简介:目的建立一种可消除RT-PCR反应中非特异条带生成,提高PCR反应的精确度的PCR体系。方法比较普通RT-PCR反应与硫化修饰引物结合不同校正活性聚合酶对非特异性扩增的抑制能力。结果引物3′末端硫化修饰结合具有校正活性的聚合酶可特异性关闭PCR反应中引物3′末端与模板非特异结合而引起的非特异性扩增,只允许引物3′末端与模板完全匹配的延伸反应得以进行。结论利用校正聚合酶是严格模板依赖型校正活性酶的特点,将引物3′末端硫化修饰后,由于校正聚合酶在PCR延伸开始之前首先会依据模板检查引物是否完全与模板匹配,如果不匹配则将根据模板先将引物修改得和模板一致后才允许延伸的特性,而引物3′端引入抗酶切的硫化修饰后,引物与模板非特异结合将由于校正活性聚合酶长期停留在试图纠正引物与模板不一致状态而得不到有效延伸,从而只允许引物与模板完全匹配的延伸得以扩增,大大提高了PCR反应的特异性。
简介:目的构建表达Nogo受体(NgR)特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上,设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功,为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。
简介:目的检测梅毒特异抗体IgM,IgG,以了解梅毒感染的阶段,亦能观测抗梅毒治疗的效果。材料方法使用DiaSorinEIA试剂盒对69份梅毒TPHA阳性标本(2000/01-2000/06)进行梅毒特异性抗体IgG,IgM检测。结果IgG抗体阳性68例;其中IgM,IgG抗体均阳性9例;IgM抗体不确定1例;IgM,IgG抗体为阴性1例;IgM阳性IgG不确定1例。结论使用ELA方法可以直接检测抗梅毒特异抗体IgM,IgG,较传统RPR,TRUST,TPHA方法而言,能对抗体分型,能提示梅毒感染的各阶段,具有高特异性和高敏感性,对诊断、治疗更有益。
简介:目的通过CAP法检测患儿的特异性IgE,以了解其在诊断中的价值和临床意义。方法应用荧光酶联免疫法对70例哮喘儿童,13例支气管肺炎患儿和10例正常儿童进行了Phadiatop过筛试验和尘螨特异IgE检测。结果Ph—adiatop过筛试验阳性在哮喘组,支气管肺炎组和正常组分别为72.86%、15.86%和0,经统计学处理X^2=29.65(P<0.001)尘螨特异性IgE,哮喘组为68.5%,支气管肺炎组为7.69%,正常组为0,经统计处理X^2=33.64(P<0.001),哮喘患儿年龄越大,D1阳性数越多。结论Phadiatop法方法简单,实用而且安全,在哮喘诊断中起重要作用。
简介:目的探讨前列腺直肠指检和尿道膀胱镜检对血清前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen,PSA)和游离前列腺特异性抗原(freeprostatespecificantigen,FPSA)的影响.方法采用放射免疫方法对32例前列腺增生患者测定前列腺直肠指检和尿道膀胱镜检前后的血清前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen,PSA)和游离前列腺特异性抗原(FPSA)的水平变化.结果血清前列腺特异性抗原和游离前列腺特异性抗原的水平在前列腺直肠指检后分别为(3.015±1.072)ng/ml、(1.974±0.678)ng/ml,显著高于前列腺直肠指检前的水平,分别为(2.852±1.027)ng/ml、(1.724±0.596)ng/ml(P<0.005).同样,血清前列腺特异性抗原和游离前列腺特异性抗原水平在尿道膀胱镜检后分别为(3.02±0.911)ng/ml、(1.787±0.505)ng/ml,也显著高于尿道膀胱镜检前的水平,分别为(2.873±0.997)ng/ml、(1.575±0.498)ng/ml(P<0.005).结论前列腺增生患者在前列腺操作后应当给予护理干预.