简介：摘要目的明确CD8+调节性T细胞（Treg细胞）在慢性鼻窦炎（CRS）患者鼻黏膜组织和外周血中的表达情况，及其与鼻黏膜组织中嗜酸粒细胞（Eos）浸润的关系。方法对2017年3月至2018年10月于中山大学附属第三医院的33例慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）、26例慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）及27例对照组患者采集鼻黏膜组织及外周血，其中男59例，女27例，年龄18~72岁。苏木精-伊红染色检测鼻黏膜组织中Eos计数，将CRS患者分为嗜酸粒细胞性CRS（eosinophilic CRS，ECRS）和非嗜酸粒细胞性CRS（non-eosinophilic CRS，Non-ECRS）两组类型。采用流式细胞术检测各组患者鼻黏膜组织及外周血中CD4+及CD8+T细胞的比例、细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocytes，Tc）1、Tc2及Tc17细胞的比例、CD8+Foxp3+和CD8+Foxp3-IL-10+两种CD8+Treg细胞的比例，以及产转化生长因子β（TGF-β）及白细胞介素（IL）-10的CD8+Foxp3+Treg细胞的比例。采用Graphpad 7.0进行作图，所有数据采用M（IQR）表示，采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果CD8+T细胞在所有患者鼻黏膜组织淋巴细胞中的比例高于CD4+T细胞［37.75%（17.35%）比4.72%（4.29%），Z=-5.70，P<0.001］，而在外周血淋巴细胞中的比例低于CD4+T细胞［23.60%（9.33%）比44.05%（10.93%），t=9.72，P<0.001］。CRSwNP患者鼻黏膜组织中Tc2细胞和Tc17细胞比例显著高于CRSsNP患者及对照组［1.82%（1.22%）比0.84%（0.79%）比1.09%（0.92%），1.93%（2.32%）比0.54%（1.04%）比0.47%（0.51%），P值均<0.05］。与CRSsNP［0.43%（1.45%）］和对照组［0.48%（0.83%）］相比，CRSwNP患者鼻黏膜组织中CD8+Foxp3+Treg细胞占淋巴细胞比例最低［0.10%（0.32%），Z值分别为-2.24、-2.22，P值分别为0.025、0.027］；CRSwNP患者鼻黏膜组织中产TGF-β和IL-10的CD8+Foxp3+Treg细胞占总CD8+ T细胞的比例显著低于对照组（Z值分别为1.46、0.49，P值均为0.001）。CRSwNP患者鼻黏膜组织中CD8+Foxp3-IL-10+Treg细胞占总CD8+T细胞的比例显著低于CRSsNP患者［0.14%（0.28%）比0.89%（0.81%），Z=0.61，P=0.030］。CD8+Foxp3+Treg细胞和CD8+Foxp3-IL-10+Treg细胞在ECRS患者鼻黏膜淋巴细胞中的占比显著低于Non-ECRS患者［0.07%（0.44%）比0.53%（0.75%），0.13%（0.21%）比0.29%（0.76%），t值分别为2.14、2.78，P值均<0.05］，并与CRS患者鼻黏膜组织中Eos百分比呈负相关（R2值分别为0.56、0.78，P值均<0.001）。外周血中CD8+Fxop3+Treg和CD8+Fxop3-IL-10+Treg细胞在各组之间的分布无明显差异。结论CD8+Treg细胞在CRSwNP患者尤其是ECRS患者鼻黏膜组织中所占比例降低，与Tc2、Tc17趋势相反，与Eos计数呈负相关。提示CD8+Treg比例降低可能与CRS患者鼻黏膜免疫失衡及Eos浸润有关。

简介：摘要目的初步分析血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及潜在的调控机制。方法纳入2020年2月至2021年5月期间，于中山大学附属第三医院行鼻内镜手术的患者23例，其中男性17例，女性6例，年龄23~66岁。通过免疫组织化学染色方法检测ACE2在非慢性鼻窦炎对照组、非嗜酸性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（non-eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，non-ECRSwNP）组和嗜酸性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，ECRSwNP）组中的表达。利用GSE72713芯片分析ACE2与干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13、IL-25、IL-33、胸腺基质淋巴细胞生成素、骨膜蛋白等Th1/Th2细胞因子的相关性。通过string数据库构建ACE2互作蛋白网络，cibersort算法评估GSE72713芯片免疫细胞浸润情况，并通过微小核糖核酸（miRNA）调控网络、基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）和药理学分析对ACE2进行综合分析。使用GraphPad 7.0及SPSS 20.0软件对实验结果进行统计学分析。结果ACE2在non-ECRSwNP组较ECRSwNP组高表达。芯片分析显示ACE2表达与IFN-γ呈正相关，与IL-5、IL-13和骨膜蛋白呈负相关。免疫分析显示ACE2与M1型巨噬细胞浸润呈正相关，与M2型巨噬细胞浸润呈负相关。GSEA结果显示，干扰素相关通路在non-ECRSwNP组显著上调，而靶向ACE2的miRNA-200B/miRNA-200C/miRNA-429通路在ECRSwNP组上调。药理学分析结果显示，氨苄青霉素可上调ACE2表达，对乙酰氨基酚可下调ACE2表达。结论ACE2在ECRSwNP和non-ECRSwNP中具有不同的表达模式，这可能与组织炎性因子浸润不同以及miRNA调控通路差异相关。

简介：摘要细胞焦亡是一种新的程序性细胞死亡，为半胱氨酸蛋白酶-1/半胱氨酸蛋白酶-4/5/11依赖，并伴有细胞膨胀破裂、大量炎症因子释放的炎性反应过程。国内外研究显示细胞焦亡在心血管病、免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等发生发展过程中发挥着重要作用。焦亡机制的研究有望为疾病治疗提供新的方向与策略。本文就细胞焦亡在相关疾病中的研究进展做一综述。

简介：摘要目的探索miR-18a过表达和抑制表达对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（WB）检测其对毛细血管扩张性共济失调症突变（ataxia telangiectasia mutated，ATM）基因和蛋白表达的影响。构建miR-18a过表达和抑制表达的人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2细胞株。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测miR-18a过表达和抑制表达联合放疗处理前后对人鼻咽癌细胞株生长的影响，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，克隆形成实验检测细胞放疗敏感性，吖啶橙染色结合WB检测细胞自噬水平及自噬相关蛋白表达。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，2组间均数比较采用独立样本t检验。结果100、200 nmol/L miR-18a模拟物转染CNE1和CNE2细胞48 h后，与对照组相比，ATM mRNA表达受到显著抑制（CNE1相对表达量为0.174±0.139和0.003±0.001，t值为9.939和19 470.783；CNE2：相对表达量为0.024±0.008和0.019±0.012，t值为270.230和137.746，P值均<0.001），72 h后，ATM蛋白水平显著下降；100、200 nmol/L miR-18a遏制物转染48 h后，CNE1细胞中ATM转录显著增加（CNE1相对表达量为9.419±2.495和2.500±1.063，t值为-4.427和-41.241，P值均<0.05）；CNE2细胞中ATM转录亦显著增加（相对表达量为7.210±0.171和115.875±15.805，t值为-62.789和-12.589，P值均<0.05），72 h后，ATM蛋白水平增高。miR-18a过表达的CNE1和CNE2细胞放疗后与CNE1和CNE2细胞单纯放疗相比，细胞增殖受到明显抑制（P值均<0.05）；稳定抑制miR-18a表达与单纯放疗相比，细胞增殖能力增加（P值均<0.01）。100 nmol/L miR-18a模拟物转染联合放疗组与单纯放疗组相比，CNE1细胞凋亡率增加［（22.9±2.1）%比（16.3±1.0）%，t=-4.870，P<0.01］。稳定过表达miR-18a联合放疗与单纯放疗相比，G1期和G2/M期的细胞比例显著减少［（20.2±3.0）%比（29.8±4.4）%，t=3.119；（21.5±0.9）%比（33.4±3.1）%，t=6.410，P值均<0.05］，S期的细胞比例显著增加［（56.7±4.9）%比（36.8±6.4）%，t=-4.246，P<0.05］。稳定过表达miR-18a的CNE1细胞与对照细胞相比，放疗后克隆形成能力下降、自噬溶酶体数量增加、自噬相关LC3表达增加（P值均<0.05），p62没有明显变化。结论miR-18a过表达可以增强人鼻咽癌细胞放疗敏感性，其机制与其抑制ATM表达，去除G1/S，G2/M期阻滞，诱导细胞自噬和凋亡有关。

简介：摘要目的探讨Notch通路在鼻息肉中的表达及其与调节性T细胞（Treg细胞）表达和嗜酸粒细胞（Eos）浸润的相关性。方法选择2012年11月至2018年8月期间在中山大学附属第三医院接受鼻内镜手术的慢性鼻窦炎（CRS）和鼻中隔偏曲的患者，分别作为CRS组和对照组。收集慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）患者（30例，男14例，女16例，年龄18~63岁）、慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者（58例，男38例，女20例，年龄18~65岁）的窦口鼻道复合体黏膜组织、鼻息肉，对照组（29例，男19例，女10例，年龄20~57岁）患者的下鼻甲黏膜组织。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色法观察组织中的Eos浸润情况，并将CRSwNP分为嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴息肉（Eos-CRSwNP）和非嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴息肉（non-Eos-CRSwNP）。通过实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）的方法检测4组患者Notch通路受体Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4及其配体Jagged-1、Jagged-2、Delta-1、Delta-3和Delta-4的表达，Th2型细胞因子［白细胞介素4（IL-4）、IL-5、IL-13］、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eosinophilic cationic protein，ECP）以及Treg细胞关键转录因子Foxp3的表达。采用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞在4组患者鼻黏膜组织中的表达。采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，多组间均数比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Spearman检验。结果与对照组、CRSsNP组和non-Eos-CRSwNP组相比，Eos-CRSwNP组的IL-4、IL-5、IL-13表达水平最高（F值分别为16.930、9.197、9.116，P值均<0.05）；Foxp3的表达水平最低（F=2.780，P<0.05）；Foxp3与ECP呈负相关（r=-0.326，P<0.05）。Eos-CRSwNP组中CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞占比低于对照组、CRSsNP组、non-Eos-CRSwNP组（F=13.140，P<0.01）。Notch-1、Jagged-1在Eos-CRSwNP组中表达高于non-Eos-CRSwNP组，差异有统计学意义（F值分别为5.953、 6.380，P值均<0.05）；且在鼻息肉组中Notch-1/Jagged-1与Foxp3表达呈负相关（r值分别为-0.611、-0.346，P值均<0.05），与IL-4、IL-5、IL-13和ECP的表达呈正相关（r值分别为0.781、0.459，0.621、0.601，0.605、0.490，0.464、0.668，P值均<0.05）；在鼻息肉组中其余Notch通路受体/配体在各组间的表达无相关性。结论Notch-1/Jagged-1通路异常激活可能参与调控Eos-CRSwNP中Treg细胞功能的抑制，以促进Th2型炎性反应及Eos浸润。

简介：摘要目的探讨非嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（non-eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，nECRSwNP）中白细胞介素（interleukin，IL）17A的表达、细胞来源及表达差异的可能原因。方法收集2017年1月至2018年5月在中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科住院并行鼻内镜手术治疗的42例慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP）患者的组织标本，其中男33例，女9例，年龄18~65岁。嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，ECRSwNP）组14例，nECRSwNP组28例。酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测IL-17A在2组鼻黏膜组织中的表达，流式细胞术检测IL-17A在2组中的表达及来源细胞；并探讨IL-17A主要来源细胞在2组中数量及分化能力的差异；通过ELISA分析促产IL-17A细胞分化的细胞因子在CRSwNP中的表达及与IL-17A的相关性。运用SPSS 20.0进行统计学分析。结果nECRSwNP组鼻黏膜组织中IL-17A的蛋白表达水平及产IL-17A的淋巴细胞比例均显著高于ECRSwNP组，差异均有统计学意义{158.56（167.76） pg/ml[M（QR），后同]比9.42（11.33） pg/ml，10.21%±1.54%（±s，后同）比3.93%±0.80%，Z=2.95，t=3.62，P值均<0.01}。nECRSwNP组和ECRSwNP组中IL-17A均主要来源于Tc17细胞（产IL-17A的CD8+T细胞）和Th17细胞（产IL-17A的CD4+T细胞）。ECRSwNP组与nECRSwNP组中CD8+和CD4+T细胞比例无明显差异，但nECRSwNP组中CD8+和CD4+T细胞分化为Tc17和Th17细胞的能力强于ECRSwNP组。nECRSwNP组中促Tc17/Th17细胞分化的细胞因子IL-6和转化生长因子β（transforming growth factor -β，TGF-β）的表达均显著高于ECRSwNP组[56.07（234.25） pg/ml比8.27（12.51） pg/ml，（5.44±0.34） pg/ml比（4.17±0.22） pg/ml，Z=2.426，t=2.294，P值均<0.05]，但IL-23在2组间的差异无统计学意义。IL-17A与IL-6之间存在正相关关系（r=0.615，P=0.009），IL-17A与TGF-β之间、IL-17A与IL-23之间无相关性。结论nECRSwNP患者鼻黏膜中IL-17A的表达显著高于ECRSwNP，为Tc17/Th17细胞的表达及分化增加所致；IL-17A与促Tc17/Th17分化的细胞因子（IL-6）呈正相关关系。