简介:摘要目的观察脱细胞真皮基质(ADM)对巨噬细胞特征性标志物表达的影响。方法实验分组:A组,巨噬细胞组;B组,ADM(5 μg/μl)与巨噬细胞共培养组;C组,脂多糖(LPS,100 ng/ml)及γ-干扰素(IFN-γ)(10 ng/ml)联合诱导巨噬细胞组;D组,白细胞介素-4(IL-4,10 ng/ml)诱导巨噬细胞组;E组,LPS(100 ng/ml)及IFN-γ(10 ng/ml)联合诱导巨噬细胞后再与ADM(5 μg/μl)共培养组。采用实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测不同组巨噬细胞一氧化氮合成酶(iNOS)、分化抗原86(CD86)、甘露糖受体(CD206)和精氨酸酶-1(Arg-1) mRNA和蛋白的相对表达水平,组间比较采用t检验,多组间采用单因素方差分析。结果RT-PCR检测结果显示,M1型巨噬细胞标志物iNOS、CD86的表达在C组中最高(2.82±0.07、3.07±0.24,FiNOS=210.3,FCD86=85.6,P<0.01)。M2型巨噬细胞标志物CD206、Arg-1的表达在D组中最高(3.30±0.26、3.23±0.32,FCD206=115.4,FArg-1=71.2,P<0.01)。B组与A组比较,M1型和M2型巨噬细胞标志物的表达差异无统计学意义(t=1.706,P>0.05)。E组与C组比较,M1型巨噬细胞标志物iNOS、CD86的表达量下降,分别由C组的2.82±0.07、3.07±0.24下降到E组的2.21±0.10、1.96±0.04;而M2型巨噬细胞标志物CD206、Arg-1的表达量增高,分别由C组的1.01±0.16、0.97±0.16上升到E组的1.87±0.14、1.91±0.14;两组差异有统计学意义(tiNOS=8.523,tCD86=7.702,tCD206=7.028,tArg-1=7.904,P<0.05)。Western blot检测结果与RT-PCR的检测结果趋势一致。结论ADM有诱导巨噬细胞从M1型向M2型极化的作用。
简介:摘要目的验证喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)铁死亡的变化以及探讨M2巨噬细胞来源的外泌体对喉癌铁死亡的调控作用。方法收集哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科2018年9月至2021年4月诊治的32例喉鳞癌和邻近非癌组织标本,其中男性26例,女性6例,年龄43~79岁。通过免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达并分析其与临床病理因素的关系。通过透射电镜、细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆试验、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、线粒体膜电位、RT-PCR和蛋白免疫印迹法(WB),检测铁死亡诱导剂erastin处理后喉鳞癌TU212细胞的变化。分离M0/M2巨噬细胞上清液中的外泌体(M0-exos/M2-exos),并与经过erastin处理的TU212细胞共同孵育,检测各组铁死亡变化情况。数据采用SPSS 19.0软件统计分析结果。结果铁死亡标志物GPX4在喉鳞癌组织中的表达水平明显高于邻近非癌组织(2.04±0.65比0.99±0.09,F=30.36,P<0.001),且与临床分期及T分期密切相关(Ⅰ-Ⅱ期比Ⅲ-Ⅳ期:1.75±0.39比2.18±0.71,F=2.25;T1-2期比T3-4期:1.71±0.42比2.20±0.69,F=2.06,P值均<0.05)。TU212细胞经erastin处理后,出现铁死亡的改变,表现为细胞线粒体嵴变小、膜密度增大、增殖率降低、细胞内ROS和MDA水平升高、GSH含量下降、线粒体膜电位发生去极化,细胞内GPX4的mRNA和蛋白的表达降低。在白介素4(IL-4)诱导下,M0巨噬细胞极化为M2型,分离M2巨噬细胞上清液,获得外泌体(M2-exos),发现M2-exos能够诱导erastin处理的TU212细胞高表达GPX4和GSH,下调ROS和MDA的表达水平,逆转细胞的增殖能力(P值均<0.05)。结论铁死亡是喉鳞癌细胞死亡的方式之一,M2巨噬细胞源性外泌体能够抑制喉鳞癌铁死亡的发生。
简介:摘要目的探讨雷帕霉素(RAP)激活M2巨噬细胞(type-Ⅱ macrophage)自噬对大肠癌移植瘤放射敏感性的影响。方法经佛波酯(PMA)单独及联合人重组白介素4(IL-4)诱导人单核白血病细胞THP-1分化为M0和M2型巨噬细胞。使用RAP激活M2自噬,设置巴弗洛霉素(bafilomycin A1)下调M2已被激活的自噬作为对照。将大肠癌LoVo细胞接种于BALB/c-nu/nu裸鼠,待形成直径10 mm瘤体后,利用随机数表法,将18只裸鼠分为M2自噬未激活组、激活组和激活后下调组,LoVo细胞单独成瘤为阴性对照组,每组6只。对荷瘤鼠行2次8 Gy X射线局部照射,分析各组间移植瘤放射敏感性的变化。结果M2巨噬细胞标志物Arg-1、CCL-22的相对表达量显著高于M0巨噬细胞(t=78.77、60.02,P<0.05)。M2自噬未激活组瘤体质量、体积和微血管密度(MVD)[(1.93±0.05)g、(2.14±0.06)cm3、36.37±1.04]较阴性对照组[(1.35±0.05)g、(1.77±0.02)cm3、25.69±1.34]显著提高(t=20.07、14.56、10.92,P<0.05);激活M2自噬后,瘤体重量、体积和微血管密度均显著下降[(0.89±0.03)g、(1.24±0.01)cm3、13.60±1.52](t=44.37、40.32、21.43,P<0.05)。利用巴弗洛霉素下调M2自噬后,瘤体质量、体积和微血管密度有所回升[(1.02±0.07)g、(1.37±0.02)cm3、21.06±1.41](t=4.67、13.79、6.23,P<0.05)。与阴性对照组相比,自噬未激活的M2能够抑制Livin和Survivin在瘤体组织中的表达(t=2.64、7.90,P<0.05);RAP激活M2自噬后,可进一步下调上述蛋白的表达(t=5.43、9.39,P<0.05)。利用巴弗洛霉素下调M2自噬后,Livin、Survivin表达量均有所回升(t=2.80、3.17,P<0.05)。结论利用RAP激活M2自噬,可抑制M2促进肿瘤微血管形成的能力,从而抑制移植瘤生长;同时,通过下调大肠癌移植瘤中抗凋亡基因Livin与Survivin的表达,诱导大肠癌移植瘤放疗后凋亡的发生,提高大肠癌的放射敏感性。
简介:摘要目的探讨低氧肺癌细胞来源的外泌体微小RNA(miR)-1278对巨噬细胞M2极化的调节作用及其机制。方法收集正常条件和缺氧肺癌细胞的培养上清液,差速离心法分离外泌体,透射电子显微镜观察并计数,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-1278的表达水平。运用收集的外泌体(各10 μg)处理CD14+单核细胞(主要是巨噬细胞),诱导细胞M2型分化,流式细胞术评估分化效果。miR-1278 mimic、miR-1278 inhibitor以及各自的阴性对照转染CD14+单核细胞,检测M2型巨噬细胞比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)、趋化因子CC配体18(CCL-18)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的分泌量。预测、筛选和验证miR-1278的靶基因,研究miR-1278对靶基因及其下游通路的调节作用。常氧和低氧CL1-5细胞外泌体分别与通路抑制剂WP1066或miR-1278 inhibitor处理CD14+单核细胞,检测M2型巨噬细胞比例,并研究巨噬细胞条件培养基对肺癌细胞迁移和内皮细胞血管形成的作用。采用Student′s t检验分析两组间差异,多组间数据差异采用方差分析进行比较。结果与常氧肺癌细胞比较,低氧肺癌细胞分泌的外泌体数量显著增加(0.8~1.5倍,P<0.05)。过表达和抑制miR-1278的水平分别促进常氧(12.06%比38.21%,P<0.05)和抑制低氧(30.55%比9.53%,P<0.05)巨噬细胞的M2极化,伴随IL-10、CCL-18和VEGF-A分泌量的变化。miR-1278靶向抑制磷酸酶SHP-1的表达(约70%,P<0.05),进而促进信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路的活性。WP1066(STAT3抑制剂)处理可以抑制低氧肺癌细胞外泌体诱导的M2极化,WP1066和miR-1278 inhibitor均可抑制低氧肺癌外泌体诱生的巨噬细胞条件培养基对肿瘤细胞迁移和内皮细胞血管形成的诱导作用。结论低氧肺癌来源的外泌体携带的miR-1278通过靶向抑制SHP-1的表达,激活STAT3通路,从而诱导巨噬细胞的M2极化,有助于构建免疫抑制微环境,进而促进肿瘤迁移和血管形成。
简介:摘要:随着经济社会的不断发展,人们对生活质量的追求逐渐提高。为了满足人们对更好生活环境的要求,需要进行合理的规划建设。土地资源管理在规划建设中占据着重要的位置,科学的土地资源管理能够很好地促进规划建设的发展。对目前规划建设中存在的土地资源管理问题进行探讨,并提出一系列基于规划建设的土地资源管理策略,以期促进规划建设与利用土地资源的和谐发展。
简介:摘要目的评价外泌体在M2型小胶质细胞减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组(n=14):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)、氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞组(O+M2组)、氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞+GW4869组(O+M2+G组)和氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞源性外泌体组(O+M2-E组)。C组在正常条件下培养,O组氧糖剥夺4 h,复糖复氧24 h;O+M2组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入M2型小胶质细胞的上清液2 ml培养24 h;O+M2+G组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入经外泌体抑制剂GW4869 10 μmol/L处理后的M2型小胶质细胞上清液2 ml培养24 h;O+M2-E组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入M2型小胶质细胞源性外泌体10 μg/ml培养24 h。光镜下观察细胞形态变化,采用CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达水平,Western blot法检测AQP4及胀亡蛋白porimin的表达水平。结果与C组相比,其余4组细胞活力下降,AQP4及其mRNA、porimin表达上调(P<0.05),细胞发生水肿;与O组相比,O+M2组和O+M2-E组细胞活力升高、AQP4及其mRNA和porimin表达下调,O+M2+G组上述指标差异无统计学意义(P>0.05),细胞水肿程度减轻;与O+M2组相比,O+M2+G组细胞活力下降,AQP4及其mRNA和porimin表达上调(P<0.05),O+M2-E组上述指标差异无统计学意义(P>0.05),细胞水肿程度增强。结论M2型小胶质细胞可通过外泌体减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤。
简介:摘要:高效的历史课堂是我们历史教师的精心设计和用心打磨锤炼的结果,也是多种手段有效组合和多个环节无缝对接的最美呈现。本文探讨了高效历史课堂创建需要教师精心准备、创设和谐氛围、灵活教学手段和巧设问题实施。
简介:摘要目的探究吡非尼酮(PFD)对放射性肺纤维化(RILF)的防治作用及其作用机制。方法采用小动物放射研究平台对C57BL/6小鼠进行单次50 Gy X线的全胸照射,用药组小鼠于照射前2 h灌胃给予300 mg/kg PFD,此后每天灌胃一次直至150 d处死小鼠并提取肺组织,肺组织采用HE和Masson染色、实时荧光定量PCR (qPCR)和蛋白质印迹法(WB)检测。巨噬细胞经PFD处理后,用白介素-4和白介素-13刺激,使其向M2型极化,采用qPCR、WB以及免疫荧光染色进行相关检测。结果PFD能显著抑制由X线诱导的肺内炎性细胞浸润以及肺组织纤维化形成,降低M2型巨噬细胞表型标记物的表达。细胞实验也证实,PFD能显著抑制巨噬细胞向M2型极化,表现为精氨酸酶-1和几丁质酶3样蛋白3表达的降低,这个过程主要与干扰素调节因子4(IRF4)的下调有关。结论PFD通过下调IRF4抑制巨噬细胞向M2型极化,对RILF具有一定的防治作用。
简介:摘要:近几年,随着国民经济的快速发展,我国电力工业行业的管理水平、技术装备、投资主体发生了一系列变革、创新。在这一背景下,为顺应新时期电力工业总体发展趋势,国家能源局委托中国电力企业联合会修编完成《电力建设工程定额与费用计算规定(2018版)》(以下简称“本套定额”),其所涉及内容包含建筑工程、热力设备安装工程、电气设备安装工程、架空输电线路工程、电缆输电线路工程、调试工程、通信工程和加工配制品,其中,《电力建设工程预算定额 第一册 建筑工程(上册 下册)》所涉及的预算定额内容颇多。基于此,本文以某省建筑拆除工程预算定额为例展开研究,从砖砌墙体结构、钢筋混凝土结构、金属结构和余物清理费规定等层面入手,深入分析建筑工程预算拆除定额存在的必要性,希望能为建设拆除工程提供一些具有参考价值的意见与建议。
简介:摘要1例肥胖的扩张型心肌病患者,体重指数(BMI)高达48 kg/m2,建议其植入全皮下植入型心律转复除颤器(S-ICD)进行心脏性猝死一级预防。经过筛选等步骤完善之后,患者植入S-ICD,手术成功,术后患者恢复良好。