-449b-5p的表达水平。（2）不同条件处理后HeLa细胞增殖、凋亡、辐射敏感性及其相关蛋白表达的检测，其中，不同处理条件包括沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p、下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达，相关蛋白包括细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）和组蛋白变异体H2AX（γ-H2AX）；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性（以存活分数表示）。（3）采用双荧光素酶报告基因实验（结果以荧光素酶活性表示）和实时荧光定量PCR技术验证CASC19和miR-449b-5p之间的靶向调控关系。结果（1）随着X线照射剂量（0、2、4、6、8 Gy）的增加，HeLa细胞中CASC19 mRNA的表达水平逐渐升高（F=502.681，P=0.000），miR-449b-5p的表达水平逐渐降低（F=202.936，P=0.000）。（2）沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p后，HeLa细胞的存活率显著降低（P<0.05），凋亡率显著升高（P<0.05），存活分数显著降低（P<0.05），cyclin D1蛋白的表达水平显著降低（P<0.05），cleaved-caspase-3和γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）；下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达后，HeLa细胞的存活率显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），存活分数显著升高（P<0.05），cyclin D1、γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（P<0.05），cleaved-caspase-3的表达水平显著降低（P<0.05）。（3）与对照比较，过度表达miR-449b-5p可显著降低CASC19基因野生型HeLa细胞的荧光素酶活性（分别为1.00±0.09、0.37±0.05，P<0.01），而对CASC19基因突变型HeLa细胞的荧光素酶活性无显著影响（分别为0.92±0.07、0.94±0.05，P>0.05）。与对照比较，沉默CASC19表达后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著升高（分别为1.00±0.12、4.84±0.49，P<0.05），过度表达CASC19后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著降低（分别为1.00±0.09、0.38±0.04，P<0.05）。结论HeLa细胞中CASC19可负调控miR-449b-5p的表达，下调miR-449b-5p表达可部分逆转沉默CASC19对HeLa细胞增殖、凋亡及辐射敏感性的影响。

简介：摘要目的探讨Alisertib(ALS)对人结直肠癌HT29和Caco-2细胞(来自美国典型菌种保藏中心)的诱导细胞凋亡性程序性死亡的作用及与p53表达状态间的关系。方法采用人结直肠癌HT29和Caco-2细胞进行实验。对照组用同浓度的二甲基亚砜(DMSO)，实验组用0.1、1.0、5.0 μmol/L ALS处理细胞。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活力，计算半数抑制浓度(IC50)；流式细胞术检测细胞的凋亡率；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡过程中关键调节分子的蛋白表达。应用Prism软件多重比较通过单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Tukey的多重比较。结果ALS作用于HT29和Caco-2细胞24、48 h后，IC50值分别为48.4、9.9、89.2和52.1 μmol/L。用1.0、5.0 μmol/L ALS处理HT29和Caco-2细胞，Aurora A激酶(AURKA)的磷酸化(p-AURKA)水平分别减少为对照组的45.6%、6.3%(F＝100.400, P<0.01)和65.7%、30.7%(F＝26.410，P<0.01)。HT29细胞表达p53蛋白，而Caco-2细胞不表达p53蛋白。与对照组比较，1.0、5.0 μmol/L ALS处理HT29和Caco-2细胞后，细胞凋亡率升高为13.4%、14.3%(F＝11.240, P<0.05)和11.8%、10.5%(F＝9.357, P<0.05)。5.0 μmol/L ALS引起HT29细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt-C)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)和裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的表达水平分别升高85%(F＝7.289, P<0.05)、1.6倍(F＝9.640, P<0.05)、1.3倍(F＝12.120, P<0.05)、4.3倍(F＝56.320, P<0.05)，B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达降低为28%(F＝8.849, P<0.01)。在Caco-2细胞中5.0 μmol/L ALS引起RIP、磷酸化Fas相关死亡域蛋白(p-FADD)和cleaved PARP的表达分别增加1.5倍、83%和1.1倍。结论ALS分别通过线粒体途径和死亡受体途径诱导HT29和Caco-2细胞发生凋亡性程序性细胞死亡，与p53蛋白是否表达有关。

简介：摘要目的探讨lncRNA-C21orF96调控miRNA-875-5p和USF2基因表达促进胃癌细胞的侵袭和转移机制。方法采用RT-PCR技术检测胃癌细胞中与lncRNA-C21orF96相关的miRNA的含量；胃癌细胞KATO-Ⅲ经pcDNA3.1质粒过表达lncRNA-C21orF96，SGC-7901细胞经siRNA干扰lncRNA-C21orF96表达后，采用RT-PCR技术检测胃癌细胞中miR-875-5p和USF2基因表达量的变化；胃癌细胞MKN45过表达lncRNA-C21orF96后，采用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化。结果在胃癌细胞中，lncRNA-C21orF96与miR-875-5p值呈显著的相反关系，两者之间相对定量值差异具有统计学意义(SGC-7901细胞：21.19 ±1.09比3.28 ±0.06，P<0.01；SNU-16细胞：24.76±2.09比8.16 ±0.07，P<0.01)；转染lncRNA-C21orF96表达载体的KATO-Ⅲ细胞中miR-875-5p表达显著下降而USF2基因表达升高(P<0.01)；转染lncRNA-C21orF96干扰载体的SGC-7901细胞中miR-875-5p表达显著升高而USF2基因表达降低(P<0.05); lncRNA-C21orF96过表达后，实验组穿过人工基底膜的平均细胞数与对照组相比差异具有统计学意义[迁移实验：(216.19 ± 2.30)个比(89.19 ± 4.60)个，P<0.001；侵袭实验：(146.18 ±5.3)个比(59.18 ± 2.60)个，P<0.001]。结论LncRNA-C21orF96的过表达能显著调控miR-875-5p表达同时促进USF2基因表达，促进胃癌细胞的侵袭和转移。

简介：摘要目的观察钩藤碱固体脂质纳米粒(rhynchophylline solid lipid nanoparticles, Rhy-SLN)对小鼠气道平滑肌细胞增殖及TGF-β1/ERK/P38信号通路的影响。方法小鼠气道平滑肌细胞体外分离培养，按随机数字表法分为空白组、TGF-β1组、Rhy-SLN组、抑制剂组。除空白组外，其余各组气道平滑肌细胞以0.2% BSA/DMEM无血清培养基培养，使细胞处于增殖停滞状态。TGF-β1组加入5 μg/L的TGF-β1进行干预；Rhy-SLN组加入5 μg/L的TGF-β1及10 μmol/L的Rhy-SLN进行干预；抑制剂组加入5 μg/L的TGF-β1及10 μmol/L SB431542进行干预。干预后24 h，采用MTT法检测小鼠气道平滑肌细胞增殖情况；采用Western blot法检测小鼠气道平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38蛋白表达水平。结果与TGF-β1组比较，Rhy-SLN组和抑制剂组吸光度值[(1.352±0.14)、(1.139±0.12)比(1.780±0.18)]降低(P<0.05)，PCNA蛋白[(0.25±0.03)、(0.24±0.02)比(0.49±0.05)]、p-ERK1/2[(1.01±0.11)、(0.97±0.09)比(1.86±0.17)]、p-p38蛋白[(0.26±0.03)、(0.22±0.02)比(0.41±0.04)]表达降低(P<0.05)。结论Rhy-SLN可抑制小鼠气道平滑肌细胞增殖，其机制可能与调节TGF-β1/ERK1/2信号通路有关。