简介:目的评价PCR检测女性自取阴道下端拭子标本诊断淋病的检验效果方法每例入选者均取2个宫颈拭子标本和1个自取阴道下端拭子标本,1个宫颈拭子标本和自取阴道下端拭子标本行淋球菌PCR检测,另1个宫颈拭子标本行淋球菌培养。结果共有298例入选者。诊断出淋病31例。宫颈拭子培养、宫颈拭子PCR、自取阴道下端拭子标本PCR的敏感性分别是75.8%(25/33),87.9%(29/33)和97.0%(32/33),特异性分别是100%(265/265),99.6%(264/265)和99.6%(264/265)。结论自取阴道下端拭子标本PCR检测淋球菌的敏感性至少不低于传统的宫颈拭子,自取阴道下端拭子标本可以替代宫颈拭子行PCR诊断女性淋病。
简介:目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物,建立染料法(SYBRgreenI)实时荧光定量PCR,评估其灵敏性及特异性;并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2=0.99),灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测,最低检出浓度为2拷贝/¨l,比普通PCR检测方法提高1~2个数量级,并且具有较好的重复性;建立的SYBRI染料法具有良好的特异性,与立氏立克次体R株等其他5种立克次体,以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增;用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器,以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测,其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体检出量最多,肝脏和肾脏次之,血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性,适合各种样本中东方体的快速检测,可用于实验室的快速诊断。
简介:目的:对目前最常用的检测微小RNA(miRNA)的茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法进行比较。方法:分别用茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法检测人乳腺癌细胞MCF-7中U6和23种miRNA的表达,利用定量PCR分析软件和琼脂糖凝胶电泳方法,将2种方法在引物设计难度、特异性与灵敏度,以及检测通量方面进行比较。结果:茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高,但引物设计难度大,检测通量低;PAP法引物设计难度较低,检测通量较高,但特异性和灵敏度较差。结论:茎环法实时定量PCR适于有针对性地检测小规模miRNA,而PAP法则适于大规模miRNA筛选实验。
简介:摘要目的研究实时荧光定量PCR对乙肝DNA检测的影响因素。方法本研究所有研究对象均选择我院在2016年6月到2016年7月收治的乙肝病毒感染患者,共计涉及到150例。对所有患者的血标本进行收集,然后采用荧光定量PCR检测方法对乙肝DNA进行检测,分析检验结果和临床的诊断结果的符合情况,并且研究对影响检验结果的相关因素。结果本研究150例乙肝病毒感染患者的血液标本当中,选择实时荧光定量PCR进行乙肝DNA的检测,检测结果和临床的诊断结果相同的144例,存在误诊和漏诊共计6例。对主要影响因素进行分析,主要涉及到了标本因素、实验室检验因素以及核酸提取方法因素等。结论选择实时荧光定量PCR对乙肝DNA进行检测,能够有效提升检测的确诊率,但是对于误诊和漏诊的原因进行分析,其主要涉及到的因素是多方面的,因此临床需要加以注意,只有这样才能降低误诊和漏诊率,为临床的治疗提供便利和支持。
简介:摘要:目的:探讨常见肠道致病菌多重PCR检测的效果。方法:对常见的肠道致病菌(大肠杆菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌)通过运用PCR来进行检测,从而来对常见肠道致病菌多重PCR检测的效果进行分析。结果:多重PCR检测在常见肠道致病菌中的应用,不仅可以使致病菌目的基因片段不断扩增,而且还具备强大的特异性,能够有效的检测并且接种三个细菌。结论:对于常见肠道致病菌中,运用多重PCR检测技术能够使大肠杆菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌4种肠道致病菌进行快速、准确的检测,效果也是非常明显,在临床检测中非常值得推广与应用。
简介:ObjectiveToinvestigatetheoccurrenceandpossiblemechanismsofapoptosisincochlearepitheliumandspiralganglionneuronsaftermefloquinetreatment.MethodsWeusedquantitativeRT-PCRapoptosis-focusedgenearrays(96-well,84apoptosisrelatedgenes)toassesschangesofgeneexpressioninthecochlearbasilarmembrane(haircells-supportingcells)andspiralganglionneuronsofratcochlearorganotypicculturestreatedwith100μMmefloquinefor3h.ResultsSignificantup-ordown-regulationingeneexpressionwasdetectedin23genesinthecochlearbasilarmembrane,andin32genesinthespiralganglionneuronscomparedwithtime-matchedcontrols.Therespondinggenescouldbeclassifiedaspro-oranti-apoptotic,andweremainlyimplicatedintheBcl-2,Caspase,Card,IAP,TNFligand/TNFreceptor,Deathdomain/Deatheffectordomain,DNAdamage/p53,andNF-kappaBfamilies.Syntheticanalysissuggestedthatthesefamiliescouldberevisedtotwomajorpathwaysmainlyinvolvedinthedeathreceptor-mediatedsignalingpathwayandapoptoticmitochondrialpathway.Inaddition,itwasfoundthatnumerousanti-apoptoticgenessuchasBcl2a1,Birc1b,Birc3,Birc4,Bnip1,Cflar,Il10,Lhx4,Mcl1,Nfkb1,Prlr,Prok2,andTNFweregreatlyup-regulatedinthecochleartissue,whichmightimplytheco-existenceofprotectiveresponseinthecellsattheearlystageofmefloquine-induceddamage.
简介:目的:利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测产气荚膜梭菌的方法。方法:以产气荚膜梭菌基因为靶序列设计引物和探针,以自产气荚膜梭菌菌株中提取的DNA为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的特异性、敏感性。结果:建立的反应体系在上游引物浓度为0.45μmol/L、下游引物浓度为0.15μmol/L、探针浓度为0.3μmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与创伤弧菌等12种相关细菌均无交叉反应;对纯菌检测的灵敏度低于10CFU/反应体系。结论:建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对战时气性坏疽做出快速准确的报告,实现对这种战时高发疾病的安全、快速和定量检测。
简介:摘要:目的:探讨麻疹病毒 PCR检测方法,总结出最有效的检测措施,为我们治疗麻疹奠定基础。方法:对30例疑似麻疹病毒病例进行 PCR检测,并对确诊的麻疹病人及时给予有效治疗。结果:对这些患者进行全面检查后,我们确定有21名患者经 PCR检测呈阳性,其余