简介：摘要目的研究不同剂量电离辐射对小鼠造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells, HSPCs)内线粒体功能的影响。方法将48只C57BL/6小鼠按随机数表法分为对照组(0 Gy组)、全身60Co单次照射1.0 Gy组和4.5 Gy组，每组16只，照射后12、24 h检测HSPCs线粒体活性氧(ROS)水平、膜电位、线粒体数量及线粒体压力等。c-Kit+细胞体外接受60Co单次15 Gy照射，24 h后检测线粒体功能。结果建立小鼠造血系统辐射损伤模型，发现小鼠受不同剂量γ射线照射后24 h内外周血白细胞(t＝12.41、18.31、16.48、14.16、19.08、20.25，P<0.05)、红细胞(t＝4.81、6.62，P<0.05)及血小板(t＝4.33、6.68，P<0.05)均明显减少，骨髓细胞集落形成能力下降(t＝16.27、55.66、17.06、43.75，P<0.05)，HSPCs数量降低(t＝5.16、11.55，P<0.05)，且呈现时间和剂量相关效应；1 Gy照射后，HSPCs中ROS水平差异无统计学意义(P>0.05)，线粒体膜电位降低(t＝8.82、9.24，P<0.05)、线粒体数量减少，且在照射后24 h，HSPCs线粒体功能、线粒体基础代谢指数增强(t＝ 7.36、3.68、4.58、3.15、3.15，P<0.05)。4.5 Gy照射后可引起HSPCs中ROS上升(t＝4.63、4.12，P<0.05)，线粒体数量降低，线粒体膜电位降低(t＝12.29、10.46，P<0.05)，最大呼吸能力和呼吸储备能力降低(t＝ 7.81、5.78、6.70、5.83，P<0.05)，12 h基础呼吸和氧化磷酸化ATP产能低(t＝8.48、3.80，P<0.05)，24 h质子泄漏高(t＝6.57，P<0.05)，耦合效率低(t＝11.43，P<0.05)。c-Kit+细胞经15 Gy照射后24 h，ROS水平显著上升(t＝11.30，P<0.05)，线粒体膜电位降低(t＝34.92，P<0.05)，最大呼吸和呼吸储备能力提高(t＝4.25、3.44，P<0.05)。结论建立了HSPCs中系统评估线粒体功能方法，明确了电离辐射对HSPCs线粒体功能的影响，为深入揭示电离辐射致HSPCs线粒体损伤机制奠定基础。

简介：摘要目的探讨应用超微超顺磁性氧化铁纳米颗粒(ultra-micro superparamagnetic iron oxide nanoparticle，USPIO)标记小鼠巨噬细胞株RAW264.7的最适浓度以及比较MRI中不同扫描序列在细胞吞噬功能评价中的敏感度差别。材料与方法用终浓度为0、25、50、75、100、125 μg/mL的USPIO分别与小鼠巨噬细胞共培养24 h后，细胞计数试剂法(CCK-8)计算细胞存活率以及USPIO对该细胞的半数抑制浓度(IC50)；光学显微镜下观察细胞形态学变化；普鲁士蓝染色确认细胞对USPIO的吞噬效应；3.0 T MRI扫描细胞-琼脂糖凝胶模型，记录T1WI和T2WI序列的弛豫时间和弛豫率并计算弛豫时间降低率。结果当USPIO浓度为25 μg/mL时，对细胞的存活率无影响，差异无统计学意义(P＞0.05)；当USPIO浓度≥50 μg/mL时，细胞存活率随USPIO浓度增加显著降低(P均＜0.05)；USPIO对细胞的半数抑制浓度IC50为(186.5±7.2) μg/mL；当USPIO浓度为50 μg/mL时，细胞形态开始皱缩、透光度减低；当USPIO浓度为25 μg/mL时，普鲁士蓝染色呈显著阳性；MRI显示，与对照组相比，当USPIO浓度为25 μg/mL时，细胞即见显著信号改变；随USPIO浓度增加，T1、T2弛豫时间显著缩短(P均＜0.01)，对应弛豫率R1、R2逐渐升高；相同USPIO浓度下，各组T2弛豫时间降低率显著高于T1弛豫时间降低率(P均＜0.001)。结论浓度为25 μg/mL的USPIO对细胞没有明显毒性作用，而且标记效率高、MRI即见显著信号改变与较好的成像效果，为标记巨噬细胞的最适浓度；MRI能用于细胞标记后的体外成像，T2WI序列在检测细胞吞噬USPIO后的信号变化优于T1WI序列。

简介：摘要目的探讨烟曲霉对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）自噬流的影响。方法灭活烟曲霉体外诱导小鼠BMDM不同时间（0、0.5、4、12 h），提取细胞蛋白，Western印迹法检测自噬关键蛋白LC3-Ⅰ型/Ⅱ型的转换及磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）Ser2481的蛋白水平。用烟曲霉和溶酶体阻断剂[包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d+胃蛋白酶抑制剂pepstatin、巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、氯化铵、氯喹]单独或联合体外诱导小鼠BMDM不同时间（4、12 h）后，Western印迹法检测烟曲霉对新生的LC3-Ⅱ、细胞基础自噬流的影响，并通过共聚焦荧光显微镜观察烟曲霉与LC3、Rubicon（RUN domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich-domain-containing protein）的共定位关系。不同处理时间数据结果采用非匹配t检验分析，烟曲霉孢子和自噬溶酶体阻断剂两因素处理数据结果采用2 × 2析因分析方法。结果Western印迹显示，与对照组（0 h组）比较，烟曲霉体外诱导小鼠BMDM 0.5、4、12 h后细胞内LC3-Ⅱ表达逐渐增加，差异均有统计学意义（t值分别为6.58、3.28、3.02，均P < 0.05），但各组p-mTOR蛋白水平差异无统计学意义（t值分别为0.441、0.477、0.382，P值分别为0.682、0.660、0.722）。与单独氯喹处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯喹处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（t = 2.13、2.78，均P < 0.05）。与单独氯化铵处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯化铵处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（t = 2.92、2.92，均P < 0.05）。与单独BAF-A1处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合BAF-A1处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（t = 2.13、2.13，均P < 0.05）。与单独E-64d + pepstatin处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合E-64d + pepstatin处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（t = 2.13、2.92，均P < 0.05）。用钙荧光白荧光标记的烟曲霉孢子刺激BMDM 8 h后，共聚焦荧光显微镜显示LC3、Rubicon主要包绕于烟曲霉周围，与烟曲霉均有共定位关系。结论烟曲霉体外诱导可增加小鼠BMDM基础自噬流。

简介：摘要目的探讨巨噬细胞为适应肿瘤微环境(tumor micro-environment，TME)需要而在其自身极化层面上发生谱系变化模型的特征，为进一步研究TME中巨噬细胞的可塑性提供参考。方法取绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)转基因并已建成近交系的Foxn1nu.B6-CAG-EGFP/SU裸小鼠骨髓细胞，分别在巨噬细胞集落刺激因子1(colony-stimulating factor 1，CSF-1)、IFN-γ＋LPS、IL-4诱导下，培养出M0、M1和M2亚型，倒置荧光显微镜观察GFP。免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞标志蛋白和极化蛋白，并进一步与人脑胶质瘤干细胞SU3共培养。结果倒置荧光显微镜下，原始骨髓细胞和条件培养基培养出的M0、M1和M2都发出强烈的绿色荧光。瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色后，普通显微镜下能观察到巨噬细胞固有的可塑性。免疫细胞化学染色检测CD11C和CD206标志蛋白表达都呈阳性，CD68只在M1巨噬细胞上为弱阳性，CSF-1和CSF-1R在各亚型细胞上都呈强阳性。在共培养的干细胞球体中观察到了绿色荧光细胞浸润，并发生了吞噬反应。结论本研究建立了绿色荧光裸小鼠的髓源性巨噬细胞谱系模型，包含M0、M1和M2亚型，都有巨噬细胞固有的可塑性，表达共同的标志蛋白和极化相关蛋白，具有巨噬细胞固有的吞噬功能，可用于与肿瘤细胞之间相生相克表征的研究，特别是需要示踪研究时，可通过巨噬细胞发出的绿色荧光进行识别。

简介：摘要目的本研究组通过对经典Wnt信号通路的干涉，观察其对子宫内膜损伤后修复的影响，探讨小鼠子宫内膜干细胞损伤修复调控机制的研究，为子宫内膜损伤修复障碍及其引发疾病的干细胞治疗方法提供新的研究思路。方法利用Wnt/β-catenin信号通路转基因报告鼠（BAT-gal小鼠）建立子宫内膜损伤模型，了解Wnt信号分布和表达的变化；westernblot和QPCR等方法检测来证实Wnt信号通路激动剂Wnt-7a和阻断剂SFRP-2后Wnt信号通路的调节变化。通过直接荧光显微镜观察和免疫组化染色后显微镜下观察,证实产后小鼠子宫内膜边缘（SP）群干/祖细胞分离纯化并进行培养后移植到损伤的宫腔内，能在宫腔内存活和迁移并且对损伤内膜组织发挥修复作用。结果A.通过特殊的X-gal染色确证Wnt/β-catenin信号通路存在于子宫内膜损伤修复中并起着重要作用。证实产后小鼠子宫内膜边缘（SP）群干/祖细胞分离纯化并进行培养后移植到损伤的宫腔内，能在宫腔内存活和迁移并且对损伤内膜组织发挥修复作用。证实Wnt/β-catenin信号通路在（SP）群干/祖细胞修复损伤子宫内膜中的调节作用。结论Wnt/β-catenin信号通路在（SP）群干/祖细胞修复损伤子宫内膜中的调节作用。

简介：目的：探讨大剂量HBsAg疫苗对机体细胞免疫应答的影响。方法不同剂量HBsAg疫苗两次免疫小鼠后，用氚-胸腺嘧啶核苷(^3H—TdR)掺入法，ELISA方法分别测定免疫鼠T淋巴细胞增殖能力，细胞培养上清中白细胞介素-2(IL-2)，γ干扰素(IFN—γ)含量及血清中抗HBsIgG2a阳转率。结果：大剂量HBsAg疫苗单次免疫后，小鼠T淋巴细胞增殖能力比对照组显著增强(P＜0．05)；Tb1型细胞因子IL-2、IFN—γ显著增高。(P均＜0．05)；抗HBsIgG2a阳转率显著高于小剂量组(P＜0．01)。加强免疫后，各项指标增高更显著，小剂量组才呈现有意义增高。结论:大剂量HBsAg疫苗可诱生特异性细胞免疫应答，并使细胞免疫趋向Th1型。

简介：摘 要 : 本文研究了 三个不同产地的 绿茶 对 小鼠体液免疫和细胞免疫功能影响。将雄性 IC Ｒ小鼠随机分为 I 、 II 两个 大组，每大 组随机分为阴性对照组、 安徽绿茶 组 、福建绿茶 组 和河南绿茶组 。实验组 给予 21mg/ml 的绿茶浸膏， 每组 10 只。 灌胃体积 20ml/kg, 每天灌胃一次，连续 30 d 。分别进行淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、并测定抗体生成细胞及血清溶血素。结果表明，与阴性对照组相比， 绿茶 对 ConA 诱导小鼠的体重，脾脏 / 体重比值，胸腺 / 体重比值无显著性影响 (P ＞ 0.05) 。与阴性对照组 比较，三个产地绿茶组小鼠足 跖肿胀度 、小鼠溶血空斑数均 有显著性差异（Ｐ＜ 0.05 ， Ｐ＜ 0.01 ） ；福建绿茶组小鼠半数溶血值明显增加，差异具有显著性 （Ｐ＜ 0.05 ） ，安徽绿茶、河南绿茶与阴性对照比较，半数溶血值无明显影响 （Ｐ＞ 0.05 ） 。三个产地绿茶对小鼠脾淋巴细胞增殖无明显影响，加 ConA 孔与不加 ConA 的光密度差值无显著性差异 （Ｐ＞ 0.05 ） 。 说明 绿茶具有增强免疫力的作用，不同的产地对其作用基本无。

简介：摘要目的通过研究胸腺肽α1对脓毒症小鼠T淋巴细胞分化及炎症因子的影响，初步探讨胸腺肽α1对脓毒症小鼠预后的影响。方法将雌性C57小鼠采用随机数表法分为3组：空白对照组、脓毒症组及胸腺肽α1治疗组，对3组小鼠血浆中T细胞计数、T细胞进一步分化及血浆和肺组织中对应炎性因子表达进行统计分析，同时对小鼠96 h内生存状况进行分析。利用graphpad 7.0软件对研究结果进行统计学分析。结果3组小鼠T淋巴细胞计数无明显差异，但在T淋巴细胞进一步分化中发现，胸腺肽α1组Th17较脓毒症组表达明显减少，Treg较脓毒症组表达明显增加，同时与T细胞分化相关的炎症细胞因子IL-10在胸腺肽α1组血浆及肺组织中表达均明显增加，而IL-17A在血浆及肺组织中表达均明显较少，差异有统计学意义（P<0.05），三组小鼠96 h生存分析发现胸腺肽α1组小鼠生存率明显上升，差异有统计学意义（P<0.05）。结论胸腺肽α1可增强脓毒症小鼠细胞免疫，改善其免疫、减轻炎症反应，进一步对脓毒症小鼠具有保护作用。

简介：应用原位末端标记，DNA电泳和免疫组化技术观察经0，2，4，6，8Gy不同剂量γ－线整体照射后，小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的动态变化过程和Bax,Bcl-2蛋白在其中的作用，探讨细胞凋亡在小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤中的作用，为阐明淋巴细胞辐射损伤特点和机理以及急性放射病的防治提供重要依据。结果表明：（1）照射后早期淋巴细胞凋亡率迅速增加，如6Gy照后4h和1d凋亡率分别为对照值的3．6和9．3倍，凋亡率还随照射剂量的增加而迅速升高，照后24h当照射剂量为2，4，6，8Gy时，凋亡率分别为对照值得5.5,8.1,9.3,9倍。（2）胸腺和外周血淋巴细胞数在照射后急剧减少，与淋巴细胞凋亡成相反趋势，提示凋亡可能是急性照射后淋巴细胞减少的主要途径之一。（3）透射电镜观察表明，6Gyγ-线照射后，小鼠胸腺淋巴细胞出现早，中，晚期典型凋亡细胞的形态学特征。（4）DNA凝胶电泳显示2－6Gy照后4和8h，胸腺淋巴细胞出现特征的DNA梯形谱，末端标记法显示6Gy照后8h凋亡率约为照前值的4．2。（5）照射后Bax,Bcl-2蛋白的异常表达证实二者在淋巴细胞凋亡的调控中起重要作用。上述结果表明，细胞凋亡在小鼠胸腺淋巴细胞辐损伤全过程中起重要作用，而Bax和Bcl-2蛋白参与了淋巴细胞凋亡的调控。

简介：摘要目的比较通过卵巢局部注射和尾静脉注射两种不同的移植方式，脐带间充质干细胞(UCMSCs)在卵巢损伤小鼠体内的分布、迁移和增殖，探讨最佳移植途径。方法取8周龄ICR雌性小鼠12只，采用环磷酰胺(CTX)200 mg/kg+白消安(BUS)30 mg/kg一次性腹腔注射方式建立卵巢损伤小鼠模型；采用慢病毒转染途径构建标记有荧光素酶(Luc)的UCMSCs；将卵巢损伤小鼠随机分为两组，分别采用尾静脉移植(2×106个细胞)和单侧卵巢局部移植(2×105个细胞)，移植后采用小动物活体成像(IVIS)技术示踪UCMSCs在小鼠体内的分布、迁移及增殖。组间比较采用t检验。结果化疗药物处理后1周小鼠血清FSH水平[(17.971±0.311) μg/L]显著高于化疗药物处理前[(14.420±0.622) μg/L]、化疗药物处理后1周小鼠血清E2水平[(320.321±8.682) ng/L]显著低于化疗药物处理前[(175.383±19.400) ng/L]，差异有统计学意义(t＝5.106、4.800，P<0.05)；卵巢局部移植Luc-UCMSCs后在小鼠卵巢部位可观察到荧光信号(d1：2.61×105±0.33、d2：1.35×105±0.23、d3：3.09×105±0.29、d4：4.12×105±0.43)，其余部位未见荧光信号，并且在移植第2天开始荧光信号逐渐增强，差异有统计学意义(t＝7.011、8.311、4.562，P<0.05)，第5天信号消失，而尾静脉移植组小鼠在移植后7 d内各部位均未见到明显荧光信号。结论UCMSCs通过卵巢局部注射可以在小鼠受损的卵巢局部聚集并存活，与尾静脉注射比较，卵巢局部注射可能会取得更好的治疗效果。

简介：背景：慢传输型便秘的发病机制尚不清楚。近年Cajal间质细胞（interstitialcellsofCajal，ICC）对胃肠平滑肌的起搏作用和介导神经递质的作用已被人们所认识，且在一些胃肠动力障碍性疾病中存在ICC数量和结构的异常改变。目的：探讨ICC在慢传输运动小鼠结肠组织中的改变。方法：经吗啡诱导建立结肠慢传输运动小鼠模型，采用免疫组化法观察各组小鼠结肠组织ICC的表达和分布；采用Westernblot蛋白印迹试验和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析各组小鼠结肠组织c-Kit蛋白和c-kitmRNA的表达。结果：①45天后两实验组小鼠近端结肠组织免疫组化c—kit阳性细胞较对照组显著减少（P〈0．01），实验组Ⅱ较实验组Ⅰc-kit阳性细胞减少更明显（P〈0．01）；60天后停吗啡组的c-kit阳性细胞较纳洛酮阻断组和对照组显著减少（P〈0．01）。小鼠远端结肠组织c—kit阳性细胞在所有组别之间无显著差异。②45天后两实验组小鼠近端结肠组织c-Kit蛋白和c-kitmRNA的表达较对照组均显著减少（P均〈0．01）；60天后停吗啡组近端结肠组织c-Kit蛋白和c-kitmRNA的表达仍较纳洛酮阻断组和对照组显著减少（P〈0．05和P〈0．01）。结论：吗啡诱导的慢传输运动小鼠近端结肠组织中ICC数量下降，c—Kit蛋白和c-kitmRNA的表达明显减少，提示近端结肠ICC减少可能是结肠慢传输运动的原因之一；停用吗啡未能逆转ICC的变化，结肠慢传输运动也无改善。纳洛酮阻断后．ICC的变化基本恢复，结肠动力改善，纳洛酮可能阻止和恢复吗啡诱导的ICC数量的变化。

简介：研究小鼠皮肤角质细胞在电场中的移动以及微管、微丝和钙离子通道在细胞移动中的作用。制作直流电场干预细胞装置,以不同强度的电流作用于小鼠皮肤角质细胞,并在培养基中加入L-型钙离子通道阻断剂硝苯地平、微管抑制剂秋水仙碱和微丝抑制剂细胞松弛素B观察小鼠皮肤角质细胞运动的变化。结果表明：小鼠皮肤角质细胞在1.6mA电流刺激下向阴极方向移动,移动速率为29.966μm/h。加入硝苯地平,对小鼠皮肤角质细胞移动的抑制作用不明显。而秋水仙碱和细胞松弛素B对小鼠皮肤角质细胞移动有明显抑制作用。小鼠皮肤角质细胞在电场中可以向阴极定向移动,微管和微丝参与调解这一运动,而L-型钙离子通道与此运动无关。

简介：目的：采用小鼠截肢应激模型，探讨创伤应激状态下小鼠免疫功能变化及黄芪多糖(APS)对应激状态下机体免疫功能影响。方法：将50只Balb／c小鼠随机分为5组：正常对照组(A)；应激对照组(B)；应激+APS高(C)、中(D)、低(E)剂量组。免疫组织化学技术检测CD4、CD8、c-fos蛋白表达，原位杂交检测NF-kBmRNA、IL-10mRNA表达，计算机图像分析系统定量。结果与正常对照组(A)比较，创伤后72h应激对照组(B)小鼠胸腺、脾脏组织中NF-kBmRNA、IL-10mRNA表达水平均明显升高(P<0．01)；CD4、CD4／CD8比值显著减少(P<0．01)，c-fos抗原分布明显多于正常(P<0．01)。与创伤应激对照组(B)比较，应激+APS高(C)、中(D)、低(E)剂量组小鼠胸腺、脾脏组织中NF-kBmRNA、IL-10mRNA的表达受抑(P<0．01)；胸腺、脾脏组织中CD4抗原水平、CD4／CD8比值升高(P<0．01)；胸腺、脾脏组织中c-fos抗原水平降低(P<0．01)，与正常对照组(A)比较，应激+APS高剂量组(C)胸腺、脾脏组织中NF-kBmRNA、IL-10mRNA的表达；CD4抗原、CD8抗原、c-fos抗原分布无显著差异(P>0．05)。结论：创伤后小鼠细胞免疫功能明显紊乱；而黄芪多糖体内应用可有效恢复其细胞免疫功能。

简介：摘要目的：研究电子烟对小鼠角膜上皮组织结构及结膜杯状细胞的影响。方法：实验研究。18只雄性c57BL小鼠，8周龄，随机分为A、B、C组，每组6只。A组不做任何干预，B组采用0 mg尼古丁电子烟进行干预，C组采用12 mg尼古丁电子烟进行干预。每日2次，每次30 min。干预12周后，行苏木精-伊红染色观察角膜上皮情况，透射电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构变化，免疫荧光染色观察Mucin 5AC阳性表达的杯状细胞的改变。各组间结果数据采用单因素方差分析和事后分析。结果：干预12周后，A组上皮细胞层数为5.0±0.7，而B、C组上皮细胞层数分别为7.0±0.7和7.0±0.6，A组与B、C组间差异有统计学意义（F=18.50，P<0.001），而B组和C组间差异无统计学意义。与A组相比，B、C组角膜上皮微绒毛明显减少（F=153.50，P<0.001），长度变短（F=29.54，P<0.001），排列紊乱。在结膜穹隆部的上皮中，B组和C组的Mucin 5AC阳性细胞数目比A组明显减少（F=420.10，P<0.001），但是B组和C组之间Mucin 5AC阳性细胞数目差异无统计学意义。结论：电子烟会损伤小鼠角膜上皮的组织结构，减少结膜杯状细胞的数目。

简介：把人LAK细咆恳液与SMMC-7721人肝癌细胞按50:1混合,给BALB/C—nu裸小鼠背皮下注射含有5×10~6的癌细胞;对照组只注射相同数量的癌细胞,观察25d。对照组动物100％发生直径0.8～1.4cm大小的肿瘤;实验组动物无1只有肿瘤发生,且

简介：摘要全世界第五大常见毒瘤的其中一种是肝细胞癌（HCC）。肝细胞癌的死亡率极高，位居第三位1。根据不完全统计，每年全世界新增加病例超过70多万例2。这些年以来，许多学者致力于各种各样感染及非感染因素导致肝细胞癌发生的研究，结果表明肝细胞癌变会慢慢形成一种慢性炎症状态，如果长期刺激肝脏细胞。肝脏纤维化是这种炎症状态的早期症状、其次可能会致使早期肝癌的发生、在一定程度上会促进肿瘤细胞的发展、侵袭和转移。中性粒细胞，淋巴细胞，巨噬细胞等是3参与炎症反应的炎症细胞，炎症机制的一种血象指标为外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值（NUR），凭借肝癌患者肝癌的TNM分期和病理分级、NLR水平等相关性指标有重要临床意义。

简介：目的探讨Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对非小细胞肺癌NCI-H23细胞干性的调控作用。方法以非小细胞肺癌NCI-H23细胞为对象,以糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）抑制剂（CHIR-99021）和β-cateninsiRNA为干预剂,分别采用噻唑蓝比色法、体外干细胞成球培养、划痕实验及免疫印迹法检测其增殖能力、体外成球能力和迁移能力方面的改变。结果CHIR-99021作用24h后NCI-H23细胞的增殖能力、干细胞成球率均明显提升,与对照组的差异均有统计学意义（P〈0.05）,划痕愈合时间缩短。CHIR-999021干预后的NCI-H23细胞、NCI-H23干细胞中,GSK-3β磷酸化显著降低,增殖细胞核抗原、CD133、乙醛脱氢酶1A1、Nanog、基质金属蛋白酶-2表达增加。β-cateninsiRNA沉默β-catenin后NCI-H23中CD133、乙醛脱氢酶1A1和Nanog表达减少,干细胞成球率也较对照组降低（P〈0.05）。结论Wnt/β-catenin通路参与了非小细胞肺癌NCI-H23细胞干性调节,这对于非小细胞肺癌的防治有一定价值。

简介：摘要目的探究高、低剂量电离辐射全身照射后短时间内小鼠海马组织损伤规律，分析小胶质细胞和巨噬细胞极化模式在损伤中的作用。方法C57BL/6小鼠随机分为假照射组、低剂量组(0.05 Gy)、高剂量组(7 Gy)，低、高剂量组分别进行单次60Co γ射线的全身照射；于照射后6 h、1 d、3 d、7 d取小鼠海马组织，采用HE和尼氏(Nissl)染色法检测神经元形态结构，Tunnel染色法检测神经细胞凋亡，RT-PCR和免疫荧光试验分别检测海马区M1和M2型小胶质细胞标记物mRNA和蛋白质表达水平及分布规律；在照射后1个月，分别采用水迷宫、旷场、高架十字迷宫以及悬尾试验评估小鼠认知和情绪行为。结果病理学检测结果显示，辐射后小鼠海马区神经细胞形态结构改变，并伴随凋亡现象。60Co γ射线照射后6 h出现急性损伤，1 d、3 d有所缓解，7 d损伤持续存在，且呈剂量依赖性。免疫荧光染色结合共聚焦成像分析结果显示，与假照射组相比，7 Gy 60Co γ射线照射后6 h、1 d小鼠海马区小胶质细胞数量显著增加，M1型小胶质细胞标志物表达下调，M2型小胶质细胞标志物表达呈上调趋势，而在辐射后3 d和7 d，M2型小胶质细胞标志物出现降低趋势。RT-PCR结果显示，照射组M1和M2型小胶质细胞标志物基因mRNA表达水平在照射后6 h有上调趋势，但无统计学意义，相关促/抗炎因子mRNA表达水平明显上调。行为学试验结果显示，与对照组比较，照射后1个月小鼠在行为和情绪上差异均无统计学意义。结论60Co γ射线照射后可导致小鼠出现海马组织损伤，海马内小胶质细胞和巨噬细胞过表达并呈现不同极化状态。

简介：摘要目的建立嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗相关细胞因子释放综合征(CRS)的小鼠模型。方法通过分子克隆及慢病毒转染技术，构建靶向人CD19分子的CAR-T细胞，采用流式细胞术检测CAR-T细胞转染效率，酶联免疫吸附试验(ELISA)法及流式细胞术检测CAR-T细胞特异性杀伤靶细胞的能力。通过尾静脉注射CAR-T细胞至荷瘤重症联合免疫缺陷裸鼠体内，小鼠分为磷酸缓冲液组、低负荷组(注射1×105个人淋巴瘤细胞Raji-Luc2细胞)和高负荷组(注射5×105个Raji-Luc2细胞)。采用动物活体成像法检测肿瘤治疗效果，ELISA法检测小鼠血清中细胞因子人白细胞介素2(IL-2)、人γ-干扰素(IFN-γ)、鼠IL-6、鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平。结果经尾静脉注射人T细胞和T细胞+OKT-3抗体后，T细胞组和T细胞+OKT-3组小鼠的健康得分分别为(1.15±0.08)分和(2.90±0.15)分，差异有统计学意义(P<0.001)。T细胞+OKT-3组小鼠血清中人IL-2、人IFN-γ、人IL-15、鼠IL-6、鼠GM-CSF水平分别为(1 064.00±50.14)、(1 285.00±193.90)、(202.4±18.76)、(1 478.00±289.20)和(350.70±42.27)pg/ml，均高于T细胞组[分别为(22.67±6.36)、(23.67±3.71)、(44.33±14.45)、(147.30±36.20)和(138.00±22.74)pg/ml，均P<0.05]；OKT-3联合人T细胞引起小鼠血清中细胞因子人IL-2、人IFN-γ、鼠IL-6、鼠GM-CSF水平迅速升高，并伴有体温升高及体重下降。成功构建靶向CD19分子的CAR-T细胞，流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率>30%。ELISA结果显示，在CD19抗原存在时，CAR-T19细胞与Raji、Nalm-6共孵育组细胞分泌IL-2和IFN-γ的水平分别为(561.00±37.07)、(680.30±71.27)、(369.00±25.71)和(523.00±26.31)pg/ml，均高于与K562共孵育组[分别为(55.00±20.53)和(64.00±7.55)pg/ml，均P<0.001]。小鼠成像实验显示，小鼠成瘤后第7天经尾静脉回输活化后的CAR-T19细胞，成瘤第13天，低负荷和高负荷组小鼠肿瘤荧光强度均低于接种肿瘤的第7天，高负荷组肿瘤荧光强度由144.00±24.69减少至5.02±2.35(P＝0.005)，低负荷组肿瘤荧光强度由58.47±9.36减少至3.48±1.67(P＝0.004)。荷瘤小鼠注射CAR-T19细胞72 h后，血清中T细胞活化相关细胞因子人IL-2、人IL-15、人IFN-γ水平迅速增高，单核细胞相关因子鼠IL-16、鼠GM-CSF分泌增加，同时伴随有体温升高和体重降低等CRS典型特征。结论体外成功构建靶向CD19分子的CAR-T细胞，通过CAR-T细胞回输治疗验证了小鼠体内CRS现象的发生，为CAR-T细胞治疗相关CRS的发生机制及CRS预防策略提供了动物模型参考。

简介：摘要目的观察黄芪甲苷对溶血磷脂酸（LPA）诱导的小鼠神经母细胞瘤细胞（N1E-115）神经突起回缩的影响，探讨其作用机制。方法将N1E-115细胞按随机数字表法分为空白组、模型组及0、40、80 µg/ml黄芪甲苷组。0、40、80 µg/ml黄芪甲苷组分别以20、40、80 µg/ml黄芪甲苷干预24 h，空白组及模型组不做药物干预，每组以无血清培养12 h，模型组及黄芪甲苷各浓度组以40 µmol/L的LPA干预10 min。于倒置显微镜观察并拍照，采用Image J软件计数N1E-115细胞神经突起数量；采用免疫荧光染色法检测细胞RAS同源基因家族成员A（RhoA）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2（ROCK2）、p-ROCK2、磷酸化肌球蛋白轻链2（p-MLC2）蛋白表达；荧光实时定量PCR法检测RhoA、ROCK2 mRNA水平；Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-MLC2、肌球蛋白轻链2（MLC2）蛋白表达。结果与20 µg/ml黄芪甲苷组比较，40、80 µg/ml黄芪甲苷组神经突起回缩抑制率升高（P<0.05）；与模型组比较，20、40、80 µg/ml黄芪甲苷组RhoA、p-ROCK2、p-MLC2蛋白平均荧光强度及40 µg/ml黄芪甲苷组ROCK2蛋白平均荧光强度降低（P<0.05或P<0.01）；20、40、80 µg/ml黄芪甲苷组RhoA mRNA［（0.89±0.09）、（0.41±0.01）、（0.09±0.03）比（1.50±0.01）］、ROCK2 mRNA［（0.89±0.09），（0.14±0.01），（0.20±0.01）比（1.62±0.17）］水平降低（P<0.05或P<0.01）；20、40、80 µg/ml黄芪甲苷组ROCK2蛋白［（0.75±0.06，0.57±0.02，0.66±0.01）比（1.08±0.02）］、p-MLC2蛋白［（1.72±0.03）、（1.40±0.04）、（1.29±0.03）比（2.19±0.11）］、MLC2蛋白［（1.13±0.02）、（0.68±0.03）、（0.75±0.03）比（1.60±0.03）］及40、80 µg/ml黄芪甲苷组RhoA蛋白［（0.35±0.01）、（0.40±0.03）比（0.57±0.08）］表达降低（P<0.05或P<0.01）。结论黄芪甲苷可阻止LPA诱导的神经突起回缩，促进受损神经再生，其机制可能与下调RhoA-ROCK2通路RhoA、ROCK2、p-ROCK2、p-MLC2、MLC2蛋白表达，抑制神经生长锥崩溃有关。