简介:摘要目的构建人细小病毒B19中国株结构蛋白VP1基因片段的重组表达载体,获得大量表达的VP1蛋白.方法从我科保存的人细小病毒B19中国株结构蛋白VP1基因片段的重组克隆载体中获得VP1基因片段,将该片段亚克隆入表达载体pRSETA,构建VP1-pRSETA表达载体,并转化至感受态大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导使蛋白表达,在不同表达时间收获细菌,给予不同诱导剂浓度及在不同温度下进行诱导表达,利用蛋白电泳检测VP1蛋白表达情况;超声裂解诱导表达的细菌,收集上清和沉淀进行蛋白电泳,分析表达蛋白的溶解性.结果成功构建了融合蛋白VP1-pRSETA的重组表达质粒,表达的融合蛋白经15%SDS-PAGE电泳证实大小为2.2kd结论获得人细小病毒B19中国株结构蛋白VP1基因片段的原核表达载体及其产物,对进一步研究其纯化及制备单克隆抗体和疫苗有重要意义.关键词人细小病毒B19;VP1基因片断;载体构建;诱导表达中图分类号R457文献标识码B文章编号1001-5302(2015)09-0888-01
简介:目的检测急性脑梗死患者CD19^+-CD25^+、CD19^+-CD25^-B淋巴细胞、免疫球蛋白和补体C3的含量并探讨其临床意义。方法根据病史及头颅CT或MRI明确疾病诊断。抽取69例急性脑梗死、115例脑出血患者、41例正常对照者静脉血各4mL,采用流式细胞仪检测CD19^+-CD25^+、CD19^+-CD25^-B淋巴细胞百分比,采用散射比浊法检测免疫球蛋白和补体C3含量,并结合不同的病程、不同影像学评分和不同的神经功能评分进行分析比较。结果脑梗死和脑出血急性期CD19^+-CD25^+、CD19^+-CD25^-B淋巴细胞、免疫球蛋白和补体C,的差异无统计学意义(P均〉0.05)。脑梗死急性期CD19^+-CD25^+B淋巴细胞百分比、IgG、补体C3含量均较恢复期及对照组显著增高(P均〈0.05)。脑梗死恢复期各项体液免疫指标与对照组之间差异无统计学意义(P均〉0.05)。不同影像学评分患者之间CD19^+-CD25^+、CD19^+-CD25^-B淋巴细胞百分比差异有统计学意义(P均〈0.05)。脑梗死急性期神经功能评分与各体液免疫指标间无相关(P均〉0.05)。结论脑梗死与脑出血存在着同样的体液免疫功能改变。这种改变可能与应激、病变部位及病变范围有关。脑梗死病灶越大,体液免疫改变越明显;随着应激的消逝,体液免疫功能逐渐恢复。
简介:摘要目的探讨COVID-19患者T淋巴细胞的动态变化。方法收集2020年1—2月在北海市人民医院感染性疾病科确诊为COVID-19的40例患者和同期40名健康体检者(健康对照组)的抗凝血,流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T淋巴细胞亚群计数。同时检测24例连续2次核酸检测阴性达到出院标准的恢复期患者CD4+T和CD8+T淋巴细胞亚群计数。结果与健康对照组比,急性期COVID-19患者的白细胞及淋巴细胞计数均显著降低[(4.71±1.54)×109个/L vs (6.26±1.44)×109个/L,(1.13±0.41)×109个/L vs (1.51±0.39)×109个/L;P均<0.05];CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量均显著减少[(447.15±144.42)个/μl vs (592.83±146.76)个/μl,(309.35±173.05)个/μl vs (397.20±136.94)个/μl;P均<0.05],而CD4+/CD8+ T细胞比例与健康对照组比差异无统计学意义(P>0.05)。24例出院患者恢复期的CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量较急性期显著升高[(598.08±138.71)个/μl vs (420.67±147.38)个/μl,(439.08±166.94)个/μl vs (296.67±151.06)个/μl;P均<0.05],与健康对照组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性期COVID-19患者的免疫功能出现一过性免疫缺陷,在恢复期可升高至正常水平。
简介:摘要目的回顾性分析武汉市第三医院收治的重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血液白细胞计数(WBC)、淋巴细胞计数(LYM)、淋巴细胞%(LYM%)、血清免疫球蛋白(IGA、IGG、IGM)以及补体(C3、C4)等指标水平,探讨其与COVID-19重症患者转归的相关性并评价其预测价值。方法随机筛选武汉市第三医院确诊的85例COVID-19重症患者,分为转归良好组(50例)和转归不良组(35例),统计分析比较两组入院早期的WBC、LYM、LYM%、IGA、IGG、IGM以及C3、C4水平、组间的差异、各指标的相关性、以及单检和联检时的ROC曲线,判断各指标和转归的关系以及对转归的预测效能。结果两组间WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA水平差异均有统计学意义(P=0.000,0.015,0.000,0.000,0.001),其中LYM、LYM%呈显著正相关(r=0.669,P=0.000),而WBC与LYM%水平呈显著负相关(r=-0.600,P=0.000),WBC与IGA水平之间呈显著正相关(r=0.283,P=0.009)且IGG与IGA水平亦呈显著正相关(r=0.0.442,P=0.000);Logistic回归分析后,WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA均是转归的重要影响因素(P=0.001,0.022,0.000,0.000,0.003);但只有WBC、IGG和LYM%水平是转归不良的独立风险因素(P=0.034,0.004,0.001),对其预测转归效能分别作单检及联检ROC曲线,同时联检WBC、LYM%、IGG时AUC最大(AUC=0.890,P=0.000),约登指数YI=0.657时,对于不良转归有最大的预测效能,灵敏度为77.10%和特异度为88.00%。其它指标IGM、C3、C4、IGG/IGM、C3/C4水平的差异无统计学意义(P=0.066,0.204,0.076,0.310,0.156)。结论COVID-19重症患者入院早期的WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA水平对COVID-19重症肺炎转归有重要预测价值,WBC、LYM%和IGG水平是不良转归的独立风险因子,联检三者对转归预测效能最佳。
简介:摘要目的分析复发/难治性急性B淋巴细胞白血病(R/R B-ALL)自体CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)制备过程中,培养体系中残留白血病细胞导致CD19 CAR转入白血病细胞的特征和体外杀伤研究。方法①收集30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者及6例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC);②流式细胞术分析R/R B-ALL患者PBMC经CD3磁珠分选后及体外培养过程中体系白血病细胞残留情况;③患者及健康志愿者PBMC CD3+ T细胞转染CD19 CAR及CD22 CAR慢病毒,制备CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞;④复苏Nalm-6细胞株,CD19 CAR慢病毒转染Nalm-6细胞,制备CD19 CAR-Nalm-6细胞,同时转染患者原代ALL细胞;⑤流式细胞术检测转染率;⑥CCK-8法检测细胞增殖;⑦乳酸脱氢酶(LDH)法检测CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞对Nalm-6细胞及CD19 CAR-Nalm-6细胞杀伤活性。结果①30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者中,2例CD3+ T细胞中发现3.32%、2.04%的白血病细胞残留,随体外培养时间延长,在培养第4天,白血病细胞完全消失。②体外培养中CD19 CAR-Nalm-6细胞增殖率高于Nalm-6细胞。③效靶比为1∶1且共培养24、48、72 h,CD19 CAR-T细胞对Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-Nalm-6细胞;与CD19 CAR-T细胞相比,CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性更高。④相同效靶比情况,单独应用CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-T联合CD22 CAR-T细胞。结论CD19 CAR-T细胞制备过程中培养体系残留白血病细胞可能会导致CD19 CAR被引入白血病细胞中而导致CD19 CAR-T细胞治疗失败,在细胞制备过程中需要检测培养体系中白血病细胞的残留情况。CD22 CAR-T细胞治疗可作为上述情况的挽救治疗措施之一。
简介:摘要目的分析复发/难治性急性B淋巴细胞白血病(R/R B-ALL)自体CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)制备过程中,培养体系中残留白血病细胞导致CD19 CAR转入白血病细胞的特征和体外杀伤研究。方法①收集30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者及6例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC);②流式细胞术分析R/R B-ALL患者PBMC经CD3磁珠分选后及体外培养过程中体系白血病细胞残留情况;③患者及健康志愿者PBMC CD3+ T细胞转染CD19 CAR及CD22 CAR慢病毒,制备CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞;④复苏Nalm-6细胞株,CD19 CAR慢病毒转染Nalm-6细胞,制备CD19 CAR-Nalm-6细胞,同时转染患者原代ALL细胞;⑤流式细胞术检测转染率;⑥CCK-8法检测细胞增殖;⑦乳酸脱氢酶(LDH)法检测CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞对Nalm-6细胞及CD19 CAR-Nalm-6细胞杀伤活性。结果①30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者中,2例CD3+ T细胞中发现3.32%、2.04%的白血病细胞残留,随体外培养时间延长,在培养第4天,白血病细胞完全消失。②体外培养中CD19 CAR-Nalm-6细胞增殖率高于Nalm-6细胞。③效靶比为1∶1且共培养24、48、72 h,CD19 CAR-T细胞对Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-Nalm-6细胞;与CD19 CAR-T细胞相比,CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性更高。④相同效靶比情况,单独应用CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-T联合CD22 CAR-T细胞。结论CD19 CAR-T细胞制备过程中培养体系残留白血病细胞可能会导致CD19 CAR被引入白血病细胞中而导致CD19 CAR-T细胞治疗失败,在细胞制备过程中需要检测培养体系中白血病细胞的残留情况。CD22 CAR-T细胞治疗可作为上述情况的挽救治疗措施之一。
简介:摘要:目的 探究抗CD19CAR-T细胞治疗难治复发B细胞肿瘤患者的效果。方法 选择2020年9月-2021年9月在本院收治的10例患者为研究对象。对于抗CD19CAR-T细胞治疗的效果观察。结果 在10例患者中,6例存活,4例死亡。对于患者产生的相关不良反应,都在治疗后得到痊愈。结论 在难治复发B细胞血液系统肿瘤的治疗中,以抗CD19CAR-T细胞进行治疗,可发挥一定作用,也能够实现对不良反应的控制。