简介：摘要目的探索踝蛋白-1(Talin-1)在小鼠主动脉夹层中的作用与机制。方法FVB雄性小鼠共60只，分为空白组，造模组，Talin-1上调组，Talin-1上调对照组，Talin-1下调组，Talin-1下调对照组，每组10只。除空白组外，其余组均给予β-氨基丙腈结合血管紧张素构建小鼠主动脉夹层模型。利用腺相关病毒技术进行小鼠体内干预Talin-1。用苏木精-伊红和血管弹力纤维染色(EVG)观察主动脉和弹力纤维的形态和结构。用Western blot法检测小鼠主动脉组织中FAK和ERK1/2的磷酸化水平。结果造模组小鼠主动脉夹层造模成功率70%，空白组未出现主动脉夹层。所有小鼠在实验期间未出现猝死。Talin-1下调组小鼠主动脉夹层发生率100%，显著高于Talin-1下调对照组，Talin-1上调组小鼠主动脉夹层发生率20%，显著低于Talin-1上调对照组(均P<0.05)。苏木精-伊红染色和EVG结果提示Talin-1下调组小鼠主动脉管壁增厚，伴壁间血肿或假腔形成，同时中膜弹力纤维含量与Talin-1下调对照组相比显著降低，而Talin-1上调组小鼠血管壁中弹力纤维含量显著高于Talin-1上调对照组(均P<0.05)。Western blot检测发现下调Talin-1显著抑制FAK磷酸化，相反对ERK1/2磷酸化起到促进作用(均P<0.05)。结论Talin-1下调可能通过激活ERK1/2信号通路进而降低小鼠主动脉中膜弹力纤维含量，导致主动脉管壁发生血管重构，促进主动脉夹层的发生。

简介：摘要目的探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia, HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system, CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1 nef基因，与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体，转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况，采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h～62 h，每间隔5 h收集U87细胞的培养上清，ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量，分析两种细胞因子的动态表达情况。结果成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的nef基因的重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体，转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示，Nef蛋白在转染后42 h开始表达，Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示，转染后22 h、27 h、32 h、37 h，各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多，但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α：F＝0.445, P＝0.837; F＝0.579, P＝0.742; F＝0.617, P＝0.714; F＝2.728, P＝0.057。IL-1β：F＝2.656, P＝0.062; F＝0.485, P＝0.809; F＝0.165, P＝0.982; F＝2.463, P＝0.093); 42 h后，各组细胞因子含量逐渐降低，57 h～62 h，TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定；转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h，实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组，差异有统计学意义(TNF-α：F＝241.310, P<0.001; F＝242.638, P<0.001; F＝250.114, P<0.001; F＝143.877, P<0.001; F＝146.172, P<0.001。IL-1β：F＝251.578, P<0.001; F＝188.816, P<0.001; F＝276.240, P<0.001; F＝238.136, P<0.001; F＝163.361, P<0.001)，各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力，而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响。

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简介：摘要目的探讨神经调节蛋白-1（NRG-1）对SD大鼠心肌梗死后心脏葡萄糖代谢的改善作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组、心肌梗死组和心肌梗死+NRG-1组，每组6只。通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，心肌梗死+NRG-1组大鼠在建模成功后，于尾静脉注射NRG-1β（100 μg/kg），每周2次，共6周；假手术组和心肌梗死组则给予等量生理盐水注射。干预结束后，予超声心动图及小动物正电子发射断层扫描（PET）检测心脏功能和心肌葡萄糖摄取。组织病理学染色观察心肌纤维形态和胶原面积分数，检测心肌细胞凋亡和细胞内活性氧（ROS）水平。商品化试剂盒检测组织丙酮酸脱氢酶（PDH）、柠檬酸合成酶（CS）活性以及ATP生成浓度。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测组织葡萄糖转运子-4（Glut-4）、己糖激酶-2（HK2）、丙酮酸脱氢酶激酶-4（PDK4）、CS mRNA表达水平；Western blot检测NRG-1、磷酸化酪氨酸激酶受体-4（p-ErbB4）及葡萄糖代谢相关蛋白（包括Glut-4、HK2、PDH、CS）表达水平。结果建模成功后，心肌梗死组和心肌梗死+NRG-1组大鼠的左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）低于假手术组（P均<0.01），两组的各项参数差异均无统计学意义（P均>0.05）；给予NRG-1β干预6周后，心肌梗死+NRG-1组的LVEF及LVFS较心肌梗死组高（P均<0.01）。PET检查结果显示，干预结束后，心肌梗死+NRG-1组大鼠的标准化摄取值平均值（SUVmean）低于假手术组（4.06±0.28比5.18±0.37，P<0.01），但明显高于心肌梗死组（4.06±0.28比2.86±0.49，P<0.01）。病理染色结果显示，心肌梗死+NRG-1组的左心室胶原面积分数［（7.83±1.24）%比（18.31±3.58）%，P<0.01］、心肌细胞凋亡比例［（37.98±4.26）%比（67.04±5.38）%，P<0.01］明显低于心肌梗死组，DHE染色荧光强度低于心肌梗死组（0.057 28±0.007 06比0.076 94±0.008 46，P<0.01），提示NRG-1β干预可减少ROS生成。心肌梗死+NRG-1组心肌组织的PDH活性及CS活性较心肌梗死组高（P均<0.05），ATP生成亦更多（P<0.01）。qRT-PCR结果显示，与心肌梗死组比较，心肌梗死+NRG-1组大鼠心肌组织Glut-4、HK2和CS mRNA表达水平上调，而PDK4 mRNA表达水平下调（P均<0.01）。Western blot检测结果显示，心肌梗死+NRG-1组的NRG-1和p-ErbB4蛋白表达水平高于心肌梗死组，同时Glut-4、HK2、PDH和CS蛋白表达水平亦较心肌梗死组上调（P均<0.01）。结论NRG-1通过激活心肌组织ErbB4受体的磷酸化表达，促进梗死后心肌组织的葡萄糖摄取和利用，为改善心肌梗死后能量代谢提供了干预靶点。

简介：摘要遗传性弥漫型胃癌是一种常染色体显性遗传病，以胃弥漫型印戒细胞癌和乳腺小叶癌为特征。该综合征的遗传基础是编码E-钙黏蛋白的钙黏蛋白1(CDH1)基因的胚系突变。该患者为年轻女性，胃体后壁、胃体前壁见印戒细胞癌，外周血行基因二代测序检测显示CDH1基因第10外显子存在杂合性突变，经多学科协作讨论后，行全胃切除联合D2淋巴结清扫术，同时指导肿瘤监测和一级亲属的基因检测。

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简介：摘要口面部疼痛常为困扰患者的一大症状，给患者带来极大痛苦。但口面部疼痛发生的机制仍在探索之中。三叉神经是口面部主要的感觉神经，随着瞬时受体电压锚蛋白1(transient receptor potentialankyrin 1, TRPA1)在三叉神经及其下级神经元中的发现，近些年TRPA1在口面部疼痛中的作用逐渐得到重视。了解TRPA1在疼痛中的作用及调控对于了解疼痛机制以及未来治疗疼痛有着重大的意义。本文就TRPA1在口面部疼痛中的研究进展做一综述。

简介：摘要目的探讨新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）非结构蛋白1（nonstructural protein 1，NSP1）对I型干扰素（type I interferon，IFN-I）应答的影响及其作用机制。方法为研究SARS-CoV-2的NSP1对I型IFN产生的影响，构建NSP1表达质粒，并通过免疫荧光检测其蛋白表达能力。通过双荧光素酶报告基因实验检测NSP1对IFN-β启动子激活的作用。构建NSP1突变体M1（K163AH164A）和M2（△161-180），验证突变位点对IFN-β启动子激活的影响。结果NSP1显著抑制维甲酸诱导基因蛋白I、黑色素瘤分化相关蛋白5、线粒体抗病毒信号蛋白、TANK结合激酶1、干扰素调节因子3、干扰素调节因子7诱导的下游IFN-β启动子的激活，并对I型IFN通路的各关键分子的蛋白表达具有抑制作用，NSP1 C端的KH基序是其发挥抑制作用的关键位点。结论SARS-CoV-2 NSP1能够拮抗宿主I型干扰素免疫应答，实现病毒的天然免疫逃逸。

简介：摘要目的评价神经调节蛋白-1(NRG-1)预先给药对脓毒症大鼠膈肌功能的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠26只，体重220～260 g，采用随机数字表法分为3组：假手术组(S组，n＝6)、脓毒症组(Sep组，n＝10)和NRG-1组(N组，n＝10)。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型，S组暴露盲肠后关腹。制模前30 min时，N组尾静脉注射重组人NRG-1β 10 μg/kg，S组和Sep组注射等容量生理盐水。术后24 h时麻醉下处死大鼠取膈肌标本，测定膈肌收缩功能；HE染色后观察膈肌病理学改变；采用ELISA法检测膈肌TNF-α和IL-6含量。结果与S组比较，Sep组和N组膈肌张力-频率曲线下移，TNF-α和IL-6含量升高(P<0.01)，出现炎症细胞浸润；与Sep组比较，N组膈肌张力-频率曲线上移，TNF-α和IL-6含量降低(P<0.01)，炎症细胞浸润减少。结论NRG-1预先给药可改善脓毒症大鼠膈肌收缩功能，其机制与减轻膈肌炎症反应有关。

简介：摘要高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1，HMGB1)是广泛存在于真核细胞核染色质中的一种非组蛋白，在机体炎症性疾病、自身免疫病以及癌症中发挥重要作用。在肿瘤的发生发展中，不同亚细胞定位的HMGB1发挥不同的功能。一方面，HMGB1能够促进肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和转移，介导免疫逃逸与免疫耐受；另一方面，HMGB1能维持基因组稳定性，调节抑癌基因表达，抑制细胞侵袭与转移，提高抗肿瘤治疗功效，从而实现抗肿瘤作用。越来越多的研究表明HMGB1与肿瘤发生发展有着密切的联系，明确HMGB1的功能将为肿瘤的预防与治疗提供启示，本文主要围绕HMGB1在肿瘤发展中的双重作用进行综述。

简介：摘要目的观察芍药内酯苷(AF)对白细胞介素(IL)-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用，并探讨机制是否与调控微小RNA(miR)-149-5p/Wnt1诱导信号通路蛋白1(WISP1)通路有关。方法分离培养远交群(SD)大鼠膝关节软骨细胞，采用10 μg/L的IL-1β建立软骨细胞损伤模型。根据处理方法不同将软骨细胞分为对照(Con)、IL-1β、IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H、IL-1β+miR-NC、IL-1β+miR-149-5p、IL-1β+si-NC、IL-1β+si-WISP1、IL-1β+AF+anti-miR-NC、IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；流式细胞术和蛋白质印记(Western blot)用于分析细胞凋亡和WISP1蛋白表达；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p和WISP1 mRNA表达。双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-149-5p对WISP1的靶向作用。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析和SNK-q检验。结果IL-1β组软骨细胞上清液中IL-6(6.11±0.61比2.54±0.25，q＝26.072，P<0.05)、IFN-γ(53.62±5.33比8.14±0.82，q＝44.989，P<0.05)和TNF-α含量(29.54±2.71比4.21±0.42，q＝44.463，P<0.05)高于Con组，细胞凋亡率(28.65±2.71比8.23±0.81，q＝33.622，P<0.05)、WISP1表达(0.92±0.08比0.45±0.04，q＝22.873，P<0.05)高于Con组，miR-149-5p表达(0.44±0.04比1.00±0.05，q＝30.571，P<0.05)低于Con组。IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H组软骨细胞上清液中IL-6(5.03±0.49、3.95±0.31、2.86±0.27比6.11±0.61，q＝7.887、14.775、23.735，P<0.05)、IFN-γ(37.19±3.21、24.58±2.44、13.54±1.32比53.62±5.33，q＝16.063、28.391、39.184，P<0.05)和TNF-α(21.65±2.17、12.64±1.28、6.95±0.63，q＝14.014、30.017、40.123，P<0.05)含量低于IL-1β组，细胞凋亡率(22.47±2.23、16.98±1.54、10.54±1.12比28.65±2.71，q＝10.175、19.215、29.818，P<0.05)、WISP1表达(0.78±0.07、0.66±0.06、0.53±0.05比0.92±0.08，q＝6.813、12.653、18.980，P<0.05)低于IL-1β组，miR-149-5p表达高于IL-1β组。IL-1β+miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(3.21±0.31比6.19±0.61，t＝13.065，P<0.05)、IFN-γ(16.47±1.68比54.23±5.33，t＝20.270)和TNF-α含量(9.36±0.94比28.46±2.81，t＝19.338，P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组，细胞凋亡率(12.33±1.25比29.65±2.41，t＝19.139，P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+si-WISP1组软骨细胞上清液中IL-6(3.41±0.34比6.22±0.58，t＝12.539，P<0.05)、IFN-γ(17.23±1.72比55.12±5.41，t＝20.023，P<0.05)和TNF-α(10.33±1.08比27.65±2.74，t＝17.642，P<0.05)含量显著低于IL-1β+si-NC组，细胞凋亡率(13.54±1.47比28.61±2.73，t＝11.678，P<0.05)低于IL-1β+si-NC组。miR-149-5p与WISP1直接结合。IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(5.84±0.58比2.71±0.26，q＝20.382，P<0.05)、IFN-γ(46.22±4.31比13.98±1.37，q＝27.042，P<0.05)和TNF-α(25.32±2.51比6.77±0.67，q＝29.011，P<0.05)含量高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组，细胞凋亡率(21.41±2.33比9.68±0.96，q＝17.964，P<0.05)高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组。结论芍药内酯苷通过调控miR-149-5p/WISP1通路对IL-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用。

简介：摘要目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组：正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组)；siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组); HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组)，用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1，各组给予相应干预措施，蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049，t＝3.046、3.873，P<0.05)，而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021，t＝6.115、7.062，P<0.05)；D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036，0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032，t＝6.335、3.289、5.861、4.688，P<0.05)，D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009，0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013，t＝15.910、20.150、7.736、3.553，P<0.05)；F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029，0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017，t＝10.950、14.000、6.433、7.606，P<0.05)，F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007，0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025，t＝8.472、4.233、4.304、8.488，P<0.05)；H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝11.830、4.829，P<0.05)，而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0.016比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝7.583、4.867，P<0.05)；I组Bmal1、SIRT1指标低于G组(0.484±0.018、0.183±0.015比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝5.115、7.189，P<0.05)，I组TGF-β1、p-Smad2指标高于G组(0.497±0.015、0.637±0.025比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝5.613、19.620，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标低于H组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.964±0.026、0.444±0.031，t＝13.600、7.660，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标高于H组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.235±0.022、0.213±0.016，t＝4.430、14.430，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标高于I组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.484±0.018、0.183±0.015，t＝3.351、4.358，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标低于I组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.497±0.015、0.637±0.025，t＝8.767、10.050，P<0.05)。结论时钟基因Bmal1通过调控SIRT1抑制TGF-β1/Smad2信号通路进而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后纤维化。

简介：摘要目的检测活化激酶C受体1(RACK1)在胆管癌细胞中的表达，探讨其对胆管癌细胞生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RACK1在人正常胆管上皮细胞HIBEC和2株胆管癌细胞RBE、HUH28中的表达水平。采用t检验分析RACK1细胞水平表达差异。慢病毒构建RACK1低表达稳定株，分为sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组和阴性对照组(NC-RACK1组)，qPCR检测其转染效率；Transwell实验检测胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。采用t检验分析敲低RACK1后胆管癌细胞的迁移和侵袭能力变化。结果qPCR结果显示RACK1在RBE、HUH28胆管癌细胞株中的表达量(3.45±0.92、3.21±0.33)明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC(1.43±0.58，t＝21.965、24.153，P<0.01)，差异均有统计学意义；Western blot结果表明RACK1在RBE和HUH28胆管癌细胞株中的表达水平明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC；Transwell迁移实验结果提示RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(261.89±8.65)、(231.07±9.73)个/视野]，明显低于NC-RACK1组[(430.19±10.15)个/视野，t＝30.684、24.380，P<0.01]，差异均有统计学意义；HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(253.57±7.28)、(210.11±6.09)个/视野]低于NC-RACK1组[(424.78±8.03)个/视野，t＝35.442、36.781，P<0.01]，差异均有统计学意义；侵袭实验结果表明RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(52.15±1.43)、(60.58±2.01)个/视野]明显低于NC-RACK1组[(125.39±4.03)个/视野，t＝9.935、12.566，P<0.05]，差异均有统计学意义；HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(60.91±1.30)、(51.19±0.96)个/视野]低于NC-RACK1组[(150.88±7.28)个/视野，t＝13.554、15.328，P<0.01]，差异均有统计学意义。结论RACK1在胆管癌细胞中表达上调，降低RACK1表达后可抑制胆管细胞迁移及侵袭能力，RACK1可促进胆管癌发生发展。

简介：摘要目的探讨类细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5 (CDKL5)基因新生变异致早发性婴儿癫痫性脑病2型(EIEE2)的临床特点、诊治现状和存在的问题。方法回顾性分析2019年8月12日就诊于南京医科大学附属儿童医院新生儿内科的1例CDKL5基因新生变异致EIEE2患儿的病史资料、辅助检查及诊治特点，并结合相关文献，总结该病的临床诊治思路和未来展望。结果患儿，女，年龄13 d 23 h，主要临床表现为反复抽搐，使用抗癫痫药物效果欠佳。二代基因测序检测发现患儿CDKL5基因存在c.119C>T/ p．A40V杂合变异，此变异为新发变异。结论CDKL5基因新生变异致EIEE2是值得被关注的罕见病，早期发现并进行基因诊断是提高诊治率的关键。

简介：摘要Ras-GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白1(Ras-GAP SH3 domain-binding protein，G3BP1)是RNA结合蛋白，通过调控mRNA稳定性和翻译来应对外界刺激，被认为是应激颗粒的成核因子之一。G3BP1在应激颗粒中的作用是目前研究的热点，但除此之外G3BP1在应激颗粒外与RNA的相互作用，调节基因表达的功能也不容忽视。G3BP1与肿瘤发生发展密切相关，包括肿瘤进展、侵袭和转移等。大量研究结果表明，G3BP1可能成为肿瘤治疗的新靶点。本文综述了G3BP1近年来在肿瘤生物学领域取得的重要进展，包括其在肿瘤进展、应激颗粒形成等方面的作用。

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简介：AbstractBackground:Emerging evidence indicates that the sineoculis homeobox homolog 1-eyes absent homolog 1 (SIX1-EYA1) transcriptional complex significantly contributes to the pathogenesis of multiple cancers by mediating the expression of genes involved in different biological processes, such as cell-cycle progression and metastasis. However, the roles of the SIX1-EYA1 transcriptional complex and its targets in colorectal cancer (CRC) are still being investigated. This study aimed to investigate the roles of SIX1-EYA1 in the pathogenesis of CRC, to screen inhibitors disrupting the SIX1-EYA1 interaction and to evaluate the efficiency of small molecules in the inhibition of CRC cell growth.Methods:Real-time quantitative polymerase chain reaction and western blotting were performed to examine gene and protein levels in CRC cells and clinical tissues (collected from CRC patients who underwent surgery in the Department of Integrated Traditional and Western Medicine, West China Hospital of Sichuan University, between 2016 and 2018, n = 24). In vivo immunoprecipitation and in vitro pulldown assays were carried out to determine SIX1-EYA1 interaction. Cell proliferation, cell survival, and cell invasion were determined using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, clonogenic assay, and Boyden chamber assay, respectively. The Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay Screen (AlphaScreen) method was used to obtain small molecules that specifically disrupted SIX1-EYA1 interaction. CRC cells harboring different levels of SIX1/EYA1 were injected into nude mice to establish tumor xenografts, and small molecules were also injected into mice to evaluate their efficiency to inhibit tumor growth.Results:Both SIX1 and EYA1 were overexpressed in CRC cancerous tissues (for SIX1, 7.47 ± 3.54 vs.1.88 ± 0.35, t = 4.92, P = 0.008; for EYA1, 7.61 ± 2.03 vs. 2.22 ± 0.45, t = 6.73, P = 0.005). The SIX1/EYA1 complex could mediate the expression of two important genes including cyclin A1 (CCNA1) and transforming growth factor beta 1 (TGFB1) by binding to the myocyte enhancer factor 3 consensus. Knockdown of both SIX1 and EYA1 could decrease cell proliferation, cell invasion, tumor growth, and in vivo tumor growth (all P < 0.01). Two small molecules, NSC0191 and NSC0933, were obtained using AlphaScreen and they could significantly inhibit the SIX1-EYA1 interaction with a half-maximal inhibitory concentration (IC50) of 12.60 ± 1.15 μmol/L and 83.43 ± 7.24 μmol/L, respectively. Administration of these two compounds could significantly repress the expression of CCNA1 and TGFB1 and inhibit the growth of CRC cells in vitro and in vivo.Conclusions:Overexpression of the SIX1/EYA1 complex transactivated the expression of CCNA1 and TGFB1, causing the pathogenesis of CRC. Pharmacological inhibition of the SIX1-EYA1 interaction with NSC0191 and NSC0933 significantly inhibited CRC cell growth by affecting cell-cycle progression and metastasis.

简介：摘要帕金森病(PD)是世界上第二常见的神经退行性疾病，它的发病机制与线粒体功能障碍、氧化应激反应以及钙稳态失衡有关。近年来，PD与Ca2+的关系成为研究热点，钙稳态失衡可通过不同的途径导致PD。细胞内Ca2+水平取决于钙库操纵性钙内流(SOCE)，而SOCE由钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)、基质相互作用分子1(STIM1)及瞬时受体电位通道1(TRPC1)相互作用组成的功能复合体调节。常见的PD神经毒素可通过降低Orai1-STIM1-TRPC1复合体功能，损伤SOCE及其下游的信号通路选择性损伤多巴胺能神经元，并且Orai1-STIM1-TRPC1复合体可能通过作用于小胶质细胞以及内质网调控神经炎症、自噬现象以影响PD的发生发展。因此恢复Orai1-STIM1-TRPC1复合体表达及功能，维持钙稳态可能成为PD的有效治疗靶点。