简介:Toevaluatetheeffectofadenovirus-mediatedp53gene(Adp53)onapoptosisandradiosensitivityofhumangastriccarcinomacelllines.Methods:Recombinantadenovirusexpressingwild-typep53lineswithdifferentp53geneticstatus.p53proteinexpressionwasdetectedbyimmunohistochemistryassayandwesternblotassay.Cellsurvivalwasassessedusingaclonogenicassay.TUNELassaywasusedindeterminationofapoptosis.FourhumangastriccarcinomacellsinfectedwithAdp53wereirradiatedwith4GyandcellcycledistributionandSub-G1peakwereassayedbyflowcytometry.Results:G2/Marrest,apoptosisandinhibitionoftumorcellproliferationwereinducedbyinfectionatAdp53at100MOIwhichcausedhightransferrateofwild-typep53andstrongexpressionofp53proteininfourhumangastriccarcinomacells.Theradio-enhancementratioofAdp53at4Gywere3.0forWcell,3.6forMcell,2.2forneocelland2.5for823cellinvitro.Conclusion:ThisstudydemonstratedthatAdp53transferincreasedcellularapoptosisandradiosensitivityofhumangastriccarcinomacelllinesinvitroindependentlyoncellularintrinsicp53statusthussupportingthecombinationofp53genetherapywithradiotherapyinclinicaltrials.
简介:目的选择弓形虫RH株主要表面抗原P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素A2/B亚基共同构建在同一真核表达载体pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确.方法用PCR技术分别从弓形虫RH株基因组DNA和pUAB024-CTXA28/B质粒中扩增编码P30、P22基因片段和CTXA2/B,定向重组入pUC18克隆载体,然后酶切释放P30-P22-CTXA2/B复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉索的LB培养基筛选、酶切及测序鉴定.结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和CTXA2/B基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确.结论成功地构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白P30-P22-CTXAA/B在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础.
简介:目的探讨p185、p170、Ki-67和CD44V6表达与原发性乳腺癌分期、淋巴结转移和预后的关系。方法采用免疫组化S-P法对160例原发性乳腺癌组织进行p185、p170、Ki-67和CD44V6的检测。结果随着肿瘤分期的提高,p185、p170、Ki-67和CD44V6的阳性表达均明显增加。p185、Ki-67和CD44V6表达在腋窝淋巴结转移病例明显高于无腋窝淋巴结转移病例(P<0.05或P<0.001),p170表达在转移组亦有增高趋势(X2=2.4)。4种标志物在死亡组病例的表达高于生存组(P<0.05或P<0.001)。结论p185、p170、Ki-67和CD44V6联合检测对于判断乳腺癌预后和指导治疗有实用价值。
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简介:CytoehromeP450norgenewasclonedintotheexpressionvectorpET-28toyieldtherecombinantexpressionplasmidpET-P450nor,whichcoulddirectthesynthesisofaeukaryoticderivedproteininEscherichiacoliBL21.Thevectorallowsoverproductionandsingle-steppurificationof(His)6-taggedcytoehromeP450norbythefacifitationofmetal(Ni^2+)chelateafl]nitychromatography.TheexpressionlevelofcytoehromeP450norwashighat30℃afterIPTGinduction.SDSPAGEandWesternblotanalysisshowedaspecificband(about43kDa).TheoverproducedcytochromeP450norwaspurifiedtoeleetrophoretichomogeneitywithin2.5handabout20.8mgpurifiedproteinwasobtainedfrom2Lcellculture.TheproliferationofSSMC-7721celllinecouldbeinhibitedbycytoehromeP450nor.Rabbitpolyclonalantibodies(titerover64000)wereproducedagainstrecombinantcytoehromeP450norandprovedtobeveryusefulforimmunoblottingstudy.AvailabilityofthisexpressionsystemandspecificantibodiesshouldfacilitatecharacterizationoftheroleofcytochromeP450norinthemetabolismofNO.
简介:目的:探讨肺鳞癌p53免疫组化图像定量分析中描述图像色彩的指标在不同分化程度、不同临床分期及老年与非老年间的区别.方法:采用S-P法进行肺癌p53免疫组化染色,应用计算机病理图像分析系统(MPIAS-500)进行图像分析.结果:20例中没有高分化者,中分化组和低分化组p53阳性各6例.p53染色的饱和度中分化组(4.95%)低于低分化组(10.95%),差异有非常显著性(t=4.208,P=0.002),说明低分化组阳性较强.临床分期没有Ⅰ期者,Ⅱ期与Ⅲ期p53阳性分别为5例和7例,分期之间未显示出显著性差异.老年与非老年p53阳性各6例,两组之间红、绿、蓝色值及灰度均以老年组较高(183.62、177.52、164.02、175.05),而非老年组较低(166.48、157.18、139.82、154.48),差异具有非常显著性(t=3.668,P=0.004;t'=5.570,P=0.001;t=4.305,P=0.002;t'=5.586,P=0.001),表明非老年组肺鳞癌细胞阳性强度高于老年组.结论:p53在肺癌的发生发展中具有重要作用;描述图像色彩的指标用于肺癌免疫组化图像定量分析可以弥补其他指标的不足.
简介:方法选择符合WHO诊断标准的急性心肌梗塞(AMI)20例,心绞痛(AP)30例,高血压病(EH)30例,应用放射免疫分析法动态观察血浆P物质(SP)含量变化,并以30例正常人作对照。结果冠心病(CHD)对照组SP水平为126.99±15.96pg/ml,AMI组发病第1天SP含量为62.85±16.76pg/ml,显著低于对照组(P<0.01)。发病第7天开始升高为72.60±15.20pg/ml,第21天趋于正常,为110.10±27.95pg/ml,与对照组比较无显著差异(P>0.05)。AP组心绞痛发作期SP含量为48.38±12.92pg/ml,显著低于对照组(P<0.001),经治疗2周症状缓解后复查血浆SP含量升高至78.70±9.15pg/ml,前后比较有显著差异(P<0.001)。EH组SP含量为59.75±17.89pg/ml,明显低于对照组(126.99±15.96pg/ml,P<0.001),EH的病情越严重,血浆SP的含量降低越明显。结论循环血中SP含量不足可能是引发CHD、EH的重要因素之一;SP参与了CHD及EH的发病机理及病理生理过程。
简介:客观:为了评估Porthsmouth的适用性,在预言经历新潮的联合关节造形术的病人的死亡为死亡和病态(P负鼠)的枚举修改了生理、起作用的严厉分数。方法:A总数of141病人(75男性和66女性,变老63.22年±一般水准上的14.45年)在2002年1月和2005年3月期间经历新潮的联合关节造形术与P-POSSUM.Their平均生理的分数回顾地被学习,起作用的严厉分数分别地是17.48±5.16和12.43±3.05。有P负鼠的预言的手术后的死亡与观察价值相比。亚群分析被执行调查P负鼠的预兆的能力。POSSUMscoring系统被用作控制。结果:三个病人实际上在这研究在操作以后死了。平均生理的分数在幸存组是在死亡组和17.16±4.56的32.33±9.87。前者显然比后者高,它显示出二个组之间的统计差别(Wilcoxon等级和测试,P<0.05)。同意在观察死亡数字和预言的死亡数字之间被发现的完成式由P负鼠计算了(2测试的Cochran-Mantel-Haenszelχ~,P>0.05),不过,负鼠过高估计全面mortality.Conclusions;P负鼠能在经历新潮的联合关节造形术的病人精确地预言死亡,它比负鼠优异。
简介:目的了解乳腺癌患者P16蛋白表达缺乏及其预后的关系。方法用免疫组织化LSAB法,对45例乳腺癌,10例正常乳腺组织进行免疫染色。结果乳腺癌组织P16蛋白阳性表达率为51%,显著低于正常乳腺组织(P<0.05)。P16蛋白表达率随乳癌分期而降低,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期乳癌间有显著差异(P<0.05);乳癌大小T1,T2,T3间P16蛋白表达率无显著差异(P>0.05);腋淋巴(+)组P16蛋白阳性表达率显著低于腋淋巴(-)组(P<0.01);ER(+)组P16蛋白阳性表达率显著高于ER(-)组(P<0.05)。结论P16蛋白表达缺失与乳癌及其预后因素密切相关,可作为乳癌预后的参考指标。
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