简介:摘要目的观察椎基底动脉延长扩张症(VBD)大鼠血管中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和巨噬细胞标志物MAC387表达的变化,探讨瑞舒伐他汀对VBD的治疗作用及机制。方法将60只SD大鼠按随机数字法机分为3组:假手术组、VBD模型组和瑞舒伐他汀干预组,每组20只。后2组大鼠通过枕大池注入0.3 μL(1.5 U/μL)弹性蛋白酶以制备VBD模型,假手术组大鼠注入等量生理盐水。造模后24 h瑞舒伐他汀干预组大鼠给予5 mg/kg瑞舒伐他汀灌胃,1次/d,连续4周,其余2组大鼠每天给予等量蒸馏水灌胃。测量并比较各组大鼠的椎基底动脉弯曲扩张程度,采用Western blotting和免疫荧光染色分别检测椎基底动脉中JNK、MMP-9和MAC387的表达。结果瑞舒伐他汀干预组、VBD模型组均有14只大鼠造模成功。与假手术组比较,VBD模型组、瑞舒伐他汀干预组大鼠的基底动脉直径增加,基底动脉迂曲指数增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,VBD模型组、瑞舒伐他汀干预组大鼠椎基底动脉中JNK、MMP-9、MAC387的表达均增多,差异均有统计学意义(P<0.05);与VBD模型组相比,瑞舒伐他汀干预组大鼠椎基底动脉中JNK、MMP-9、MAC387的表达均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可延缓VBD的进展,其机制可能与抑制炎症反应有关。
简介:摘要目的探讨OX40L作为H7N9全病毒灭活疫苗(whole-virion inactivated vaccine,WIV)免疫佐剂的保护效果。方法将50只BALB/c小鼠随机分为5组进行肌肉免疫:未免疫组(对照组)、单独疫苗组(1.5 μg WIV)、佐剂疫苗组(1.5 μg WIV+0.6/1.8/3.0 μg OX40L/Fc)。免疫后21 d,通过ELISA和血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验检测免疫小鼠血清中各类抗体水平,并使用50×半数致死量(median lethal dose,LD50)的H7N9流感病毒适应株攻击小鼠,记录小鼠体重变化及存活率,以评价OX40L/Fc与H7N9 WIV共免疫后的保护效果。免疫后7 d,通过流式细胞术探究OX40L佐剂效应的机制。结果与单独疫苗组相比较,共免疫OX40L/Fc可使小鼠血清中的特异性IgG抗体水平显著升高,3组佐剂疫苗组(1.5 μg WIV+0.6/1.8/3.0 μg OX40L/Fc)的抗体几何平均滴度(lgGMT)分别为3.79、4.40和4.20。共免疫显著增加了IgG1和IgG2a抗体的滴度,但对Th1/Th2免疫应答平衡没有显著影响。与单独疫苗组相比较,共免疫1.8 μg和3.0 μg OX40L/Fc小鼠的HI抗体水平分别为6.25±0.50和5.70±0.97,差异有统计学意义(P<0.05)。共免疫1.8 μg和3.0 μg OX40L/Fc能够有效保护80%和75%的小鼠抵抗致死剂量病毒的攻击,损失的体重少于单独疫苗组,1.8 μg OX40L/Fc为最佳浓度。流式细胞术显示,与单独疫苗组相比,OX40L(0.6/1.8/3.0 μg)能够促进趋化因子受体CXCR5和程序性细胞死亡蛋白PD-1高效表达,增强H7N9 WIV免疫后淋巴结中滤泡辅助性T(Tfh)细胞的增殖(P均<0.05)。结论OX40L能够通过增殖Tfh细胞以增强H7N9 WIV诱导的抗体反应。
简介:摘要目的探讨磷酸化叉头框O4型(phosphorylated forkhead box subtype O4, p-FoxO4)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤过程中的作用。方法H9c2细胞正常培养24 h后,均匀接种于6孔板中,密度为4.5×105个/ml,每组≥3次重复,按照随机数字表法分为4组:对照组(Control组)、缺氧1 h复氧1 h组(H1R1组)、缺氧1 h复氧3 h组(H1R3组)和缺氧1 h复氧6 h组(H1R6组)。采用细胞增殖-毒性检测法检测4组细胞相对存活率;实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR)法检测叉头框O4型(forkhead box subtype O4, FoxO4)、Bcl-2细胞死亡的相互作用介质(Bcl-2 interacting mediator of cell death, Bim)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-Associated X, Bax)的mRNA含量,以此确定最佳H/R时间点。Control组与H1R1组分别通过Hoechst染色检测细胞凋亡程度,Western blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax蛋白含量。将6~8周C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组(每组3只):假手术组(sham组)、缺血30 min再灌注3 h组(R3组)、缺血30 min再灌注6 h组(R6组)、缺血30 min再灌注12 h组(R12组)、缺血30 min再灌注24 h组(R24组)。采用qPCR法检测结扎小鼠左前降支后导致缺血的左心室前壁的FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量。结果与Control组比较,H1R1组、H1R3组和H1R6组细胞相对生存率下降,H1R1组最低(P<0.05);与H1R1组比较,H1R3组和H1R6组细胞相对存活率升高(P<0.05);与H1R3组比较,H1R6组细胞相对存活率升高(P<0.05)。与Control比较,H1R1组、H1R3组、H1R6组FoxO4 mRNA表达增加(P<0.05),H1R1组Bim mRNA表达增加(P<0.05),H1R1组Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.05),H1R1组Bax mRNA表达增加(P<0.05),H1R3组、H1R6组Bax mRNA表达减少(P<0.05);与H1R1组比较,H1R3组、H1R6组Bim mRNA表达和Bax mRNA表达降低(P<0.05)。与Sham组比较,R12组、R24组FoxO4 mRNA含量增加(P<0.05),R6组Bim mRNA减少(P<0.05),R24组Bim mRNA含量增加(P<0.05),R3组、R12组、R24组Bcl-2 mRNA含量减少(P<0.05);R6组和R24组Bax mRNA含量增加(P<0.05);与R3组比较,R12组和R24组FoxO4 mRNA含量增加(P<0.05),R12组和R24组Bim mRNA含量增加(P<0.05),R6组、R12组和R24组Bax mRNA含量增加(P<0.05)。与R6组比较,R12组和R24组FoxO4 mRNA含量及Bim mRNA含量增加(P<0.05);与R12组比较,R24组FoxO4 mRNA、Bim mRNA、Bax mRNA含量增加(P<0.05)。与Control组比较,H1R1组出现较多核固缩、高亮的凋亡细胞,凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。与Control组比较,H1R1组FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bax蛋白含量增高,Bcl-2蛋白含量降低(P<0.05)。结论p-FoxO4可能通过调控细胞凋亡内在途径参与H9c2心肌细胞的H/R损伤。
简介:摘要目的分析中国9个长寿地区65岁及以上人群中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与抑郁风险的关联。方法研究对象来自2017—2018年在我国9个长寿地区开展的“老年健康生物标志物队列研究”,最终将2 018名中性粒细胞计数、淋巴细胞计数和抑郁状态数据完整的65岁及以上人群纳入研究。通过问卷调查和体格检测,收集调查对象的人口学特征、行为生活方式、健康状况等信息;同时收集调查对象的空腹静脉血以检测淋巴细胞、中性粒细胞等水平。根据调查对象NLR的四分位数将对象分为Q1、Q2、Q3、Q4四组,采用logistic回归模型分析NLR与抑郁症状的关联。结果2 018名调查对象年龄为(82.60±10.73)岁,其中男性1 032名(51.14%),抑郁症状检出率19.33%(390名)。多因素logistic回归模型分析结果显示,调整相关混杂因素后,与NLR的Q1组相比,Q2、Q3、Q4组检出抑郁症状的风险较高[OR(95%CI)值分别为1.47(0.99~2.19)、1.67(1.13~2.47)和1.95(1.32~2.89)]。结论中国9个长寿地区65岁及以上老年人NLR水平与抑郁症状患病风险存在正向关联。
简介:【摘要】目的 对人肺腺癌吉非替尼获得性耐药株H1975细胞和敏感株PC9细胞miRNA谱在表达上的不同进行对比。 方法 使用特定芯片先对H1975细胞进行检测,再检测PC9细胞miRNA表达谱,经特定软件筛选表达差异超出5倍的miRNA,对存在差异者可能靶基因进行分析,通过实时定量PCR技术对芯片检测结果予以验证。 结果 22个H1975细胞株miRNA表达上调超出5倍,24个表达下调在5倍以上;表达异常的33个miRNA有潜在靶基因。 结论 H1975对吉非替尼耐药,可能受miRNA谱异常表达影响,后者可能在调控靶基因的过程中参与获得性耐药。
简介:摘要目的探讨丙泊酚介导miR-137/FGF9通路对人黑色素瘤细胞A375增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法体外培养A375细胞,采用MTT法确定丙泊酚对A375细胞的半数抑制浓度和半数抑制时间,lipofectamine法分别将miR-137 mimics和miR-137 inhibitors转染到A375细胞。将A375细胞分为对照组、丙泊酚组、miR-137 mimics组、丙泊酚+miR-137 mimics组、miR-137 inhibitors组和丙泊酚+miR-137 inhibitors组。选用最佳浓度和时间分别进行相应处理后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-137和FGF9 mRNA表达,同时Transwell法检测细胞体外侵袭和迁移能力。结果随着丙泊酚浓度增加,A375细胞增殖率降低,选80 μmol/L作为半数抑制浓度;随着丙泊酚作用时间的增长,A375细胞增殖率降低,选48 h作为半数抑制时间。与对照组比较,丙泊酚可以促进miR-137 mRNA表达,抑制FGF9 mRNA表达,抑制A375细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);miR-137 mimics可以促进miR-137 mRNA表达,抑制FGF9 mRNA表达,抑制A375细胞侵袭和迁移能力,同时给予丙泊酚干预后,促进miR-137 mRNA表达、抑制FGF9 mRNA表达、抑制A375细胞侵袭和迁移能力的效果更显著(P<0.05);miR-137 inhibitors可以抑制miR-137 mRNA表达,促进FGF9 mRNA表达,促进A375细胞侵袭和迁移能力(P<0.05),同时给予丙泊酚干预后,抑制miR-137 mRNA表达、促进FGF9 mRNA表达、促进A375细胞侵袭和迁移能力的效果受到一定的抑制(P<0.05)。结论丙泊酚对人黑色素瘤细胞A375增殖、侵袭及迁移能力具有明显的抑制作用,其机制可能与丙泊酚抑制miR-137/FGF9通路的激活有关。
简介:摘要目的探讨急性髓系白血病(AML)自发缓解的临床特点及可能的机制。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院诊治的1例伴有MLL-AF9基因重排和肝功能损伤的AML自发缓解患者的临床资料,并进行相关文献报道病例汇总分析。结果该患者伴有MLL-AF9基因重排,经历了肺部感染、发热、肝功能损伤,治疗上给予抗感染、输注血制品,未经化疗,患者获完全缓解(CR),随访35个月,仍处于CR,期间伴有轻度间接胆红素升高。1990年至2021年6月文献报道的有骨髓检测支持的AML(非急性早幼粒细胞白血病)自发缓解患者56例,与本次报道的1例汇总分析,共57例患者,其中男37例,女20例,中位年龄51(20~83)岁,中位缓解时间为5个月,52例患者获得CR,5例具有染色体核型资料的长期缓解且至今未复发的病例,3例为正常染色体核型,2例伴有t(9;11)(q21;q23)异常。结论AML自发缓解罕见,可能与免疫抑制、基因均有关。
简介:摘要目的探讨丙泊酚介导miR-137/FGF9通路对人黑色素瘤细胞A375增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法体外培养A375细胞,采用MTT法确定丙泊酚对A375细胞的半数抑制浓度和半数抑制时间,lipofectamine法分别将miR-137 mimics和miR-137 inhibitors转染到A375细胞。将A375细胞分为对照组、丙泊酚组、miR-137 mimics组、丙泊酚+miR-137 mimics组、miR-137 inhibitors组和丙泊酚+miR-137 inhibitors组。选用最佳浓度和时间分别进行相应处理后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-137和FGF9 mRNA表达,同时Transwell法检测细胞体外侵袭和迁移能力。结果随着丙泊酚浓度增加,A375细胞增殖率降低,选80 μmol/L作为半数抑制浓度;随着丙泊酚作用时间的增长,A375细胞增殖率降低,选48 h作为半数抑制时间。与对照组比较,丙泊酚可以促进miR-137 mRNA表达,抑制FGF9 mRNA表达,抑制A375细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);miR-137 mimics可以促进miR-137 mRNA表达,抑制FGF9 mRNA表达,抑制A375细胞侵袭和迁移能力,同时给予丙泊酚干预后,促进miR-137 mRNA表达、抑制FGF9 mRNA表达、抑制A375细胞侵袭和迁移能力的效果更显著(P<0.05);miR-137 inhibitors可以抑制miR-137 mRNA表达,促进FGF9 mRNA表达,促进A375细胞侵袭和迁移能力(P<0.05),同时给予丙泊酚干预后,抑制miR-137 mRNA表达、促进FGF9 mRNA表达、促进A375细胞侵袭和迁移能力的效果受到一定的抑制(P<0.05)。结论丙泊酚对人黑色素瘤细胞A375增殖、侵袭及迁移能力具有明显的抑制作用,其机制可能与丙泊酚抑制miR-137/FGF9通路的激活有关。
简介:摘要目的探讨急性髓系白血病(AML)自发缓解的临床特点及可能的机制。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院诊治的1例伴有MLL-AF9基因重排和肝功能损伤的AML自发缓解患者的临床资料,并进行相关文献报道病例汇总分析。结果该患者伴有MLL-AF9基因重排,经历了肺部感染、发热、肝功能损伤,治疗上给予抗感染、输注血制品,未经化疗,患者获完全缓解(CR),随访35个月,仍处于CR,期间伴有轻度间接胆红素升高。1990年至2021年6月文献报道的有骨髓检测支持的AML(非急性早幼粒细胞白血病)自发缓解患者56例,与本次报道的1例汇总分析,共57例患者,其中男37例,女20例,中位年龄51(20~83)岁,中位缓解时间为5个月,52例患者获得CR,5例具有染色体核型资料的长期缓解且至今未复发的病例,3例为正常染色体核型,2例伴有t(9;11)(q21;q23)异常。结论AML自发缓解罕见,可能与免疫抑制、基因均有关。
简介:摘要目的探讨脓毒症患儿行连续肾脏替代疗法(CRRT)前应用9 g/L生理盐水液体复苏对后期肾功能及炎症因子水平的影响。方法选取2017年2月至2019年10月期间我院收治的105例脓毒症行CRRT治疗的患儿作为研究对象,按随机平行对照法分为两组,对照组52例CRRT前给予羟乙基淀粉液体复苏,观察组53例给予9 g/L生理盐水液体复苏,比较两组患儿肾功能指标(包括血清尿素氮、肌酐及尿量等)、炎症因子水平[包括C-反应蛋白(CRP)、前降钙素原(PCT)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、急性肾损伤(AKI)发生率和生存率。结果两组治疗后血清尿素氮、肌酐均比治疗前降低,尿量均比治疗前增加,并且观察组治疗效果明显优于对照组,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后CRP、PCT和TNF-α均比治疗前降低,观察组明显低于对照组,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。观察组AKI发生率为15.09%,生存率为71.69%,对照组AKI发生率为32.69%,生存率为48.08%,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论9 g/L生理盐水液体复苏可以改善脓毒症患儿的血流动力学,联合应用CRRT治疗可明显改善患儿的肾功能,降低炎性因子水平和AKI发生率,提高患儿的生存率,值得在临床上推广应用。
简介:摘要目的观察microRNA-21(miR-21)敲除对耐伊马替尼的人慢性髓性白血病细胞株K562/G01细胞在增殖、药物敏感性等方面的影响,初步探讨miR-21影响K562/G01细胞伊马替尼敏感性的可能机制。方法运用CRISPR/Cas9技术敲除K562/G01细胞的miR-21,经PCR筛选、Sanger测序鉴定和实时定量PCR检测获得miR-21敲除的单细胞克隆。扩增培养后,采用MTT法、细胞克隆形成实验检测miR-21敲除对K562/G01细胞增殖的影响。使用伊马替尼处理细胞后,用MTT法和Annexin Ⅴ-APC/7-AAD双染流式细胞检测法观察敲除miR-21后K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性的变化。Western blot法检测miR-21敲除前后K562/G01细胞PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达量的变化。结果成功构建了3个miR-21敲除的K562/G01单细胞克隆,CRISPR/Cas9介导的突变效率为7.12%~8.11%。miR-21敲除使K562/G01细胞的增殖受抑,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆的克隆形成率依次为(57.67±8.25)%、(26.94±5.36)%、(7.17±2.11)%、(31.50±3.65)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除使K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性增加,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆对伊马替尼的IC50值分别为(21.92±1.36)µmol/ml、(3.98±0.39)µmol/ml、(5.38±1.01)µmol/ml、(9.24±1.36)µmol/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除后,其靶基因PTEN的蛋白表达水平未见明显变化,但PI3K、AKT信号分子的活化受到抑制,并且P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达也下调。结论miR-21敲除抑制K562/G01细胞增殖,提高其对伊马替尼的敏感性,这可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路和BCR-ABL表达实现的。
简介:摘要目的观察microRNA-21(miR-21)敲除对耐伊马替尼的人慢性髓性白血病细胞株K562/G01细胞在增殖、药物敏感性等方面的影响,初步探讨miR-21影响K562/G01细胞伊马替尼敏感性的可能机制。方法运用CRISPR/Cas9技术敲除K562/G01细胞的miR-21,经PCR筛选、Sanger测序鉴定和实时定量PCR检测获得miR-21敲除的单细胞克隆。扩增培养后,采用MTT法、细胞克隆形成实验检测miR-21敲除对K562/G01细胞增殖的影响。使用伊马替尼处理细胞后,用MTT法和Annexin Ⅴ-APC/7-AAD双染流式细胞检测法观察敲除miR-21后K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性的变化。Western blot法检测miR-21敲除前后K562/G01细胞PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达量的变化。结果成功构建了3个miR-21敲除的K562/G01单细胞克隆,CRISPR/Cas9介导的突变效率为7.12%~8.11%。miR-21敲除使K562/G01细胞的增殖受抑,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆的克隆形成率依次为(57.67±8.25)%、(26.94±5.36)%、(7.17±2.11)%、(31.50±3.65)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除使K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性增加,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆对伊马替尼的IC50值分别为(21.92±1.36)µmol/ml、(3.98±0.39)µmol/ml、(5.38±1.01)µmol/ml、(9.24±1.36)µmol/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除后,其靶基因PTEN的蛋白表达水平未见明显变化,但PI3K、AKT信号分子的活化受到抑制,并且P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达也下调。结论miR-21敲除抑制K562/G01细胞增殖,提高其对伊马替尼的敏感性,这可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路和BCR-ABL表达实现的。
简介:摘要目的观察溶瘤腺病毒差异显示编码3(DD3)-ZD55-精子相关抗原9(SPAG9)在体外对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞的治疗效果,并探讨作用机制。方法将LNCaP细胞分为4组进行干预,分别为磷酸盐缓液组(PBS)、病毒对照组[ZD55-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),10 MOI]、病毒治疗组(ZD55-SPAG9,10 MOI)、DD3启动子调控组(DD3-ZD55-SPAG9,10 MOI)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭能;蛋白质印迹法(Western blot)检测SPAG9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和腺病毒早期区1A基因(E1A)的表达。多组之间采用方差分析,进一步组间比较采用SNK法。结果CCK-8结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组LNCaP细胞存活率均显著低于PBS组[(73.80 1.43)%、(73.66 2.19)%、(81.79 2.59)%比100%,F=1038.210,P<0.01],ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞存活率降低更为显著,但两者之间存活率差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell迁移结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组小室底膜细胞数明显低于PBS组[(52.57±5.57)、(48.67±4.04)、(69.67±6.02)比(109.06±9.54),F=384.466,P<0.05],ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞迁移能力降低更为显著,且两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。侵袭实验结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组穿透Matrigel胶,进入小室下层的细胞数目明显少于PBS组[(58.33±3.79)、(55.36±7.51)、(78.06±4.36)比(115.67±11.59),F=305.885,P<0.01],提示细胞侵袭能力显著降低,ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞侵袭能力降低更为显著。Western blot结果显示,与PBS组比较,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组内SPAG9蛋白表达下调[(0.32±0.07)、(0.47±0.09)、(0.66±0.05)比1,F=594.522,P<0.01],E-cadherin表达上调[(4.80±0.34)、(3.80±0.35)、(2.81±0.52)比1,F=482.275,P<0.01],Vimentin表达下调[(0.33±0.04)、(0.46±0.06)、(0.53±0.05)比1,F=903.749,P<0.01],MMP-2表达下调[(0.30±0.03)、(0.44±0.05)、(0.60±0.05)比1,F=1 540.940,P<0.01],上述变化在ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组内更为显著。WPMY-1细胞内E1A在DD3-ZD55-SPAG9组内的表达明显低于ZD55-SPAG9和ZD55-EGFP组。结论溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SPAG9在体外可以有效降低LNCaP细胞的存活率,并抑制迁移和侵袭,并对正常细胞具有更高的安全性。
简介:摘要目的探讨高糖环境下基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对巨噬细胞生物学功能的影响及其机制。方法体外建立RAW264.7巨噬细胞系,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SDF-1对巨噬细胞的毒性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测高糖(22.5 mmol/L)和正常糖(5.5 mmol/L)对巨噬细胞相关蛋白表达的影响。实验分组:A组(对照)、B组(SDF-1)、C组(磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路抑制剂:LY294002)、D组(SDF-1+ LY294002),Transwell实验检测巨噬细胞的迁移能力,Western blot检测各组相关蛋白的表达变化。两组间比较采用非配对t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果CCK-8实验结果显示,各组间比较差异无统计学意义(F=0.464,P>0.05)。高糖组巨噬细胞SDF-1、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1的特异受体(CXCR4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达低于正常糖组(SDF-1、VEGF、CXCR4、MMP-9组间比较,t=50.510、11.020、27.660、55.350,均P<0.05)。Transwell实验中,A、B、C、D组迁移巨噬细胞数分别为(86.630±4.096)、(144.300±5.044)、(59.000±2.646)、(65.670±4.256)个。与A组比较,B组及C组差异有统计学意义(t=21.460、5.574,均P<0.05)。此外,SDF-1可以增加巨噬细胞CXCR4、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、MMP-9、VEGF的表达,而LY294002可以减少上述蛋白的表达(Western blot检测各蛋白,B组:CXCR4、PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较,t=44.690、5.393、4.640、13.250、8.551,均P<0.05;C组:PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较,t=13.430、5.287、4.381、45.510,均P<0.05)。结论高糖环境可以影响巨噬细胞SDF-1、VEGF、CXCR4及MMP-9的表达,SDF-1可能通过上调PI3K/Akt通路促进巨噬细胞分泌MMP-9及VEGF。
简介:摘要目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)及半乳糖凝集素9(Gal-9)在初治急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞中的表达水平、临床意义和预后评估价值。方法收集2016年9月至2018年9月新疆医科大学第一附属医院30例初诊ALL患者的骨髓标本,选取同期在该院体检的20名健康志愿者外周血标本作为对照。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Tim-3、Gal-9 mRNA相对表达水平。结合患者临床资料,比较不同临床病理特征ALL患者Tim-3、Gal-9 mRNA表达差异;采用Kaplan-Meier法对ALL患者总生存(OS)进行分析,采用Cox比例风险回归模型进行单因素、多因素生存分析。结果ALL患者在初诊时Tim-3、Gal-9 mRNA相对表达水平均高于健康对照组(2.86±0.47比0.45±0.05,9.79±0.58比0.96±0.23),差异均有统计学意义(t=21.65,P<0.05;t=63.24,P<0.05)。不同年龄,法、美、英(FAB)协作组分型,危险度分级及中枢神经系统是否侵犯患者间Tim-3 mRNA相对表达水平差异均有统计学意义(均P<0.01);不同年龄、FAB协作组分型、白细胞计数及中枢神经系统是否侵犯、NOTCH1基因是否突变患者间Gal-9 mRNA相对表达水平差异均有统计学意义(均P<0.01)。根据Tim-3、Gal-9 mRNA相对表达水平分组,Tim-3高表达组(≥2.86)OS较低表达组(<2.86)差(P=0.048);Gal-9高表达组(≥9.79)OS较低表达组(<9.79)差(P=0.031);Tim-3、Gal-9均高表达组OS较二者均低表达组和任意一项低表达组均差(均P<0.05);Tim-3高表达、Gal-9低表达组与Tim-3低表达、Gal-9高表达组之间OS比较差异无统计学意义(P>0.05)。Cox多因素回归分析结果显示外周血白细胞计数≥11.4×109/L、BCR-ABL基因突变、中枢神经系统侵犯、Tim-3高表达、Gal-9高表达为影响初治ALL患者OS的独立危险因素(均P<0.05)。Tim-3表达水平与Gal-9表达水平呈正相关(r=0.788,P<0.01)。结论Tim-3及其配体Gal-9高表达为初治ALL患者预后不良的独立影响因素;Tim-3、Gal-9表达水平可以作为评估初治ALL患者预后的潜在指标。
简介:摘要目的了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO2)对正常人肝细胞(L-02细胞)核苷酸切除修复(NER)相关基因mRNA转录水平及其启动子区组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)修饰水平的影响。方法以0(对照)、5、10、20 μmol/L的NaAsO2处理L-02细胞24 h(n = 3),采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测L-02细胞DNA损伤情况[Olive尾距(OTM)、尾部DNA百分含量(Tail DNA%)];实时荧光定量PCR法检测NER相关基因着色性干皮病(XP)基因A(XPA)、XP基因D(XPD)、XP基因F(XPF)mRNA表达水平;定量染色质免疫沉淀(CHIP)技术检测XPA、XPD、XPF启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2修饰水平。结果OTM、Tail DNA%水平与染砷剂量均呈正相关(对照和5、10、20 μmol/L染砷组分别为0.35 ± 0.09、0.56 ± 0.18、3.18 ± 0.31、4.52 ± 0.55,0.72 ± 0.05、1.34 ± 0.26、3.93 ± 0.43、5.47 ± 0.65,r = 0.927、0.948,P均< 0.05)。与对照组比较,10、20 μmol/L染砷组L-02细胞XPA、XPD、XPF mRNA表达水平均较低(P均< 0.05)。与对照组比较,20 μmol/L染砷组L-02细胞XPA、XPD、XPF启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2富集水平均较高(P均< 0.05)。结论砷通过增加NER相关基因启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2富集水平,抑制NER相关基因转录,进而降低L-02细胞DNA损伤修复能力,导致DNA损伤加重。
简介:摘要目的应用腺相关病毒(AAV)-规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)系统体外实验研究基因治疗威尔森氏症(WD)。方法选用2月龄雄性Toxic milk (TX)小鼠作WD模型,设计小向导RNA(sgRNA)并构建含有CRISPR元件的AAV载体质粒命名为pAAV-sgRNA1、2、3,制备AAV,病毒滴度达1~4×1013 GC/ml;感染WD肝细胞,72 h后提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)后测序检测基因编辑效率,筛选出其中活性最高者sgRNA1,构建相应的同源修复模板(HT)质粒命名为pAAV-HT,应用AAV-sgRNA1和AAV-HT共感染WD肝细胞,测序和T7E1酶切检测模板修复效率;用HT特异性引物行PCR,验证HT掺入。组间比较采用Student’s t检验。结果Sanger测序结果显示,sgRNA1在体外有最高的编辑效率[(20.2±2.3)%],与sgRNA2、3比较[(3.1±1.3)%、(14.6±2.0)%],差异有统计学意义(P<0.05)。进一步用HT进行基因修正,能检出特异性修正后的ATP7B基因;二代测序测序显示修复率为(7.9±2.7)%。结论AAV-CRISPR系统在体外可以达到较高编辑效率和修复效率。
简介:摘要目的探讨外周血基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR)对自发性脑出血(spontaneous intracerebral hemorrhage, sICH)后迟发性血肿周围脑水肿(delayed perihematomal edema, dPHE)的预测价值。方法回顾性纳入2018年1月至2020年6月期间南京大学医学院附属鼓楼医院收治的sICH患者。在发病24 h内检测血清MMP-9水平、外周血细胞计数并计算NLR。dPHE定义为sICH发病后10~21 d绝对水肿体积较5~9 d时增加3 ml。比较dPHE组与非dPHE组人口统计学以及基线临床和影像学资料。应用多变量logistic回归分析确定dPHE的独立预测因素。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估MMP-9和NLR对dPHE的预测价值。结果共纳入195例sICH患者,年龄(61.88±10.60)岁,男性148例(75.9%);dPHE组53例(27.2%),非dPHE组142例(72.8%)。单变量分析显示,dPHE组年龄、基线血肿体积、基线美国国立卫生研究院卒中量表评分、空腹血糖、超敏C反应蛋白、MMP-9、中性粒细胞计数、NLR以及不规则血肿比例均显著高于非dPHE组(P均<0.05)。多变量logistic回归分析显示,在校正混杂因素后,MMP-9较高[优势比(odds ratio, OR)4.291,95%置信区间(confidence interval, CI)2.041~6.590;P=0.007]和NLR较高(OR 2.530,95% CI 1.157~4.022;P=0.011)均为dPHE的独立预测因素。ROC曲线分析显示,MMP-9预测dPHE的曲线下面积为0.819(95% CI 0.756~0.884;P<0.001),最佳截断值为164.0 μg/L,对应的敏感性和特异性分别为86.79%和66.90%;NLR预测dPHE的曲线下面积为0.788(95% CI 0.719~0.856;P<0.001),最佳截断值为5.683,对应的敏感性和特异性分别为77.36%和71.13%。结论基线MMP-9和NLR较高的sICH患者更易发生dPHE,入院后早期检测外周血MMP-9和NLR可预测dPHE。