简介:摘要目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路在地塞米松(DEX)诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组,分别为对照组、DEX组、DEX+AG490组。对照组只加入正常培养基,DEX组加入200 μmol/L的DEX培养,DEX+AG490组预先给予50 μmol/L的AG490处理后加入200 μmol/L的DEX培养。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测通路蛋白及凋亡蛋白的表达。组间比较采用t检验。结果对照组、DEX组、DEX+12.5、25、50、75 μmol/L的AG490的细胞存活率分别为(97.74±1.45)%、(52.05±5.50)%、(54.98±3.77)%、(70.99±4.15)%、(81.53±6.43)%、(79.16±7.35)%。表明DEX明显使成骨细胞MC3T3-E1活力降低(t=11.364,P<0.001),50 μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂(AG490)明显抑制了DEX对成骨细胞MC3T3-E1活力的降低作用(t=4.928,P<0.01)。对照组、DEX组、DEX+AG490组的细胞凋亡率分别为(6.067±0.545)%、(26.233±2.631)%和(8.463±1.179)%。表明DEX明显诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡(t=12.999,P<0.001),经AG490处理后,DEX诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡明显受到抑制(t=10.675,P<0.001)。蛋白质印迹法(Western blot)检测正常组、DEX组、DEX+AG490组p-JAK2蛋白表达分别为1.000±0.323、2.839±0.640、0.286±0.068,p-STAT3蛋白表达分别为1.000±0.245、3.471±0.157、0.618±0.078,bax蛋白表达分别为1.000±0.083、6.571±0.405、3.048±0.905,bcl-2蛋白表达分别为1.000±0.086、0.207±0.040、0.563±0.083,cleaved Caspase-3蛋白表达分别为1.000±0.192、5.685±0.699、3.411±0.247。DEX组较对照组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显增加,bcl-2的表达明显减少(t=4.429、14.912、11.100、23.561、14.565,P<0.05),AG490+DEX组较DEX组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显减少,bcl-2的表达明显增加(t=6.860、28.404、5.262、6.185、6.721,P<0.01)。结论DEX通过JAK2/STAT3信号通路,调节cleaved Caspase-3、bax、bcl-2的表达,诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA-POU3F3(LncRNA-POU3F3)在甲状腺癌组织中的表达情况及对患者预后的影响。方法采用病例-对照研究,收集2013年5月至2015年8月在郑州人民医院手术的118例甲状腺癌患者的癌组织和癌旁组织,另选取同时期100例甲状腺良性肿瘤患者的甲状腺良性肿瘤组织作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测甲状腺组织中LncRNA-POU3F3的表达情况,使用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价LncRNA-POU3F3对甲状腺癌的诊断价值,并分析LncRNA-POU3F3表达与患者临床病理特征及预后的相关性。结果qRT-PCR结果显示,与癌旁组织(3.18 ± 0.69)、甲状腺良性肿瘤组织(3.05 ± 0.66)比较,LncRNA-POU3F3在甲状腺癌组织表达水平(4.02 ± 0.76)较高(P均< 0.05)。LncRNA-POU3F3表达诊断甲状腺癌ROC曲线下面积为0.886[95%置信区间(95%CI):0.821 ~ 0.943,P < 0.05],敏感度为83.7%,特异度为85.2%,诊断阈值为3.45;临床分期为Ⅲ ~ Ⅳ期、肿瘤直径≥1 cm、多发癌灶及伴有淋巴结转移的甲状腺癌组织中LncRNA-POU3F3高表达(≥3.45)比例均较高(P均< 0.05);Kaplan-Meier法分析结果显示,随访5年后,纳入的118例甲状腺癌患者存活53例,其中LncRNA-POU3F3低表达者( < 3.45)5年生存率为77.42%(24/31),LncRNA-POU3F3高表达者(≥3.45)5年生存率为33.33%(29/87),两组5年生存率比较差异有统计学意义(χ2 = 17.955,P < 0.05);多因素logistic回归分析显示,临床分期、肿瘤直径、癌灶数量、淋巴结转移和LncRNA-POU3F3表达均与甲状腺癌患者生存期相关(P均< 0.05)。结论LncRNA-POU3F3在甲状腺癌组织中呈高表达,其表达水平与甲状腺癌患者临床病理特征及预后密切相关,可作为预测甲状腺癌患者预后的重要指标。
简介:摘要目的探讨3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA lyase deficiency,HLD)患儿的临床特征和基因变异。方法收集1例中山大学附属第六医院儿科2019年4月确诊的1例HLD患儿的临床表现、实验室检查及基因检测等临床资料,并以"3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症"、"低酮性低血糖"、"代谢性酸中毒"、"3-羟基-3-甲基戊二酸尿症"、"HMGCL"、"HMGCL基因"、"3-Hydroxy-3-Methylglutaric Aciduria"、"3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA lyase deficiency"为关键词,对中国知网、万方数据知识服务平台及PubMed 1970年1月至2020年1月收录的论文进行检索。总结HLD患儿的临床表现和基因特点。结果本例患儿表现为反复低血糖、重度代谢性酸中毒、肝功能异常。血代谢结果:C5-OH、C2/CO、C5-OH/C8、C5-OH/C0升高,CO、C16-OH、C4/C8、C5DC/C5-OH降低。尿代谢结果:3-羟基异戊酸、戊二酸、3-甲基戊二酸、3-羟基-3-甲基戊二酸、3-甲基戊烯二酸水平升高。结论HLD是一种遗传性代谢紊乱疾病,由HMGCL基因突变导致,无特异性临床表现,患儿尿中升高的有机羧酸可有助于鉴别诊断,目前诊断依赖基因检测。
简介:摘要目的探讨3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA lyase deficiency,HLD)患儿的临床特征和基因变异。方法收集1例中山大学附属第六医院儿科2019年4月确诊的1例HLD患儿的临床表现、实验室检查及基因检测等临床资料,并以"3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症"、"低酮性低血糖"、"代谢性酸中毒"、"3-羟基-3-甲基戊二酸尿症"、"HMGCL"、"HMGCL基因"、"3-Hydroxy-3-Methylglutaric Aciduria"、"3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA lyase deficiency"为关键词,对中国知网、万方数据知识服务平台及PubMed 1970年1月至2020年1月收录的论文进行检索。总结HLD患儿的临床表现和基因特点。结果本例患儿表现为反复低血糖、重度代谢性酸中毒、肝功能异常。血代谢结果:C5-OH、C2/CO、C5-OH/C8、C5-OH/C0升高,CO、C16-OH、C4/C8、C5DC/C5-OH降低。尿代谢结果:3-羟基异戊酸、戊二酸、3-甲基戊二酸、3-羟基-3-甲基戊二酸、3-甲基戊烯二酸水平升高。结论HLD是一种遗传性代谢紊乱疾病,由HMGCL基因突变导致,无特异性临床表现,患儿尿中升高的有机羧酸可有助于鉴别诊断,目前诊断依赖基因检测。
简介:目的:比较卵巢癌SK-OV-3细胞在2D和3D培养系统中的生长特性。方法将卵巢癌细胞株SK-OV-3分别采用2D和3D培养系统进行培养,观察细胞生长形态。采用CCK-8法测定细胞生长,Brdu法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果SK-OV-3细胞在2D培养系统中呈单层贴壁生长;在3D培养系统中形成多细胞球样体(muti-cellularspheroid,MCS),生长速度较2D培养系统慢。在2D培养系统中SK-OV-3细胞的S/G2-M期细胞比例为(53.7±5.8)%,明显高于在3D培养系统中S/G2-M期细胞比例[(40.9±2.0)%,P<0.05]。结论不同的培养方式对卵巢癌细胞的生长具有较大的影响。MCS三维培养系统能更好地模拟体内肿瘤细胞的生长状况,是卵巢癌研究的良好平台。
简介:目的探讨BALB/c3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据。方法选取11种受试物,开展BALB/c3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较。同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析。结果阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求。受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种。BALB/c3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearsonr=0.997,P〈0.01)。受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearmanr=0.905,P〈0.01)。结论在本试验体系下,BALB/c3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性。既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据。
简介:摘要目的探讨miR-124-3p和miR-506-3p在蛋白C(protein C,PROC)降低中的作用及机制。方法将PROC 3'-UTR野生型(PROCwt)和PROC 3'-UTR突变型(PROCmut)克隆构建到含萤火虫荧光素酶报告质粒中(Luc-PROCwt和Luc-PROCmut),利用双荧光素酶报告体系检测相对荧光素酶酶活性,明确miR-124-3p和miR-506-3p与PROC的靶基因关系及其紧密性。将miR-124-3p mimics和miR-506-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至HL-7702细胞,检测对照组(NC)、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组的细胞增殖率,PROC mRNA表达水平,PROC、COX-2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平和细胞凋亡水平,并采用单因素和双因素方差分析比较各组间的差异。结果双荧光素酶报告体系检测显示,NC+Luc-PROCwt组、miR-506-3p+Luc-PROCwt组、miR-124-3p+Luc-PROCwt组、NC+Luc-PROCmut组、miR-506-3p+Luc-PROCmut组和miR-124-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性分别为6.98±0.07、2.01±0.05、2.67±0.06、8.13±0.26、6.91±0.14和8.41±0.13。与NC+Luc-PROCwt组相比,miR-506-3p+Luc-PROCwt组与miR-124-3p+Luc-PROCwt组的荧光素酶活性均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.01);与NC+Luc-PROCmut组相比,miR-506-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显降低,miR-124-3p+Luc-PROCmut组荧光素酶活性明显升高,组间比较,差异亦均有统计学意义(P<0.01和P=0.018 1)。CCK-8检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组96 h时细胞增殖率分别为0.506±0.016、0.323±0.021、0.329±0.011、0.570±0.007和0.562±0.007。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞增殖率均有所下降,组间差异均有统计学意义(P均<0.01);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞增殖率均有所上升,组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达量分别为1.00±0.08、0.31±0.09、0.34±0.04、1.73±0.28和1.75±0.36。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组PROC mRNA表达水平均明显降低,组间差异均有统计学意义(P=0.002 6和0.003 2);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC mRNA表达水平均明显上升,组间差异亦均有统计学意义(P=0.001 8和0.001 6)。Western-blot检测显示,与NC组相比,miR-506-3p组与miR-124-3p组PROC与Bcl-2蛋白表达水平下调,COX-2和Bax蛋白表达水平上调;miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组PROC与Bcl-2蛋白表达水平上调,COX-2和Bax蛋白表达水平下调。Annexin V-FITC/PI检测显示,NC组、miR-506-3p组、miR-124-3p组、miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率分别为(10.27±0.57)%、(21.50±1.44)%、(13.52±0.40)%、(1.12±0.08)%和(7.63±0.40)%。与NC组相比,miR-506-3p组和miR-124-3p组细胞凋亡率均明显升高,组间差异均有统计学意义(P均<0.01);miR-506-3p抑制组和miR-124-3p抑制组细胞凋亡率均明显降低,组间差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。结论PROC是miR-506-3p和miR-124-3p的靶基因,miR-506-3p和miR-124-3p可能通过抑制肝细胞增殖、促进肝细胞凋亡和抑制PROC mRNA表达引发PROC蛋白表达水平降低。
简介:摘要目的研究痹祺胶囊水提取物对成骨细胞MC3T3-E1的作用及其机制。方法(1)体外培养成骨细胞MC3T3-E1,分为对照组及痹祺胶囊水提取物(0.125,0.25,0.5,1,2,4g·L-1)干预组,48h后,MTT法检测细胞增殖情况(2)培养MC3T3-E1细胞,分为对照组及痹祺胶囊水提取物(0.25,0.5,1g·L-1)干预组,48h后,用RT-PCR检测骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA,骨钙素(OC)mRNA以及碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达。结果(1)痹祺胶囊水提取物各干预组MC3T3-E1细胞的OD值均明显升高,与对照组比较有统计学差异(P<0.01)。(2)痹祺胶囊水提取物0.5g·L-1组的BMP-2mRNA,ALPmRNA和OCmRNA表达均明显增强,痹祺胶囊水提取物0.25g·L-1组的ALPmRNA和痹祺胶囊水提取物1g·L-1组的OCmRNA表达也明显增强,与对照组比较均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论痹祺胶囊水提取物可促进成骨细胞MC3T3-E1增殖,通过上调BMP-2mRNA,ALPmRNA和OCmRNA的表达,也可促进成骨细胞的分化功能。
简介:摘要:目的:临床分析卵巢癌手术切除组织中细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)的表达。方法:回顾性方法分析,选取本院于2021年1月-2022年1月收治的48例卵巢癌患者作为此次研究对象,入院后均进行手术治疗,留取病灶标本,并选择远离病灶中心>5cm的癌旁组织作为对照标本。分析不同病理状态下的胞因子信号传导抑制蛋白-3表达量。结果:卵巢癌组织的SOCS-3表达量低于癌旁组织,有显著差异(P
简介: