简介：摘要目的探讨中性粒细胞淋巴细胞计数比值(NLR)、血小板淋巴细胞计数比值(PLR)与cN0期甲状腺微小乳头状癌(PTMC)中央区淋巴结转移(CLNM)的关系。方法收集2016—2019年解放军陆军第八十一集团军医院经手术治疗、病理证实为PTMC患者的临床病理资料，分析患者术前外周血NLR、PLR水平与术后PTMC CLNM的关系。多因素分析采用logistic回归分析，采用受试者工作特征(ROC)曲线确定NLR和PLR的临界值，采用交互作用相对超额危险度分析NLR、PLR与CLNM的关系。结果220例cN0期PTMC患者中，CLNM 92例。ROC曲线显示，NLR临界值为2.5、PLR临界值为175时，Youden指数最高，分别为0.318和0.264。NLR和PLR与CLNM均有关(均P<0.05)，肿瘤长径、肿瘤多灶性、NLR≥2.5和PLR≥175为CLNM的独立影响因素(均P<0.05)。交互作用分析结果显示，交互作用相对超额危险度为5.531(95% CI为0.160~10.901，P＝0.016)，归因比为0.512(95% CI为0.230~0.794，P＝0.009)，协同指数为2.294(95% CI为1.492~4.579，P＝0.022)，提示NLR、PLR有交互作用，二者协同促进CLNM。结论NLR和PLR为cN0期PTMC CLNM的独立危险因素，当NLR≥2.5、PLR≥175时，应常规行预防性中央区淋巴结清扫术。

简介：摘要目的探讨蛋白激酶B1(Akt1)基因介导内质网类似激酶(PERK)/真核细胞翻译启始子2α(eIF2α)信号通路参与肺癌细胞增殖及细胞凋亡的机制。方法选择人肺腺癌细胞系A549按实验转染方案随机分组，分为空白(Blank)组、沉默Akt1(si-Akt1)阴性对照(NC)组、si-Akt1组、过表达Akt1(OE-Akt1) NC组、OE-Akt1组、CCT020312(PERK选择性激动剂)组和OE-Akt1+CCT020312组。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中相关基因的mRNA和蛋白表达水平；同时分别应用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡水平。两组间比较为t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果Si-Akt1组的Akt1的mRNA(0.99±0.05比0.45±0.03，t＝16.04，P<0.05)和蛋白表达(0.32±0.03比0.12±0.01，t＝10.95，P<0.05)低于si-Akt1 NC组。si-Akt1组PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.97±0.04比1.77±0.07，t＝17.190，P<0.05；eIF2α：1.01±0.06比1.53±0.06，t＝10.610，P<0.05；GRP78：1.06±0.03比1.98±0.08，t＝18.650，P<0.05；CHOP：0.94±0.04比1.63±0.06，t＝16.570，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.15±0.05比2.23±0.11，t＝15.480，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比3.12±0.19，t＝12.230，P<0.05；GRP78：0.84±0.05比2.87±0.15，t＝22.650，P<0.05；CHOP：1.46±0.07比2.65±0.13，t＝14.400，P<0.05)明显高于si-Akt1 NC组；细胞增殖能力明显低于si-Akt1 NC组(48 h：0.48±0.03比0.31±0.02，t＝8.167，P<0.05；72 h：0.78±0.04比0.60±0.03，t＝6.235，P<0.05)，细胞凋亡率明显高于si-Akt1 NC组(8.58±1.34比23.4±2.4，t＝9.250，P<0.05)。同时，CCT020312组PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：1.00±0.04比1.87±0.08，t＝26.940，P<0.05；eIF2α：1.00±0.05比1.57±0.07，t＝11.640，P<0.05；GRP78：1.00±0.03比2.02±0.10，t＝41.640，P<0.05；CHOP：1.00±0.06比1.66±0.07，t＝20.210，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.12±0.05比2.30±0.11，t＝16.910，P<0.05；p-eIF2α：1.65±0.05比3.20±0.18，t＝13.260，P<0.05；GRP78：0.80±0.04比2.74±0.15，t＝21.640，P<0.05；CHOP：1.44±0.06比2.61±0.13，t＝14.150，P<0.05)明显高于Blank组；细胞增殖能力明显低于Blank组(48 h：0.46±0.03比0.29±0.02，t＝8.167，P<0.05；72 h：0.80±0.04比0.57±0.03，t＝7.967，P<0.05)，细胞凋亡率明显高于Blank组和相应NC组(8.71±1.44比23.43±2.36，t＝9.222，P<0.05)。然而，OE-Akt1组的Akt1的mRNA(0.99±0.05比1.88±0.09，t＝14.970，P<0.05)和蛋白表达(0.31±0.03比0.87±0.04，t＝19.400，P<0.05)明显高于OE-Akt1 NC组，PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.98±0.05比0.65±0.05，t＝8.656，P<0.05；eIF2α：1.03±0.05比0.47±0.04，t＝12.970，P<0.05；GRP78：1.2±0.04比0.32±0.03，t＝30.210，P<0.05；CHOP：0.99±0.03比0.55±0.04，t＝11.940，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.16±0.05比0.99±0.05，t＝4.164，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比1.23±0.07，t＝8.642，P<0.05；GRP78：0.86±0.04比0.34±0.02，t＝20.140，P<0.05；CHOP：1.48±0.06比0.71±0.04，t＝19.880，P<0.05)明显低于OE-Akt1 NC组，细胞增殖能力(48 h：0.45±0.03比0.60±0.02，t＝7.206，P<0.05；72 h：0.76±0.04比0.97±0.05，t＝5.681，P<0.05)明显高于OE-Akt1 NC组，细胞凋亡率(8.62±1.32比4.36±0.75，t＝4.860，P<0.05)明显低于OE-Akt1 NC组(均值P<0.05)。结论沉默Akt1表达可通过促进PERK/eIF2α信号通路的激活，进而抑制肺癌细胞增殖，促进其凋亡。

简介：摘要目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、骨形态发生蛋白(BMP)-12基因序贯转染兔脂肪干细胞向成纤维细胞分化的可能性。方法2017年1月至2018年12月，原代培养兔脂肪干细胞(取自新西兰大耳兔颈背部皮下脂肪)，细胞表面抗原CD44、CD49d、CD106检测结合成骨细胞诱导分化对培养的细胞进行鉴定，脂质体介导的方法序贯转染BMP-12和bFGF基因，蛋白质印迹法(Western blot)检测目的基因BMP-12和bFGF蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染细胞Ⅰ型胶原和弹性蛋白RNA的表达情况。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示，应用单因素方差分析比较组间差异。结果兔脂肪组织中分离出来的脂肪间充质干细胞(ADSCs) CD44、CD49d表达阳性，CD106表达呈阴性。Western blot检测筛选后的ADSCs稳定表达BMP-12(0.229±0.005)和bFGF(0.208±0.019)蛋白(F＝120.221，P<0.05)，差异有统计学意义。双基因转染的ADSCsⅠ型胶原(2.250±0.007，F＝340.103，P<0.05)和弹性蛋白(1.807±0.008，F＝107.314，P<0.05)的mRNA表达最高，差异均有统计学意义。结论pcDNA3.1＋绿色荧光蛋白(GFP)-BMP-12和pcDNA3.1＋红色荧光蛋白(RFP)-bFGF可以促进ADSCs向成纤维细胞分化，可能在组织工程技术修复韧带损伤中具有重要作用。

简介：摘要:目的：选择具有肿瘤归巢能力的人脐带间充质干细胞（MSCs）作为细胞载体，携带溶瘤病毒3型呼肠孤病毒（Reovirus3）。 研究了细胞培养体系中相关细胞因子对携带呼肠孤病毒3的MSCs杀伤K562细胞的影响，用携带呼肠孤病毒3的K562细胞进行培养，为用细胞因子或支持性携带呼肠孤病毒3的MSCs治疗慢性粒细胞白血病提供了依据。方法：通过体外试验从脐带中分离培养MSCs，对数生长期的MSCs负载呼肠孤病毒3，用对数生长期的K562细胞进行体外细胞培养，分为对照组:K562细胞；MSCs组:K562细胞+MSCs； Revirus3组（阳性对照组）:K562细胞+Revirus3；实验:K562细胞+呼肠孤病毒3+MSCs。细胞共培养24，48，72h，收集各组细胞培养上清液，采用ELISA双抗体夹心法检测肿瘤坏死因子(TNF)，干扰素(IFN)，转化生长因子(TGF)，白细胞介素(IL)-2，IL-4，IL-5，IL-6和IL-17。结果：培养24，48，72h后，MSCs组和实验组TGF，IL-6水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）； 培养48h后MSCs组，Reovi-Rus3组和实验组TNF，IFN，IL-2，IL-4水平虽高于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。 4组培养48h后细胞培养上清中均未检出IL-5IL-17； 4组培养24h和72h后细胞培养上清中均未检出TNF，IFN，IL-2，IL-4，IL-5和IL-17。结论：MSCs携带呼肠孤病毒3在体外测试的细胞培养体系中有效抑制K562细胞，除溶瘤病毒呼肠孤病毒3的溶瘤作用外，还可能与培养体系中的细胞因子有关，细胞因子促进细胞凋亡，从而抑制K562细胞的增殖。

简介：摘要目的探讨克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)突变亚型对非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)和2(PD-L2)的表达影响。方法纳入2018年1月至2021年1月甘肃省肿瘤医院收治的KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例，通过测序检测KRAS基因组序列，通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹检测PD-L1和PD-L2的表达。使用成簇的规则间隔的短回文重复基因编辑(CRISPR/CAS9)技术构建KRAS缺失型A549细胞，在敲除株中过表达KRAS野生型和突变型，检测其对PD-L1和PD-L2的表达影响。将KRAS野生型和突变型过表达的KRAS敲除人肺泡上皮细胞549(A549)细胞株与树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)，通过流式细胞术检测群集行列式蛋白3阳性(CD3+)细胞的凋亡水平。使用t检验比较连续变量。使用Mann-Whitney检验分析KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2。Chi-square检验分析非小细胞肺癌患者KRAS突变型和KRAS野生型的临床特征。结果纳入KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例，KRAS野生型31例、KRAS突变型64例；其中KRAS第12位甘氨酸突变为天冬氨酸(G12D)13例、突变为缬氨酸(G12V)12例、突变为半胱氨酸(G12C)25例、突变为丙氨酸(G12A)14例。KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2的mRNA表达水平(1.062比1.834，U＝38；1.062比1.668，U＝70；1.062比1.544，U＝111；1.062比1.479，U＝89，P<0.05；1.067比1.798，U＝68；1.067比1.595，U＝86；1.067比1.527，U＝171；1.067比1.680，U＝34，P<0.05)和蛋白表达水平均高于KRAS野生型患者，差异有统计学意义。在KRAS敲除A549细胞株中，相较于KRAS野生型，KRAS突变型更能够促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达同时，将KRAS-G12D，KRAS-G12V，KRAS-G12C，KRAS-G12A质粒混合在一起作为RAS野生型(KRAS-MT)与KRAS突变型(KRAS-WT)分别转染KRAS敲除A549细胞株，KRAS-MT依旧可以促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达。在KRAS敲除A549细胞株中过表达KRAS-MT与KRAS-WT后，KRAS突变亚型不能激活细胞外信号调节激酶(ERK)通路，但是可以激活丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路。AKT抑制剂处理后，KRAS-MT与KRAS-WT转染KRAS敲除A549细胞株的PD-L1和PD-L2的表达差异无统计学意义。将转染了KRAS-MT或KRAS-WT的KRAS KO A549细胞株与DC-CIK以1∶1的比例共培养，随后检测DC-CIK细胞的凋亡水平，发现KRAS-MT能够显著增加DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡(F＝12.5，P<0.05)，差异有统计学意义。结论KRAS突变亚型能够显著增强非小细胞肺癌细胞PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达，并且能够促进免疫细胞DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡。

简介：摘要目的探讨中性粒细胞与淋巴细胞和血小板比值（neutrophil to lymphocyte and platelet ratio，NLPR）在老年脓毒症患者中对急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）诊断和预后的临床价值。方法回顾性分析武汉大学中南医院重症监护室（intensive care unit，ICU）收治的360例老年脓毒症患者的临床资料，根据KDIGO-AKI标准将患者分为急性肾损伤组（AKI组）和非急性肾损伤组（NAKI组）,通过Logistic回归分析寻找AKI的独立危险因素，并使用受试者工作特征（ROC）曲线评价NLPR对AKI与临床预后的诊断效能。结果纳入患者中AKI组195例，NAKI组165例，AKI发病率为54.2%，AKI组NLPR显著高于NAKI组，差异有统计学意义（Z=8.640，P<0.001）。与NAKI组相比，AKI组院内病死率及ICU的住院时间均增加（均P<0.05），合并AKI的患者院内需要更多的机械通气、血管活性药物和肾脏替代治疗维持（均P<0.05）。在校正了人口统计学和临床变量等指标后，多因素Logistic回归分析显示：NLPR（OR=1.016，95%CI 1.002~1.030，P=0.027）是老年脓毒症AKI的独立危险因素。ROC曲线显示了NLPR对AKI诊断和预后具有较好的临床价值，且优于中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil to lymphocyte ratio，NLR）和传统血清肌酐指标。此外，相关性分析发现NLPR与AKI分期也具有较好的相关性（r=0.525，P<0.001）。结论NLPR作为一种新型炎症指标，来源于全血细胞计数，检测简便易于获得，是老年脓毒症AKI的独立危险因素，可在临床实践中给予关注。

简介：无

简介：摘要目的探讨噬血细胞综合征[又称噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（HLH）]对EB病毒（EBV）阳性T细胞淋巴瘤（TCL）患者临床特征及治疗效果的影响。方法回顾性分析2015年11月至2020年8月于广州医科大学附属第一医院经病理检查确诊的23例EBV-TCL患者临床资料。按发病时是否伴HLH分为HLH组（10例）和非HLH组（13例），比较两组患者临床特征及预后。比较不同治疗方式、血浆EBV-DNA定量患者的疗效。结果23例患者中，Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅱ期3例（13.0%），Ⅲ~Ⅳ期20例（87.0%）；国际预后指数（IPI）评分1分3例（13.0%），2分4例（17.4%），3分8例（34.8%），4分8例（34.8%）。HLH组中侵袭性NK细胞白血病2例，儿童系统性EBV-TCL 3例，非HLH组无这两种病理类型患者。HLH组中发热、骨髓侵犯、IPI评分>2分、EBV-DNA>104拷贝/ml患者均多于非HLH组（均P<0.05）。所有患者化疗后客观缓解（完全缓解+部分缓解）率为47.8%（11/23）；HLH组和非HLH组均有3例行造血干细胞移植，且均获得客观缓解；HLH组和非HLH组未行造血干细胞移植的7例和10例患者经过淋巴瘤方案化疗后，客观缓解分别为0例和5例，差异有统计学意义（P＝0.044）。单纯化疗组17例患者中客观缓解5例，化疗+移植组6例患者均客观缓解，差异有统计学意义（P＝0.039）。血浆EBV-DNA定量转阴的16例患者中客观缓解11例，持续阳性的7例患者均未客观缓解，差异有统计学意义（P＝0.001）。所有患者1年总生存率为69.3%，2年总生存率为52.0%。HLH组中7例单纯化疗患者和3例化疗+移植患者的1、2年总生存率均分别为42.9%和66.7%。非HLH组中10例单纯化疗患者和3例化疗+移植患者的1年总生存率分别为80.0%和100.0%，2年总生存率分别为26.7%和100.0%。两组中化疗+移植患者的总生存均优于单纯化疗患者，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论EBV-TCL患者总体临床分期较晚，伴HLH的患者预后更差，治疗效果可能与血浆EBV-DNA定量相关。造血干细胞移植能提高缓解率。

简介：摘要CD19嵌合抗原受体T细胞疗法是治疗B细胞血液肿瘤的新兴免疫疗法，并取得了较好的疗效。随着其使用的增加，免疫效应细胞相关细胞因子释放综合征的发生率也相应升高，迫切需要对其精确机制和治疗进行进一步的临床研究。文章总结了细胞因子释放综合征的机制、临床表现、分级系统、治疗以及管理策略。

简介：摘要目的探讨人骨髓间充质干细胞（MSC）对人气道上皮细胞激素抵抗的影响。方法通过卵清白蛋白（OVA）/脂多糖（LPS）在BEAS-2B细胞上构建激素抵抗模型，将人骨髓MSC与BEAS-2B细胞进行共培养。分为空白组、模型组、激素组、间充质干细胞组（MSC组）、间充质干细胞+激素组（MSC+bud组）。ELISA法检测细胞上清液IL-8表达；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）表达；Western blot检测组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）、糖皮质激素受体α（GRα）蛋白表达；RT-PCR检测GRα、HDAC2 mRNA表达。结果MSC组IL-8的表达水平（31.7±0.7）明显低于激素组（49.8±3.6），差异有统计学意义（P<0.01）；MSC组ROS的表达水平（2754±154）明显低于激素组（4624±228），差异有统计学意义（P<0.05）；MSC组HDAC2 mRNA的表达水平（1.749±0.005）明显高于激素组（1.283±0.098），差异有统计学意义（P<0.05）；MSC组GRα mRNA的表达水平（1.623±0.079）明显高于激素组（1.047±0.220），差异有统计学意义（P<0.01）；MSC组HDAC2蛋白的表达水平（1.067±0.100）明显高于激素组（0.620±0.083），差异有统计学意义（P<0.01）；MSC组GRα蛋白的表达水平（0.834±0.053）明显高于激素组（0.579±0.017），差异有统计学意义（P<0.01）；ROS与IL-8表达呈正相关（r=0.796，P<0.01），与HDAC2和GRα mRNA表达呈负相关（r=-0.893 3，P<0.01；r=0.931 4，P<0.01）；与HDAC2和GRα蛋白表达呈负相关（r=-0.929 5，P<0.01；r=-0.864 3，P<0.01）。结论人骨髓MSC可通过外分泌的方式改善BEAS-2B细胞的激素抵抗，其机制可能与降低细胞内ROS表达，提高HDAC2表达，进而提高GRα表达有关；MSC还可通过降低IL-8表达，从而改善激素抵抗。

简介：无

简介：摘要目的探讨卵巢纤维-卵泡膜细胞肿瘤与成人型卵巢颗粒细胞瘤(OGCT)的MRI特点。方法回顾性研究。纳入2014年6月—2020年12月镇江市第四人民医院经手术病理证实的25例卵巢肿瘤患者的MRI资料。其中，20例卵巢纤维-卵泡膜细胞肿瘤(卵巢纤维瘤7例、纤维卵泡膜细胞瘤5例、卵泡膜细胞瘤8例)，年龄26~75岁；5例成人型OGCT患者，年龄34~58岁。患者术前均行MRI平扫、弥散加权成像(DWI)及增强检查。观察指标：(1)分析肿瘤的位置、大小、形态、边缘、信号及强化表现等；(2)比较纤维瘤、卵泡膜细胞瘤及成人型OGCT的平均强化率、DWI征象及其表观弥散系数(ADC)。结果(1)20例卵巢纤维-卵泡膜细胞肿瘤中，位于右侧卵巢9例、左侧11例，肿瘤边界清晰，类圆形14例、分叶状或不规则形6例，最大径2.0~12.3 cm。T1加权像(T1WI)均呈等信号，T2加权像(T2WI)卵泡膜细胞瘤呈高或稍高信号、纤维卵泡膜细胞瘤呈高低混杂信号、纤维瘤呈低信号；其中3例纤维-卵泡膜细胞肿瘤局部囊性变，囊性部分T1WI呈低信号、T2WI呈高信号。纤维瘤多为弱强化表现(6/7)、卵泡膜细胞瘤多为中度强化表现(6/8)。5例成人型OGCT中，位于右侧卵巢3例、左侧2例，边界清楚，圆形或卵圆形，最大径3.0~9.7 cm；均为囊实性肿块，T1WI呈等低信号、T2WI呈混杂高信号，内见多发大小不等囊腔，囊内壁尚光整，实性部分为明显强化。(2)成人型OGCT强化率高于卵泡膜细胞瘤，卵泡膜细胞瘤强化率高于纤维瘤，分别为123.70%±5.44%、89.23%±4.19%、43.50%±6.33%，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。DWI征象：卵泡膜细胞瘤呈高信号，纤维瘤呈低信号，成人型OGCT实性部分呈高信号、囊性部分呈低信号。卵泡膜细胞瘤ADC值为(1.28±0.25)×10-3 mm2/s，高于成人型OGCT实性部分ADC值(0.91±0.18)×10-3 mm2/s，成人型OGCT实性部分ADC值高于纤维瘤ADC值(0.67±0.14)×10-3 mm2/s，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论纤维-卵泡膜细胞肿瘤与成人型OGCT的MR T2WI信号及强化表现具有不同的特点，其DWI征象可为两者的鉴别诊断提供帮助。

简介：摘要目的探讨急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）和辅助性T细胞17（Th17）的表达情况及其比值变化规律。方法选取2017年2月至2019年10月首都儿科研究所附属儿童医院初发急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿54例为研究对象，年龄4.9（3.1，7.4）岁。分为治疗前组和治疗后组，治疗后根据疾病转归分为完全缓解组45例，复发/难治组9例，选取20名查体儿童为对照组。运用流式细胞术（FCM）分别检测B-ALL患儿治疗前后和查体儿童外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的比例，并计算Treg/Th17细胞比值。在治疗前后分别比较复发/难治组、完全缓解组和对照组之间Treg、Th17细胞比例及Treg/Th17比值。分别比较完全缓解组和复发/难治组同一患儿治疗前后检测指标差异。结果B-ALL患儿治疗前，复发/难治组和完全缓解组外周血Treg细胞比例（分别为6.11±0.48，6.20±1.16）高于对照组（4.89±1.46），Treg/Th17细胞比值（分别为8.34±2.14，5.91±1.92）高于对照组（3.55±1.68），复发/难治组外周血Treg/Th17细胞比值高于完全缓解组，其差异均有统计学意义（P<0.05）。B-ALL患儿治疗后，复发/难治组外周血Treg细胞比例（6.09±0.80）高于完全缓解组（5.25±0.87）及对照组（4.89±1.46），Treg/Th17细胞比值（7.37±1.19）高于完全缓解组（4.22±1.50）及对照组（3.55±1.68），其差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后，完全缓解组患儿外周血Treg细胞比例及Treg/Th17细胞比值均低于治疗前，Th17细胞比例（1.38±0.49）高于治疗前（1.14±0.39），其差异均有统计学意义（P<0.05）。复发/难治组外周血Treg细胞及Treg/Th17细胞比率与治疗前比较，其差异均无统计学意义（P>0.05）。结论B-ALL患儿外周血存在CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞升高和Th17细胞比例降低所致的Treg/Th17细胞比值改变，随疾病的缓解而趋于正常。定期检测Treg细胞及Th17细胞比例有助于对B-ALL患儿进行免疫状态监测及预后判断，可能为B-ALL的免疫治疗提供依据。

简介：摘要目的寻找内毒素耐受（ET）的潜在关键基因，为脓毒症的治疗提供理论和实验依据。方法①实验1（基因芯片与生物信息分析）：从基因表达数据库（GEO）中下载ET相关基因数据集GSE47783，该数据集由脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞建立脓毒症模型（LPS组）和ET模型（ET组）后进行实验获得；利用IDEP 0.92软件筛选数据集中两组差异表达基因（DEG），同时进行基因本体（GO）分析，并定位DEG主要富集的功能和信号通路。利用基因与蛋白质相互作用检索数据库（STRING），针对DEG构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，筛选出核心基因甲型肝炎病毒细胞膜蛋白受体2（HAVCR2）进行后续验证研究。②实验2（小鼠巨噬细胞株RAW264.7模型制备）：体外培养RAW264.7细胞，通过LPS刺激制备ET模型（ET组，用10 μg/L的LPS培养24 h后，再用100 μg/L的LPS培养4 h）和脓毒症模型（LPS组，用100 μg/L的LPS培养4 h）；磷酸盐缓冲液（PBS）组给予等体积溶媒PBS培养4 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞HAVCR2的mRNA及蛋白表达。③实验3（HAVCR2慢病毒载体转染RAW264.7细胞）：为进一步明确HAVCR2是否参与ET形成，用慢病毒短发夹RNA（shRNA）技术敲低RAW264.7细胞中的HAVCR2后，再制备ET模型（HAVCR2--ET组），并设非敲低HAVCR2的对照组（ET组）。采用RT-qPCR法检测细胞中巨噬细胞极化关键基因〔精氨酸酶1（ARG1）、CD206、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶2（NOS2）〕的mRNA表达。结果①实验1：共获得1 013个DEG；与LPS组比较，ET组有521个上调基因，492个下调基因；这些DEG的功能主要为增加生物合成、抑制炎症反应，主要富集于Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）、NOD样受体、Toll样受体（TLR）、TNF、缺氧诱导因子-1（HIF-1）等信号通路。选择ET组第一个表达上调的膜蛋白HAVCR2作为验证研究的目标。②实验2：体外实验结果显示，经大剂量LPS处理后，RAW264.7细胞中HAVCR2 mRNA表达较PBS组明显下调；而ET组HAVCR2 mRNA表达明显高于LPS组（2-ΔΔCT：1.10±0.10比0.60±0.10，P<0.05）；Western blotting检测结果与RT-qPCR结果一致。③实验3：与ET组相比，HAVCR2--ET组细胞ARG1和CD206的mRMA表达明显降低〔ARG1 mRNA（2-ΔΔCT）：0.50±0.10比1.00±0.10，CD206 mRNA（2-ΔΔCT）：0.73±0.10比1.00±0.10〕，下游因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达明显升高〔TNF-α mRNA（2-ΔΔCT）：2.20±0.10比1.00±0.10，IL-1β mRNA（2-ΔΔCT）：9.00±0.10比1.00±0.10〕，差异均有统计学意义（均P<0.05）；两组NOS2 mRNA表达差异无统计学意义。结论HAVCR2参与脓毒症下游炎性因子的调节，参与ET的形成，有望成为脓毒症新的治疗靶点。

简介：摘要目的探讨中性粒细胞颗粒蛋白（NGP）对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的影响及其调控机制。方法体外培养NGP高表达小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞（NGP/RAW）、阴性对照空载体RAW264.7细胞（NC/RAW）、NGP敲除RAW264.7细胞（NGP KO/RAW）和野生型RAW264.7细胞（WT/RAW），取对数生长期细胞分别给予10 mg/L的LPS（LPS组）或磷酸盐缓冲液（PBS组）进行刺激。用Griess方法检测上清中NO含量；用定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测iNOS蛋白及磷酸化转录激活因子1（p-STAT1）蛋白表达。结果与PBS组相比，在LPS刺激后各时间点，4组细胞中iNOS mRNA表达和NO产生量均明显增加，iNOS mRNA表达于LPS刺激后12 h达峰值（2-ΔΔCt：NC/RAW细胞为38.45±1.34比1.00±0.00，NGP/RAW细胞为56.24±2.41比1.45±0.30，WT/RAW细胞为37.84±1.52比1.00±0.00，NGP KO/RAW细胞为5.47±0.62比0.98±0.40，均P<0.05），NO产生量于LPS刺激后24 h达峰值（μmol/L：NC/RAW细胞为24.15±1.26比0.15±0.04，NGP/RAW细胞为58.80±2.11比0.18±0.02，WT/RAW细胞为25.04±1.80比0.16±0.02，NGP KO/RAW细胞为2.42±0.38比0.12±0.03，均P<0.05）。给予LPS刺激后，NGP/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较NC/RAW细胞明显增加〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为8.42±0.59比4.63±0.37，6 h为27.16±1.60比14.25±1.02，12 h为56.24±2.41比38.45±1.34；NO（μmol/L）：6 h为4.12±0.25比2.23±0.17，12 h为16.50±1.52比6.35±0.39，24 h为58.80±2.11比24.15±1.26，均P<0.05〕；同时，p-STAT1和iNOS蛋白表达明显增强（p-STAT1/GAPDH：0 h为4.26±1.84比1.00±0.32，2 h为20.59±4.97比0.93±0.21，6 h为141.99±10.99比11.17±2.11；iNOS/GAPDH：0 h为1.27±0.86比1.00±0.22，2 h为7.94±1.94比2.01±0.92，6 h为24.24±4.88比3.72±1.11，均P<0.05），说明NGP可以通过促进转录激活因子1（STAT1）通路磷酸化来增加iNOS表达，进而使NO生成增多。LPS刺激后，NGP KO/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较WT/RAW细胞明显减少〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为2.46±0.31比4.22±0.18，6 h为3.61±0.44比13.02±1.34，12 h为5.47±0.62比37.84±1.52；NO（μmol/L）：6 h为1.22±0.19比2.01±0.12，12 h为1.60±0.44比5.15±0.62，24 h为2.42±0.38比25.04±1.80，均P<0.05〕。说明NGP敲除后iNOS活化减少，进而使NO生成减少。结论NGP可通过激活STAT1/iNOS通路正向调控活化巨噬细胞中NO的生成。

简介：摘要目的探讨miRNA-618（miR-618）对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测miR-618在THP-1细胞和健康人外周血分离的单核细胞中的相对表达量。构建过表达miR-618质粒载体，以空载体作为阴性对照，将二者分别转染THP-1细胞，设定为miR-618过表达组和阴性对照组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。采用TargetScan软件预测miR-618靶基因，通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证。采用蛋白质印迹法检测miR-618过表达组或阴性对照组的THP-1细胞和健康人外周血单核细胞中预测的miR-618靶基因蛋白表达的水平。结果PCR结果显示，与健康人外周血分离的单核细胞相比，THP-1细胞中miR-618表达量低（P<0.05）。CCK-8法检测结果显示，与阴性对照组比较，miR-618过表达组THP-1细胞增殖能力降低（转染0、24、48、72 h细胞吸光度值：0.20±0.03比0.20±0.03、0.28±0.02比0.35±0.03、0.34±0.03比0.43±0.04、0.39±0.02比0.53±0.05，均P<0.05），细胞晚期凋亡率升高[（27.1±0.1）%比（14.9±0.1）%，t=2.13，P=0.03]。TargetScan软件预测miR-618靶基因为ARPP19。荧光素酶报告基因实验结果显示，转染野生型ARPP19基因质粒+ miR-618基因质粒组的THP-1细胞相对荧光素酶活性均高于空白对照组和转染野生型ARPP19基因质粒+ miR-618空载质粒组（0.170±0.003比0.100±0.004、0.100±0.001，均P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，miR-618过表达组THP-1细胞ARPP19蛋白表达水平低于阴性对照组，而两组健康人外周血单核细胞中ARPP19蛋白表达水平相近。结论miR-618可能通过抑制急性单核细胞白血病THP-1细胞ARPP19的表达而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。

简介：摘要目的研究lncRNA MALAT1通过靶向miR-200a对非小细胞肺癌细胞增殖的影响。方法选取2016年1月至2019年6月在咸宁市中心医院手术切除的90例非小细胞肺癌患者进行前瞻性研究。将肺癌细胞A549进行传代培养、转染，根据转染的方式不同分为sh-Ctrl组、sh-MALAT1组、miR-200a-mimic组、miR-200a-inhibitor组、sh-MALAT1+miR-200a-inhibitor组和sh-MALAT1+miR-200a-mimic组。采用实时荧光定量PCR检测肺癌组织和细胞中MALAT1、miR-200a表达；MTT法检测A549细胞增殖，流式细胞仪检测A549细胞凋亡；双荧光素酶报告基因法检测MALAT1与miR-200a。结果非小细胞肺癌组织MALAT1相对表达水平高于癌旁组织(t＝4.589，P<0.001)。与sh-Ctrl组相比，sh-MALAT1组MALAT1表达水平降低(t＝4.954，P<0.001)；sh-MALAT1组miR-200a表达水平升高(t＝7.908，P<0.001)，miR-200a-inhibitor组miR-200a表达水平降低(t＝5.187，P<0.001)，sh-MALAT1+miR-200a-inhibitor组sh-MALAT1表达水平降低(t＝8.571，P<0.001)，miR-200a表达水平显著升高(t＝5.284，P<0.001)。荧光素酶实验结果显示：与sh-Ctrl组相比，miR-200a-mimic组的荧光素酶活性明显下降(t＝4.536，P<0.001)；而sh-MALAT1组和sh-MALAT+miR-200a-mimic组的荧光素酶活性无明显变化(t＝0.247，P＝0.834)。与sh-Ctrl组相比，sh-MALAT1组细胞增殖率降低(t＝4.158，P<0.001)；与sh-MALAT1组相比，sh-MALAT1+miR-200a-inhibitor组细胞增殖率增加(t＝3.895，P＝0.001)。与sh-Ctrl组相比，sh-MALAT1组细胞凋亡率升高(t＝5.012，P<0.001)，miR-200a-inhibitor组细胞凋亡率降低(t＝3.861，P＝0.001)；与sh-MALAT1+miR-200a-inhibitor组相比，sh-MALAT1组细胞凋亡率升高(t＝3.748，P＝0.001)，miR-200a-inhibitor组细胞凋亡率下降(t＝4.703，P<0.001)。结论抑制lncRNA MALAT1的表达，可靶向miR-200a发挥抑制非小细胞肺癌增殖、促进凋亡的生物学作用。

简介：摘要目的分析慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患儿初诊时即表现为急变期的临床特征。方法以中国医学科学院血液病医院儿科收治的以急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia，ALL)为首诊的2例CML患儿为研究对象。收集患儿病史、体格检查资料及骨髓检查、基因检查等结果，并对2例患儿进行随访。同时，以"儿童""慢性粒细胞白血病""急变期""急性淋巴细胞白血病""BCR/ABL"为关键词，检索2000年1月至2020年5月万方数据库、中国知网，以"chronic myelogenous leukemia""children""acute lymphoblastic leukemia""blast crisis""BCR-ABL"为关键词，检索2000年1月至2020年5月美国国立图书馆(PubMed)数据库。结果2例患儿发病时的临床症状分别表现为头痛、视物模糊以及发热、腹痛等，既往均不存在CML病史。通过骨髓涂片、荧光原位杂交、分子生物学等实验室检查诊断为CML急变期。治疗上应用达沙替尼口服联合化疗进行诱导缓解，但是2例患儿分别在诱导和巩固化疗阶段出现了严重的并发症，最终均取得了血液学的缓解，其中例2达到分子生物学缓解，但是2例患儿均在诊断后9～10个月出现了疾病复发。通过文献检索，检测到2篇中文文献，5篇英文文献，共22例患儿。其中最大宗的文献报道了17例初诊即为CML-急变期的患儿，14例采用酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors，TKI)联合化疗，3例仅采用TKI单药治疗。17例中，有11例接受造血干细胞移植治疗，最终13例存活(5年生存率74%)，4例死亡，中位随访28个月(范围16～78个月)。结论以ALL为首诊的儿童CML与费城染色体阳性ALL临床表现十分相似，可以通过骨髓涂片、荧光原位杂交等检测方法与ALL进行鉴别。治疗上可应用二代TKI联合化疗诱导缓解以取得血液学缓解，对二代TKI治疗失败的患者，可以寻找HLA匹配的供者。此类患儿可能出现迅速复发，需密切监测治疗效果。

简介：摘要目的研究皮肤黑素瘤细胞与血管内皮细胞间VEGF-IL-6-STAT3信号交互作用机制。方法将血管内皮细胞EC-304分成3组：对照组，常规培养；血管内皮生长因子（VEGF）组，在含VEGF165（50 μg/L）的内皮细胞培养基中培养；A375共培养组，与黑素瘤细胞A375共培养。24 h、48 h、72 h后收集培养液，酶联免疫吸附实验检测白细胞介素6（IL-6）的分泌量。将A375细胞分为4组：对照组，常规培养；A375+ EC-304组，与EC-304共培养；A375+ EC-304+ IL-6组：与EC-304细胞在含STAT3通路激动剂IL-6（50 μg/L）的DMEM中共培养；A375+ EC-304+ JSI-124组：与EC-304在含STAT3通路抑制剂JSI-124（1 μmol/L）的DMEM中共培养。分别在24 h、48 h、72 h后收集细胞，用Western印迹、CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞增殖活性及侵袭活性。采用双因素方差分析及t检验统计分析数据。结果与对照组比较，VEGF组、A375共培养组EC-304培养基中IL-6分泌量均升高（FVEGF = 29.63，P < 0.001；FA375 = 11.09，P = 0.020）。与对照组比较，A375+ EC-304组A375细胞p-STAT3蛋白表达升高（P < 0.001），细胞活性增强（P < 0.001），侵袭细胞数从（86.13 ± 7.24）个增加到（152.66 ± 16.04）个（t= 4.43，P < 0.001）；与A375+ EC-304组比较，A375+ EC-304+ IL-6组细胞p-STAT3蛋白表达升高（P < 0.001），细胞活性增强（P < 0.001），侵袭细胞数量增加至（187.34 ± 14.38）个（t= 2.17，P < 0.001）；与A375+ EC-304组比较，A375+ EC-304+ JSI-124组细胞的p-STAT3蛋白表达降低（P < 0.001），细胞活性减弱（P < 0.001），侵袭细胞数减少至（124.92 ± 8.72）个（t=-1.86，P < 0.001）。结论皮肤黑素瘤A375细胞与血管内皮细胞之间存在VEGF-IL-6-STAT3信号交互作用机制，这种机制可促进A375细胞的增殖和侵袭。

简介：摘要目的建立一种基于流式细胞术快速定量分析小鼠角膜组织中嗜中性粒细胞的技术和方法。方法选取6～8周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠15只，使用高尔夫样刀机械性刮除小鼠角膜上皮细胞层，生成直径2 mm的创面，在创伤后18 h切除带有完整角膜缘的小鼠角膜，采用胶原酶I和DNA酶联合消化法获得单细胞悬液，采用FACSCanto流式细胞分析仪画门技术分选角膜细胞中嗜中性粒细胞的数量。另取6只小鼠，应用随机数字表法分为创伤组和正常组，每组3只，使用抗CD45、Ly6G和CD11b荧光抗体进行角膜细胞染色，计数并比较未创伤和创伤角膜中嗜中性粒细胞的数量变化。结果建立流式细胞仪检测角膜组织中嗜中性粒细胞的分析流程。CD45＋细胞占角膜组织所有细胞的比例为(20.93±1.72)%，在角膜CD45＋细胞群中可分选出Ly6G＋ CD11b＋双阳性嗜中性粒细胞群，Ly6G＋和CD11b＋细胞在CD45＋细胞中所占比例分别为(75.50±3.25)%和(93.40±4.53)%，Ly6G＋和CD11b＋共阳性细胞占角膜组织CD45＋细胞的比例为(67.33±2.80)%。创伤后18 h，角膜中角膜缘募集嗜中性粒细胞数量为(151.47±10.82)%，多于正常角膜的(15.36±1.02)%，差异有统计学意义(t＝21.689，P<0.01)。结论流式细胞检测方法可快速、准确地定量分析创伤角膜中嗜中性粒细胞群，为进一步评价不同原因造成角膜炎症反应中嗜中性粒细胞的数量变化提供了一种快速定量分析方法。