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  • 简介:摘要:目的 探讨干细胞培养所需饲养层的制备方法。 方法 采用胰蛋白酶消化法,将小鼠胚胎制成细胞悬液接种培养。用丝裂霉素 C处理 MEF细胞制备饲养层,观察处理后的细胞活力及有无再增殖现象。结果 采用 0.0625% 胰蛋白酶消化小鼠胚胎组织获得高活力的 MEF细胞,用丝裂霉素 C处理前后 MEF细胞无明显增值,细胞活力在 90%以上。结论:该方法可获得高活力的 MEF细胞。丝裂霉素 C处理后的 MEF细胞种植到明胶包被的 6孔板中,在 1周内可用于干细胞培养

  • 标签: 小鼠胚胎成纤维细胞 饲养层 干细胞
  • 作者: 刘雪霞 张璘 任梅宏 宋桂宁 张颜秋 李艳晖
  • 学科: 医药卫生 > 临床医学
  • 创建时间:2020-09-15
  • 出处:《医师在线》 2020年第18期
  • 机构:羊水细胞染色体核型分析是目前诊断胎儿是否有染色体疾病的较为安全可靠及常用的方法 [1],但羊水细胞培养一直存在着标本难以复得、 培养周期长、 易污染、 分裂象少等问题 [2-4]。羊水从抽取后进行培养,到制备出可分析的良好染色体核型,整个过程步骤繁多;其中包括羊水细胞接种、培养、收获,及羊水染色体制片、 G显带、染色等过程,每一个步骤都对实验的成功具有重要的影响。因此,分析羊水细胞培养和染色体制备的影响因素以及探索提高实验成功率和质量的方法,对满足临床需求和提高染色体异常诊断率有着深远的意义。本文结合本人的工作积累和目前羊水培养和染色体制备的关键环节进行综述,现综述如下:
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  • 简介:摘要目的比较不同公司生产的无血清培养基对病毒性疫苗生产用Vero细胞培养效果,及基因工程胰蛋白酶的细胞消化效果,以判断是否适用。方法实验组用VirusPro Vero-A培养基进行Vero细胞培养,用Trpzyme消化细胞。对照组用VP-SFM培养基进行细胞培养,用TrypLE Select消化细胞。两组Vero细胞以相同密度接种在T175培养瓶中,以相同的培养条件和传代方法在T175瓶和细胞工厂中各培养3代。培养期间观察细胞的上清液、形态以及汇合度,消化后检测细胞活率并计算细胞收获量。采用配对t检验比较两组消化液的pH值、总消化时长、37 ℃消化孵育时长、细胞活率以及细胞收获量。结果两组细胞生长状态均良好。配对t检验显示,实验组消化液的pH值(6.99)、总消化时长(17.28 min)和37 ℃消化孵育时长(6.93 min)均值均大于对照组消化液(分别为6.75、12.34 min、3.30 min),细胞活率(94.79%)及细胞收获量(T175瓶:3.91×107个;细胞工厂:1.90×109个)均值均高于对照组的(分别为90.20%、3.33×107个、1.26×109个),且差异有统计学意义(t值分别为9.17、3.46、2.98、2.31和4.38,P值均<0.05)。结论实验组无血清培养培养效果较好,实验组基因工程胰蛋白酶细胞消化液温和、细胞损伤小,均适用于Vero细胞

  • 标签: 细胞培养技术 Vero细胞 培养基,无血清 胰蛋白酶
  • 简介:摘要毛囊干细胞(hair follicle-derived stem cells,HF-SCs)不仅具有自我更新和多向分化的能力,同时具有来源丰富、取材方便和无伦理问题等优势,因此得到越来越多国内外学者的关注。随着HF-SCs研究的不断深入,如何分离、纯化、鉴定HF-SCs成为一个亟待解决的问题。因此寻找特异性较高的HF-SCs标记成为近年的研究热点。

  • 标签: 毛囊 干细胞 表面标记物 组织工程
  • 简介:摘要:目的:梳理人参在中医急诊中的有效应用。方法:通过查阅资料,了解人参单味药的急救意义,分析人参在急救方剂中的配伍意义。结果:人参单味药作独参汤,具有可固血、固津、固气,用于元气虚弱津血大脱证;参附汤,人参通过补元阳起到回阳救逆的功效;生脉散,人参通过固津液起到复脉固脱的功效;人参四逆汤,人参通过补阴阳起到回阳固脱,生津益气补血的功效。结论:人参在中医急救中发挥着重要作用,通过回阳、固津、调整阴阳来达到救急的目的。

  • 标签: []人参 急救 固脱
  • 简介:摘要:本研究通过水煮法对人参根和侧柏叶原料进行了天然活性成分提取,并选取成人毛囊真皮细胞人参根和侧柏叶提取的生物相容性进行评价,结果显示人参根和侧柏叶的天然活性成分有效促进了毛囊真皮细胞的生长和增殖。小鼠模型研究也进一步表明人参根和侧柏叶提取能够显著促进其毛发生长。本研究表明从人参根与侧柏叶中提取的天然活性成分有可能为治疗脱发性疾病提供一种新的策略。

  • 标签: 人参根 侧柏叶 毛囊 细胞增殖
  • 简介:摘要脑微出血(cerebral microbleeds,CMBs)是脑小血管病的一种影像学表现。目前越来越多的观点认为,血管内皮损伤在CMBs的发病过程中起着重要作用。血管内皮功能障碍所致的血脑屏障破坏以及炎症反应可能促进了CMBs的发生和发展。同时,CMBs病灶周围含铁血黄素的沉积也可能触发炎症反应。不过,相关的机制以及因果关系尚未完全阐明。文章对与CMBs相关的血管内皮炎性因子及其在CMBs发病中的作用机制进行综述。

  • 标签: 脑出血 内皮,血管 炎症 炎症介导素类 生物标志物
  • 简介:摘要对于非小细胞肺癌患者的治疗而言,放疗是重要的局部治疗方法之一。但治疗过程中出现的放疗抵抗往往是影响疗效的最大障碍,也是治疗失败的主要原因。寻找放射敏感性标志,对于发现其具体抵抗机制,改善疗效及预后有重大的意义,并可为非小细胞肺癌的放射增敏治疗提供思路及依据。

  • 标签: 癌,非小细胞肺 辐射耐受性 蛋白质类 RNA,长链非编码 微RNAs
  • 简介:摘要目的探讨空气颗粒(PM)及香烟烟雾提取(CSE)对人肺泡上皮细胞(A549细胞)和单核细胞(THP-1细胞)源性巨噬细胞功能的影响。方法采用不同浓度的PM与CSE单独或叠加体外刺激A549细胞和THP-1细胞,应用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达,实时聚合酶链式反应检测巨噬细胞极化标志,免疫蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达。结果与空白对照组比较,0.5% CSE、50 mg/LPM单独刺激即可抑制A549细胞增殖;二者叠加刺激后,较CSE单独刺激组能够进一步抑制该细胞增殖活性,促进细胞凋亡;同时,在CSE存在时,PM可进一步促进A549细胞和THP-1细胞产生的炎症因子白细胞介素6及白细胞介素1β。PM单独或与CSE叠加均可降低A549细胞表达occludin。实时聚合酶链式反应结果显示,CSE与PM叠加进一步促进THP-1细胞表达CD80 mRNA。结论PM能够进一步加重CSE暴露所导致的气道上皮抑制增殖、促进凋亡、炎症及巨噬细胞向M1型极化。

  • 标签: 空气颗粒物 香烟烟雾提取物 上皮细胞 巨噬细胞
  • 简介:摘要细胞外囊泡(EVs)作为细胞间相互作用的基本方式之一,携带有大量生物学活性物质,在疾病诊断和治疗中显示出巨大的潜力。与组织活检相比,其检测具有无创、取样简便、可实时监测等优势,故EVs生物标志的研究与临床应用已成为国际研究热点。本文对EVs在疾病诊断中的意义及其作为生物标志的筛选策略与临床验证进行了梳理总结,鼓励加快疾病EVs生物标志的筛选验证与检测技术的研发,进一步推进EVs生物标志研究成果向疾病临床诊疗的转化应用。

  • 标签: 胞外囊泡 生物标记 临床实验室技术 有效性研究
  • 简介:摘要目的探讨黄药子醇提对人肝癌细胞SMCC-7721凋亡影响及其机制。方法将SMCC-7721细胞株(购自中国科学院)根据黄药子醇提的不同浓度分为:空白对照组、低浓度组、高浓度组。药物处理48 h后,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞程序性细胞死亡因子4(PDCD4)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化;平板克隆实验检测细胞增殖;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,组间比较采用t检验。结果PDCD4、Caspase-3 mRNA表达空白对照组、低浓度组分别为0.47±0.06、0.45±0.07;1.15±0.12、1.02±0.13,高浓度组为2.38±0.31、2.26±0.28明显高于上述两组(t=6.830、5.140, P<0.05);PDCD4、Caspase-3蛋白表达空白对照组、低浓度组分别为0.51±0.09、0.48±0.08;1.23±0.13、1.18±0.10,高浓度组为2.51±0.28、2.48±0.22,明显高于上述两组(t=6.560、5.890,P<0.05);细胞周期结果显示G0/G1期与S期细胞空白对照组、低浓度组分别为[(53.46±4.32)%、(30.95±3.42)%],[(67.32±5.32)%、(21.49±3.46)%],高浓度组为[(77.12±6.34)%、(14.65±2.72)%],G0/G1期细胞明显高于上述两组(t=5.750、4.230, P<0.05),S期细胞数明显低于上述两组(t=5.280、4.460, P<0.05);高浓度组凋亡率[(22.62±1.24)%]明显高于空白对照组和低浓度组[(3.12±0.63)%、(11.25±0.85)%,t=5.280、4.720, P<0.05];平板克隆实验显示高浓度组细胞克隆形成数[(115.54±14.64)个]明显低于空白对照组和低浓度组[(214.35±18.52)、(171.95±16.83)个,t=5.280、4.760,P<0.05];穿膜细胞数高浓度组为(87.63±15.76)个,明显低于空白对照组和低浓度组[(208.36±23.72)、(122.46±21.42)个,t=6.870、6.150,P<0.05]。结论黄药子醇提调高PDCD4、Caspase-3表达,抑制SMCC-7721细胞的增殖,促进细胞凋亡。

  • 标签: 黄药子醇提物 肝癌 细胞周期 凋亡 侵袭
  • 简介:摘要:人参果为五加科植物人参的成熟果实。往往它的药用价值会被人们忽略,但是尤其其丰富的皂苷含量,并且无明显的毒性作用,其提取在多领域被证明具有药用的价值或者具有药用的潜力,本文将重点着眼于人参果在抗肿瘤,抗糖尿病,抗心脑血管疾病等方面的研究现状进行概述。

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  • 简介:摘要:人参果为五加科植物人参的成熟果实。往往它的药用价值会被人们忽略,但是尤其其丰富的皂苷含量,并且无明显的毒性作用,其提取在多领域被证明具有药用的价值或者具有药用的潜力,本文将重点着眼于人参果在抗肿瘤,抗糖尿病,抗心脑血管疾病等方面的研究现状进行概述。

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  • 简介:【摘要】目的 研究雪莲培养胶囊的免疫调节作用。方法 雌性ICR小鼠200只,按体重随机分成对照组和58.3、116.7、350.0mg/60kg.BW 3个剂量组,小鼠经口灌胃给予受试一个月后,分别测定免疫功能的各项指标。结果 高剂量组加ConA 孔与不加 ConA孔吸光度的差值和耳壳增重均显著高于对照组(P<0.05),高剂量组小鼠溶血空斑数、血清半数溶血值(HC50) 和吞噬指数 a 均极显著高于对照组(P<0.01),各剂量组小鼠的体重增长值、胸腺体比、脾脏体比、吞噬率、吞噬指数和NK细胞活性与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 雪莲培养胶囊具有增强免疫力的保健功能。

  • 标签: 雪莲培养物胶囊 细胞免疫 体液免疫 NK细胞
  • 简介:摘要目的研究蜂蜇草萃取对胡蜂蜂毒致人红细胞溶血的拮抗作用。方法采用水提取法对干蜂蜇草进行萃取,真空干燥获得蜂蜇草萃取,配制成1 g/L备用;从胡蜂工蜂尾部收集蜂毒原液备用。获取A、B、O、AB型健康献血者悬浮红细胞液制成洗涤红细胞,调节红细胞计数(4.0~80.0)×109/L(血细胞计数板上计数红细胞数量1~20个/小格),按处理因素分成生理盐水对照组(NS组,红细胞液200 μL +生理盐水20 μL)、蜂蜇草萃取组(FZC组,红细胞液200 μL+蜂蜇草萃取10 μL +生理盐水10 μL)、蜂毒组(FD组,红细胞液200 μL+蜂毒10 μL+生理盐水10 μL)、蜂蜇草萃取+蜂毒组(FCD组,红细胞液200 μL +蜂蜇草萃取10 μL +蜂毒10 μL),每组10份。将各组溶液置于玻璃试管中,放入37 ℃温箱,10 min后于显微镜下直接观察血细胞计数板并进行红细胞计数,比较不同血型相同处理因素之间以及相同血型不同处理因素组之间红细胞计数的差异。结果在相同处理因素下,各血型间红细胞计数差异无统计学意义,NS组中A、B、O、AB型红细胞计数(×109/L)分别为5.567±1.368、5.146±1.690、4.577±0.774、5.197±1.587(F=0.852,P=0.475),FZC组分别为5.751±1.489、5.268±1.418、4.727±1.174、5.298±1.229(F=0.987,P=0.410),FD组分别为0.546±0.450、0.804±0.428、0.679±0.283、0.846±0.453(F=1.089,P=0.366),FCD组分别为5.532±1.330、5.051±1.596、4.589±0.879、5.140±1.492(F=0.820,P=0.492)。相同血型不同处理因素组间比较红细胞计数:在FZC组与NS组间比较差异无统计学意义,说明蜂蜇草萃取对红细胞溶血无影响;而在FD组则明显低于NS组(均P<0.05),说明蜂毒对红细胞有明显的溶血作用;但在FCD组与NS组间比较红细胞计数差异也无统计学意义,说明蜂蜇草萃取拮抗蜂毒的溶血作用而不影响红细胞计数;而FCD组红细胞计数明显高于FD组(均P<0.05),进一步说明蜂蜇草萃取拮抗蜂毒的溶血作用。结论胡蜂蜂毒具有明显的溶血作用,而蜂蜇草萃取能有效拮抗蜂毒的溶血作用;蜂毒的溶血作用与人ABO血型无关。

  • 标签: 咬伤 蜇伤 蜂蜇草 蜂毒 血型 溶血
  • 简介:【摘要】目的:探讨肿瘤标志联合检测对早期非小细胞肺癌的临床诊断价值。方法:研究对象均为肺癌疾病患者,时间选自2019-2020年,总计80例,作为观察组。另外,选取同期健康体检者,作为对照组。两组患者均清晨空腹情况下采集受试者外周静脉血(4ml),以全自动电化学发光免疫分析仪以及配套电化学发光试剂检测肺癌血清肿瘤标志。记录两组受试者血清肿瘤标志水平、肿瘤标志单一检测与联合检测阳性率以及观察组不同TNM分期肿瘤标志水平。结果:观察组NSE、CEA等血清肿瘤标志水平均明显高于对照组,P

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  • 简介:摘要目的评估外周血T淋巴细胞亚群及早期炎症标志表达对老年非小细胞肺癌(NSCLC)化疗预后的影响。方法入选2015年1月至2018年12月在武汉科技大学附属孝感医院接受化疗的NSCLC患者86例为NSCLC组,另选本院常规体检的健康人群82名作为对照组,分析两组人群外周血T淋巴细胞亚群与炎症细胞的分布差异。采用Kaplan-Meier单因素生存分析不同临床参数及化疗后不同T细胞亚群和炎症细胞水平患者的生存期,采用Cox比例回归风险模型分析影响NSCLC患者预后的独立影响因素。结果与对照组比较,NSCLC组患者CD3+ (71.31±6.02比68.22±7.09)、CD4+ (40.20±5.79比36.61±7.11)、CD4+/CD8+ (1.49±0.37比1.30±0.56),CD8+ (28.43±6.37比31.79±9.88)均降低,而PLT (229.73±58.84比211.32±54.18)、淋巴细胞计数(LY) (1.67±0.61比30.01±8.45)及淋巴细胞百分比(LY﹪)(25.65﹪± 6.87﹪比30.01﹪± 8.45﹪)均升高,差异具有统计学意义(P均< 0.05)。Kaplan- Meier单因素生存分析结果显示,是否淋巴转移、远处转移及不同TNM分期的患者生存期相比,差异具有统计学意义(P均< 0.05);CD8+T细胞≥31.8﹪、CD4/CD8 < 1.28、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR) < 3.16及血小板与淋巴细胞比值(PLR) <197的患者生存期较长,差异具有统计学意义(P均< 0.05);Cox多因素生存分析结果显示,伴远处转移(HR = 9.310)、TNM分期ⅢB-Ⅳ期(HR =1.059)、CD8+T细胞< 31.8﹪ (HR = 2.697)、NLR ≥3.16 (HR = 1.887)及PLR ≥197 (HR = 2.869)是影响老年NSCLC患者预后的独立影响因素(P均< 0.05)。结论外周血CD8+T细胞、CD4/CD8比值、NLR及PLR水平是影响老年NSCLC预后的独立影响因素,可作为评估老年NSCLC患者化疗预后的简易生物标志

  • 标签: T淋巴细胞亚群 炎症标志物 非小细胞肺癌 化疗 预后
  • 简介:摘要目的探讨佛甲草提取对肾母细胞细胞的生物学行为的影响及其作用机制。方法不同浓度的佛甲草提取作用于肾母细胞细胞(美国典型菌种保藏中心)后,流式细胞术检测细胞周期,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-183表达。转染miR-183抑制剂至肾母细胞细胞下调miR-183表达后,检测细胞周期、迁移和侵袭及Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达改变。双荧光素酶报告基因验证miR-183与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)调控关系。多组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验)。结果佛甲草提取作用细胞细胞周期G0~G1期增加(F=171.952,P<0.05),S期缩短(F=229.976,P<0.05),细胞迁移和侵袭数显著减少(F=229.976、414.157,P<0.05),细胞中miR-183表达显著降低(F=524.898,P<0.05),Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(F=489.091、314.763,P<0.05),E-cadherin的蛋白表达显著升高(F=547.549,P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-183组细胞周期G0~G1期增加(t=18.177,P<0.05),S期缩短(t=17.548,P<0.05),迁移和侵袭细胞数显著减少(t=23.476、22.082,P<0.05),细胞中Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(t=24.601、22.808,P<0.05),E-cadherin的蛋白表达显著升高(t=26.833,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-183可与PTEN靶向结合。结论佛甲草提取可能通过下调miR-183表达阻滞肾母细胞细胞周期进程,抑制细胞迁移和侵袭。

  • 标签: 佛甲草 微小RNA-183 肾母细胞瘤 生物学行为
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  • 简介:摘要目的观察桑叶提取对妊娠糖尿病模型大鼠血糖及胰岛β细胞增殖的影响。方法制备妊娠糖尿病大鼠模型。32只模型大鼠按随机数字表法分为模型组、二甲双胍组、桑叶提取低剂量组和桑叶提取高剂量组,每组8只。选取8只正常孕鼠作对照,为正常组。低、高剂量组分别灌胃桑叶提取0.5、1.5 g/kg,二甲双胍组大鼠灌胃200 mg/kg盐酸二甲双胍混悬液,模型组和正常组灌胃等体积无菌生理盐水。连续干预4周。采用HE染色观察各组大鼠胰腺组织病理学改变。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖水平。采用全自动生化检测仪检测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠空腹胰岛素水平,并计算大鼠胰岛抵抗指数、胰岛素敏感指数。采用放射免疫计数器检测血清SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA水平。采用MTT法检测胰岛β细胞增殖情况。Western blot法检测周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)、磷酸化视网膜母细胞瘤基因(phosphorylated retinoblastoma, pRB)、E2F1基因编码蛋白(E2F1)表达。结果与模型组比较,桑叶提取低、高剂量组空腹血糖、TC、TG、LDL-C水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);空腹胰岛素、胰岛抵抗指数降低(P<0.05),胰岛素敏感指数升高(P<0.05);血清SOD[(360.62±27.96)U/ml、(401.62±25.66)U/ml比(293.45±31.36)U/ml]、CAT[(10.26±2.07)U/ml、(12.26±0.96)U/ml比(8.26±2.44)U/ml]、GSH-Px[(790.23±47.87)U/ml、(880.63±40.62)U/ml比(716.62±45.62)U/ml]活性升高(P<0.05),MDA[(30.89±3.28)mmol/ml、(40.42±2.06)mmol/ml比(44.85±5.33)mmol/ml]水平降低(P<0.05);造模后48、72 h,与模型组比较,桑叶提取低、高剂量组胰岛β细胞增殖率升高(P<0.01);桑叶提取低、高剂量组CDK4[(1.15±0.42)、(1.35±0.59)比(0.75±0.22)]、pRB[(1.11±0.58)、(1.54±0.64)比(0.67±0.20)]、E2F1[(1.06±0.39)、(1.27±0.18)比(0.48±0.12)]蛋白表达升高(P<0.05)。结论桑叶提取可改善妊娠糖尿病模型大鼠血糖、血脂、胰岛素水平,通过调控CDK4-pRB-E2F1通路相关蛋白,促进胰岛β细胞增殖。

  • 标签: 桑叶 提取物 糖尿病,妊娠 胰岛β细胞 细胞增殖 E2F1转录因子 大鼠