简介:摘要目的分析静止和循环张应力条件下大鼠髁突软骨细胞(mandibular condylar chondrocytes,MCC)外泌体显著差异微RNA(microRNA,miRNA)的表达谱并探究张应力调节髁突软骨内成骨的作用机制。方法分别选择5只2周龄雄性SD大鼠(共10只)在静止和循环张应力条件下培养大鼠MCC,提取细胞外泌体,两组外泌体分别命名为对照组和实验组。采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪、纳米颗粒追踪分析等方法观察并鉴定,通过高通量测序筛选表达显著差异的miRNA,采用TargetScan、miRanda网站进行生物信息学分析及成骨相关靶基因预测。结果实验组大鼠MCC外泌体均呈“双凹圆盘状”单层膜结构,CD9、CD81表达阳性,粒径分布符合外泌体特征,与对照组大鼠MCC外泌体一致。高通量测序筛选表达显著差异的miRNA共85个(P<0.05)。差异miRNA主要参与的生物学过程与分子功能分别为生物学过程和蛋白质结合;京都基因与基因组数据库通路富集分析显示在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路有显著富集(P<0.05)。其中miR-199a-5p的候选靶基因有骨形态发生蛋白3(bone morphogenetic protein 3,BMP3)、内皮素转换酶-1,miR-186-5p可靶向Smad8、BMP3,以发挥成骨相关功能。结论相比于静止状态,CTS刺激能改变大鼠MCC外泌体中miR-199a-5p、miR-186-5p等miRNA的表达量,可考虑作为调节外泌体应用潜能的一种手段。
简介:摘要目的研究微RNA-126(microRNA-126,miR-126)对高糖环境中人单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cell,THP-1)源性巨噬细胞增殖的影响,探讨miR-126在伴糖尿病牙周炎中的调节作用。方法体外培养THP-1细胞,低糖环境下(糖浓度5.5 mmol/L)以5 μg/L佛波酯作用48 h诱导THP-1分化为巨噬细胞;分别用低糖、中糖(糖浓度15 mmol/L)和高糖(糖浓度25 mmol/L)培养液培养THP-1源性巨噬细胞,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的增殖情况,通过实时荧光定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测miR-126及增殖相关基因的表达;miR-126模拟物或抑制剂转染细胞72 h后,CCK-8法检测细胞增殖变化,qRT-PCR检测miR-126及增殖相关基因表达的变化。结果糖浓度升高可使THP-1源性巨噬细胞增殖能力显著降低(7 d时低、中、高糖组细胞A值分别为0.369±0.014、0.214±0.009和0.200±0.010,P<0.01),细胞存活率显著下降(P<0.05),并引起细胞中miR-126、B细胞淋巴瘤-2基因(B-cell lymophoma-2,Bcl-2)相关性X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,BAX)、天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达显著升高(P<0.05),Bcl-2、醇磷脂-3激酶调节亚单位2(phosphoinositol-3 kinase regulatory subunit 2,PIK3R2)表达显著降低(P<0.05)。miR-126模拟物转染低糖培养的细胞72 h后,与阴性对照组(1.005±0.118)相比,低糖-模拟物组miR-126表达(2 980.227±170.431)显著升高(P<0.05),并伴随THP-1源性巨噬细胞的增殖能力下降(阴性对照组:1.816±0.013,模拟物组:1.310±0.048,P<0.01),增殖抑制因子BAX、caspase-3的表达显著升高(P<0.01,P<0.05),增殖促进因子PIK3R2、Bcl-2的表达显著降低(P<0.05,P<0.01);miR-126抑制剂转染高糖培养的细胞72 h后,与阴性对照组相比(0.723±0.133),高糖-抑制剂组THP-1源性巨噬细胞的增殖能力显著增强(0.984±0.049)(P<0.05),增殖抑制因子BAX、caspase-3表达显著降低(P<0.01,P<0.05),增殖促进因子PIK3R2、Bcl-2表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论高糖可抑制THP-1源性巨噬细胞的增殖,促进细胞内miR-126表达;miR-126通过上调增殖抑制因子BAX、caspase-3的表达,下调增殖促进因子PIK3R2、Bcl-2的表达,介导高糖对THP-1源性巨噬细胞增殖的抑制作用。
简介:摘要目的探讨微RNA(miR)-19b-3p对胰腺癌PANC-1细胞原癌基因鼠双微体4(MDM4)表达和细胞增殖、凋亡活性的影响。方法采用脂质体转染法转染micrONrno-miR-19b-3p mimic(拟似组)、micrOFF mmu-miR-19b-3p inhibitor(阻遏组)和Lipofectamine 2000转染试剂(阴性组)至人胰腺癌PANC-1细胞,并以未特殊处理正常生长的PANC-1细胞作为空白组,采用荧光显微镜观察各组细胞转染是否成功,使用荧光实时定量PCR法检测微RNA-19b-3p转录水平以判断转染效率。转染24、48、72 h采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用荧光实时定量PCR法检测细胞内微RNA-19b-3p、MDM4含量,转染72 h采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后PANC-1细胞凋亡情况。转染72 h采用免疫印迹法检测各组PANC-1细胞MDM4蛋白表达水平。结果转染后48 h 4组均有明显绿色荧光,微RNA-19b-3p转染PANC-1细胞转染效率为72.1%。转染24、48、72 h时拟似组PANC-1细胞增殖活性、微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平都高于空白组、阴性组和阻遏组(均P<0.05),阻遏组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平低于空白组、阴性组和拟似组(均P<0.05),空白组和阴性组细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。空白组、阴性组、拟似组和阻遏组4组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达均与时间呈现正相关(细胞增殖活性r=0.629、0.582、0.524、0.472,微RNA-19b-3p mRNA表达水平r=0.449、0.475、0.501、0.399,FL-MDM4表达水平r=0.504、0.423、0.447、0.431,S-MDM4表达水平r=0.472、0.428、0.414、0.408,均P<0.05)。转染72 h时拟似组细胞凋亡水平低于空白组、阴性组、阻遏组[(2.02±0.48)%比(3.48±0.63)%、(3.52±0.52)%、(8.23±0.82)%,均P<0.05],阻遏组细胞凋亡水平高于空白组、阴性组和拟似组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染72 h拟似组MDM4蛋白表达水平高于空白组、阴性组和阻遏组[(1.162±0.114)比(0.749±0.126)、(0.663±0.137)、(0.347±0.092),均P<0.05],阻遏组MDM4蛋白表达水平低于空白组和阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论微RNA-19b-3p可能通过影响MDM4表达,进而影响p53基因活性,促进胰腺癌的增殖,微RNA-19b-3p可能成为治疗胰腺癌新的靶点。
简介:摘要探讨长链非编码RNA(lncRNA)DSCAM-AS1对子宫内膜癌(EC)发生发展的影响和机制。研究发现与癌旁组织比较,EC组织中DSCAM-AS1表达升高,微RNA-299-3p(miR-299-3p)表达降低,且EC组织中DSCAM-AS1和miR-299-3p的表达呈负相关。DSCAM-AS1在Ishikawa细胞中负调控miR-299-3p表达。干扰DSCAM-AS1后,Ishikawa细胞OD值、克隆形成数、迁移和侵袭数降低;而干扰miR-299-3p降低了干扰DSCAM-AS1对Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。DSCAM-AS1可能通过竞争性结合miR-299-3p促进EC细胞增殖、迁移和侵袭。
简介:摘要目的探讨ZEB1-AS1对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞损伤的影响和可能机制。方法体外培养人牙周膜细胞,分为对照组(Con组)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-ZEB1-AS1组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-297组、LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组和LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-297组,RT-PCR法检测细胞中ZEB1-AS1和miR-297表达水平,酶联免疫吸附法检测TNF-α和IL-1β表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZEB1-AS1和miR-297调控关系。结果与Con组比较,LPS组ZEB1-AS1(3.65±0.24比1.00±0.07)、TNF-α[(8.87±0.73)ng/ml比(3.26±0.31)ng/ml]和IL-1β[(6.06±0.47)ng/ml比(1.96±0.14)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(23.58±2.04)%比(7.69±0.45)%]和Bax蛋白水平(0.78±0.05比0.30±0.02)均升高(P<0.05),miR-297(0.49±0.05比1.00±0.05)和Bcl-2蛋白水平(0.21±0.02比0.63±0.04)均降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-ZEB1-AS1组TNF-α[(5.05±0.41)ng/ml比(8.95±0.58)ng/ml]和IL-1β[(3.35±0.27)ng/ml比(6.11±0.57)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(11.53±1.07)%比(24.08±2.33)%]和Bax蛋白水平(0.39±0.04比0.79±0.07)降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(0.56±0.04比0.20±0.02,P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-297组TNF-α[(6.11±0.56)ng/ml比(9.14±0.62)ng/ml]和IL-1β[(3.93±0.27)ng/ml比(6.53±0.32)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(14.04±1.05)%比(25.45±2.34)%]和Bax蛋白水平(0.43±0.03比0.80±0.05)降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(0.52±0.05比0.19±0.02,P<0.05)。ZEB1-AS1在人牙周膜细胞中负调控miR-297表达。与LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较,LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-297组TNF-α[(7.56±0.54)ng/ml比(4.94±0.35)ng/ml]和IL-1β[(5.25±0.32)ng/ml比(3.04±0.23)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(19.92±1.05)%比(10.64±1.02)%]和Bax蛋白水平(0.67±0.04比0.39±0.03)升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(0.30±0.02比0.58±0.04,P<0.05)。结论下调ZEB1-AS1可能通过靶向负调控miR-297降低LPS诱导的人牙周膜细胞炎症反应和凋亡,减轻细胞损伤。
简介:目的了解循环微RNA(miR)-92a在老年稳定性心绞痛(SAP)患者中的表达。方法选择sAP患者116例,分为老年组(年龄≥60岁)66例,非老年组(年龄〈60岁)50例。比较老年SAP患者循环miR-92a表达,方差成分分析2组患者一般临床资料及其交互效应项对SAP患者循环miR-92a表达的贡献。比较2组合并及禾合并糖尿病患者循环miR-92a表达。结果sAP患者年龄与循环miR-92a表达呈正相关(相关系数0.217,P〈0.05)。老年组循环miR-92a表达明显高于非老年组(P=0.056)。方差成分分析显示,年龄、糖尿病影响sAP循环miR92a表达。老年组合并糖尿患者循环miR-92a表达明显高于未合并糖尿病患者(P〈0.01),非老年组合并糖尿病患者循环miR-92a表达明显高于表合并糖尿病患者(P〈O.05)。老年组合并糖尿病发生率33.3%明显高于非老年组16.0%(P〈0.05)。结论老年患者循环miR-92a表达升高不是年龄升高所致。提示老年SAP患者循环miR-92a表达升高要特别注意引发血管内皮损伤的糖尿病。
简介:AbstractGastric cancer (GC) is a common malignancy and is the third leading cause of cancer-related death. At present, there is no simple and effective screening method for early-stage GC, and the treatment results and prognosis are poor. With the continuous improvement of molecular biology techniques, research on circular RNA (circRNA) has gradually expanded over time. Much data supports the role of circRNA in tumorigenesis. Moreover, due to its structural specificity and biological stability, circRNA is anticipated to be a potential biomarker for tumor diagnosis. Studies have confirmed that circRNA can participate in the proliferation, invasion, metastasis, and apoptosis of GC. These findings will lead to novel directions for the diagnosis and treatment of GC. This article reviews the structure and function of circRNA, summarizes the current studies on circRNA, and discusses the potential diagnostic value of circRNA in GC.
简介:摘要目的观察肝细胞癌患者血清中微小RNA(miRNA,miR)-432、微小RNA-432(miR-30b)及微小RNA-432(miR-764)水平。方法选取安徽医科大学第三附属医院2015年1月30日至2018年1月30日收治的150例肝细胞癌患者,同时选取150例年龄匹配的体检结果健康者作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测研究对象外周血中miR-432、miR-30b及miR-764表达水平。观察miR-432、miR-30b及miR-764与肝细胞癌患者临床病理因素的相关性,并对肝细胞癌患者进行随访,观察miR-432、miR-30b及miR-764与患者总生存期(OS)的相关性。采用独立样本t检验及Log-rank检验。结果肝细胞癌患者外周血中miR-432(2.11±0.71)、miR-30b(1.88±0.68)及miR-764(1.90±0.65)水平均较对照组高(1.12±0.40、1.01±0.38、0.99±0.35,t=4.879、13.679、15.097,P<0.01)。miR-432、miR-764表达量与肝细胞癌TNM分期有相关(P<0.05),miR-30b与肝细胞癌TNM分期及分化程度有相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法及Log-rank检验显示,miR-432、miR-30b及miR-764表达量升高组OS短于降低组(Log-rank χ2=16.433、10.575、7.998,P<0.05)。Cox多因素分析均显示,TNM分期、miR-432、miR-30b、miR-764、肿瘤分化程度是肝细胞癌OS的独立影响因素[比值比(OR)=2.904、2.135、1.651、1.496、1.205,P<0.05]。结论肝细胞癌患者循环中miR-432、miR-30b及miR-764表达上调,且与患者总生存率降低密切相关。
简介:摘要探讨miRNA-145通过靶向人性别决定区Y框蛋白9(SOX9)-乙醛脱氢酶(ALDH)信号途径调节胃癌细胞对化学治疗敏感性的作用机制,为临床上肿瘤疾病的治疗提供理论依据。选取60例胃癌住院患者的临床组织标本,以及人正常胃上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系HGC27、BGC823、SGC7901,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测miRNA-145和SOX9在胃癌组织和细胞中的表达情况,MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡情况,采用小鼠移植瘤模型观察miRNA-145对胃癌化学治疗敏感性的影响。结果发现miRNA-145在胃癌组织和细胞中表达下调,且其过表达能够抑制胃癌细胞生长和细胞凋亡,miRNA-145的过表达可能通过靶向SOX9-ALDH途径调节胃癌细胞对顺铂的敏感性。
简介:AbstractThe present pandemic has posed a crisis to the economy of the world and the health sector. Therefore, the race to expand research to understand some good molecular targets for vaccine and therapeutic development for SARS-CoV-2 is inevitable. The newly discovered coronavirus 2019 (COVID-19) is a positive sense, single-stranded RNA, and enveloped virus, assigned to the beta CoV genus. The virus (SARS-CoV-2) is more infectious than the previously detected coronaviruses (MERS and SARS). Findings from many studies have revealed that S protein and RdRp are good targets for drug repositioning, novel therapeutic development (antibodies and small molecule drugs), and vaccine discovery. Therapeutics such as chloroquine, convalescent plasma, monoclonal antibodies, spike binding peptides, and small molecules could alter the ability of S protein to bind to the ACE-2 receptor, and drugs such as remdesivir (targeting SARS-CoV-2 RdRp), favipir, and emetine could prevent SASR-CoV-2 RNA synthesis. The novel vaccines such as mRNA1273 (Moderna), 3LNP-mRNAs (Pfizer/BioNTech), and ChAdOx1-S (University of Oxford/Astra Zeneca) targeting S protein have proven to be effective in combating the present pandemic. Further exploration of the potential of S protein and RdRp is crucial in fighting the present pandemic.
简介:摘要目的探讨微RNA(miRNA)-129-1在结肠癌中的表达、调控、潜在作用机制和临床意义。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中结肠癌的甲基化、mRNA表达和miRNA表达数据,分析miRNA-129-1表达和甲基化的变化。利用miRwalk 2.0和TargetScan数据库联合预测miRNA-129-1靶基因,采用DAVID 6.7在线软件对靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析,利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,并再次利用TCGA数据库对miRNA-129-1的关键靶基因进行表达差异分析和预后分析。统计学方法采用配对t检验、独立样本t检验,通过受试者操作特征曲线(ROC)评估miRNA-129-1甲基化对结肠癌的诊断价值,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验分析miRNA-129-1表达对患者生存的影响。结果miRNA-129-1在各物种之间序列保守。对TCGA数据库所有结肠癌肿瘤样本和对照样本进行分析,结果显示肿瘤样本中miRNA-129-1的表达与对照样本比较降低(0.98±0.81比5.74±0.59),cg04524088、cg04840800、cg11364290、cg20734982、cg24044186位点的甲基化水平与对照样本比较均降低(0.321±0.130比0.563±0.051、0.432±0.123比0.624±0.064、0.475±0.153比0.768±0.033、0.659±0.180比0.816±0.037、0.862±0.096比0.916±0.019),差异均有统计学意义(t=14.95、11.36、9.39、11.74、5.32、3.47,P均<0.01)。ROC分析结果显示,miRNA-129-1上述5个位点的甲基化水平对结肠癌有较高的诊断效能[曲线下面积分别为0.946、0.915、0.950、0.758、0.667,P均<0.01]。生存分析结果显示,miRNA-129-1低表达与不良预后有关(风险比为0.55,P=0.018)。生物信息学分析发现miRNA-129-1的靶基因显著富集于丝氨酸/苏氨酸激酶受体、丝裂原活化蛋白激酶等与肿瘤密切相关的功能基因簇,其靶基因编码蛋白质之间存在复杂的相互作用网络。miRNA-129-1的潜在关键靶基因肝配蛋白B型受体2(EPHB2)基因高表达与总生存期和无病生存期短有关(风险比分别为1.9和1.6,P均<0.01)。结论miRNA-129-1的表达和甲基化在结肠癌的发生、发展中起着重要调控作用,miRNA-129-1甲基化在结肠癌诊断中具有潜在价值,miRNA-129-1是结肠癌患者预后的影响因素。EPHB2可能是miRNA-129-1的潜在关键靶基因。