简介：目的探讨Th22和Th17细胞可能在白癜风发生发展中的作用机制。方法选择白癜风患者60例(按不同分期划分,活动期白癜风患者30例,静止期白癜风患者30例;按不同分型划分,寻常型白癜风患者29例,节段型白癜风患者31例),以年龄和性别匹配的健康正常人30例为对照。取外周静脉血,免疫荧光PCR法检测外周血中IL-22mRNA和IL-17mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-22和IL-17表达含量。将所检测结果与白癜风患者病情进行相关分析。结果(1)白癜风患者实验组外周血中IL-22mRNA和IL-17mRNA以及IL-22和IL-17蛋白的表达水平均明显高于健康对照组,其中活动期白癜风患者明显高于静止期患者。(2)寻常性白癜风患者外周血中IL-22mRNA和IL-17mRNA以及IL-22和IL-17表达水平显著高于节段型患者。(3)在白癜风患者组中,外周血IL-22mRNA和IL-17mRNA表达水平以及IL-22和IL-17水平呈正相关(r=0.753,P=0.000)。结论Th22和Th17细胞在白癜风发生发展中起到一定作用。

简介：摘要目的探讨白细胞介素17A(IL-17A)调控小鼠角质形成细胞(KC)表达IL-1β和IL-23的机制。方法从400只新生雌雄不限C57BL/6野生型小鼠皮肤中分离原代KC，用含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养于24孔板中，用于以下实验。(1)取细胞，采用随机数字表法(分组方法下同)分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、IL-17A刺激组，分别加入10 μL的PBS、质量浓度为100 ng/mL的IL-17A培养6 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中IL-1β和IL-23 mRNA表达水平，每组3个样本。(2)取细胞，分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、IL-17A＋DMSO组、IL-17A＋核因子κB抑制剂组、IL-17A＋信号转导及转录激活因子3(STAT3)抑制剂组、IL-17A＋胞外信号调节激酶1(ERK1)抑制剂组、IL-17A＋ERK2抑制剂组、IL-17A＋c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂组，分别加入相应试剂，各试剂体积均为10 μL，IL-17A质量浓度为100 ng/mL，核因子κB、STAT3、ERK1、ERK2、JNK信号通路抑制剂PDTC、S3I-201、SCH772984、SCH772984、SP600125物质的量浓度分别为5 μmol/L、100 μmol/L、4 nmol/L、1 nmol/L、10 μmol/L，均培养6 h。采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中IL-1β和IL-23 mRNA表达水平，每组3个样本。(3)取细胞，同实验(1)分组处理，采用蛋白质印迹法检测细胞中核因子κB磷酸化、STAT3磷酸化、ERK磷酸化、JNK磷酸化水平，每组3个样本。对数据行双尾Student t检验、单因素方差分析、t检验和Bonferroni校正。结果(1)培养6 h，与PBS对照组比较，IL-17A刺激组细胞中IL-1β和IL-23 mRNA表达水平均明显升高(t＝13.46、6.72，P<0.01)。(2)培养6 h，DMSO对照组、IL-17A＋DMSO组、IL-17A＋核因子κB抑制剂组、IL-17A＋STAT3抑制剂组、IL-17A＋ERK1抑制剂组、IL-17A＋ERK2抑制剂组、IL-17A＋JNK抑制剂组细胞中IL-1β与IL-23 mRNA表达水平分别为1.00±0.11、4.01±0.32、0.32±0.06、1.76±0.43、3.62±0.24、3.80±0.43、4.26±0.74和1.03±0.29、4.08±0.34、4.76±0.38、4.70±0.21、1.06±0.42、0.92±0.21、0.39±0.05。与DMSO对照组比较，IL-17A＋DMSO组细胞中IL-1β和IL-23 mRNA表达水平均明显升高(t＝9.24、12.60，P<0.01)。与IL-17A＋DMSO组比较，IL-17A＋核因子κB抑制剂组与IL-17A＋STAT3抑制剂组细胞中IL-1β mRNA表达水平均明显下降(t＝11.34、6.91，P<0.01)，IL-17A＋ERK1抑制剂组、IL-17A＋ERK2抑制剂组和IL-17A＋JNK抑制剂组细胞中IL-23 mRNA表达水平均明显下降(t＝12.44、13.03、15.21，P<0.01)。(3)培养6 h，与PBS对照组比较，IL-17A刺激组细胞中核因子κB磷酸化、STAT3磷酸化、ERK磷酸化、JNK磷酸化水平均明显升高。结论IL-17A分别通过促进核因子κB、STAT3信号通路磷酸化与ERK、JNK信号通路磷酸化促进小鼠KC转录表达IL-1β与IL-23。

简介：目的：通过观察多柔比星（别名阿霉素）对肝癌细胞GATA4表达和细胞凋亡的影响，探讨多柔比星抑制肝癌细胞增殖的可能机制。方法：检测不同p53状态肝癌细胞中GATA4的表达。以300nmol／L多柔比星加入高表达GATA4的小鼠Hepal-6肝癌细胞培养液中。碘化丙啶染色，以流式细胞术观察用药后不同时间点（0、6、12、18、24、30h）凋亡细胞比例，MTT法观察细胞生长，半定量RT—PCR比较不同时间点GATA4、bax、bel—XLbel-2mRNA的表达，Westernblot检测GATA4和细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果：不同p53状态肝癌细胞中均有GATA4的高表达。分别与0h或6h相比，多柔比星处理后12、18、24、30h的肝癌细胞凋亡率显著增加（流式细胞术检测），且肝癌细胞增殖显著减少（MTT法）。0、6、12、18、24和30hGATA4mRNA和GATA4蛋白质的表达呈递减趋势，Bcl—XLmRNA、PCNA蛋白质和bcl-2mRNA／baxmRNA比值在6h后也相继递减。结论：GATA4和p53在肝癌细胞中的表达可能不相关。多柔比星可抑制GATA4的表达，而Bel—XLmRNA、bcl-2mRNA、bcl-2／bax和PCNA表达的减少，以及凋亡细胞的增多则相对滞后。多柔比星可能通过抑制GATA4的表达来抑制肝癌细胞增殖或诱导肝癌细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨脓毒症小鼠中性粒细胞对T淋巴细胞（T细胞）功能的影响以及CD80/细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）途径在其中发挥的作用。方法①体内实验：将6～8周龄雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组，n＝20）、Sham+CTLA-4抗体处理组（Sham+aCTLA-4组，n＝20）、盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型组（CLP组，n＝30）和CLP+CTLA-4抗体处理组（CLP+aCTLA-4组，n＝30）。采用CLP制备小鼠脓毒症模型；Sham组不对盲肠进行结扎和穿孔，余操作同CLP组；CTLA-4抗体处理组分别于术后6 h、24 h腹腔注射CTLA-4抗体50 µg。术后48 h，Sham组、Sham+aCTLA-4组随机取6只小鼠，CLP组和CLP+aCTLA-4组随机取14只小鼠检测脾脏T细胞活化指标CD69的表达；并取脾脏、骨髓和外周血，应用流式细胞仪检测中性粒细胞表面CD80的表达；采用免疫荧光法和流式细胞仪检测脾脏T细胞表面CTLA-4的表达。各组其余小鼠用于观察术后96 h生存情况。②体外实验1：提取健康小鼠骨髓中性粒细胞，分别用LPS（1 mg/L）刺激4、8、12 h，每个时间点设置加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）的对照组，检测各时间点CD80的表达。③体外实验2：提取健康小鼠脾脏T细胞，分为PBS对照组、LPS组（LPS终浓度1 mg/L）、中性粒细胞组和中性粒细胞+LPS组，后两组建立中性粒细胞与T细胞共培养模型后再给予相应处理，检测T细胞表面CTLA-4的表达；以上述4组为对照，再分别设置CTLA-4抗体处理组（CTLA-4抗体终浓度50 mg/L），48 h后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-2（IL-2）水平。结果①体内实验结果：与Sham组比较，CLP组脾脏、骨髓、外周血中性粒细胞表面CD80表达均上调，T细胞表面CTLA-4表达明显增加〔（9.98±0.84）%比（3.48±0.64）%，P<0.05〕，说明脓毒症时中性粒细胞可能通过CD80/CTLA-4途径影响T细胞功能。与CLP组比较，CTLA-4抗体可明显提高CLP小鼠96 h累积生存率（56.25%比18.75%，P<0.05），增加T细胞表面CD69的表达，说明CTLA-4抗体可能会促进脓毒症时T细胞活化，并提高生存率。②体外实验结果：随LPS刺激时间延长，中性粒细胞表面CD80表达较PBS对照组明显增加，并呈一定时间依赖性〔4 h：（6.35±0.40）%比（3.41±0.40）%，8 h：（8.57±0.64）%比（3.09±0.27）%，12 h：（19.83±1.06）%比（5.16±0.36）%，均P<0.05〕。与PBS对照组比较，单纯LPS刺激对CD4+/CD8+ T细胞表面CTLA-4的表达没有明显影响，而与中性粒细胞共培养后CTLA-4的表达明显增加〔CD4+：（4.92±0.30）%比（3.33±0.25）%，CD8+：（4.26±0.21）%比（2.53±0.66）%，均P<0.05〕，与LPS刺激的中性粒细胞共培养后CTLA-4表达的增加趋势则更加明显〔CD4+：（6.34±0.50）%比（3.33±0.25）%，CD8+：（6.21±0.41）%比（2.53±0.66）%，均P<0.05〕。在PBS对照组和LPS组中，CTLA-4抗体对T细胞分泌IL-2无明显影响。与PBS对照组比较，与中性粒细胞共培养能抑制T细胞分泌IL-2（ng/L：1 938.00±68.45比2 547.00±218.00，P<0.05），与LPS刺激后中性粒细胞共培养则抑制作用更明显（ng/L：1 073.00±34.39比2 547.00±218.00，P<0.05）；而CTLA-4抗体的加入可部分恢复IL-2的分泌。说明中性粒细胞在促进T细胞表面CTLA-4表达后，可能通过减少IL-2生成来介导T细胞功能抑制。结论脓毒症时中性粒细胞可介导T细胞功能障碍，而CD80/CTLA-4途径在其中发挥了重要作用。拮抗CTLA-4后，脓毒症小鼠生存率和T细胞功能明显改善，这可能会成为脓毒症免疫治疗的新方法。

简介：目的了解西罗莫司对创伤小鼠脾脏树突状细胞（DC）诱导异源性T淋巴细胞应答能力的体外调节作用.方法将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组与创伤组,每组12只.将创伤组麻醉后造成失血合并闭合性骨折,对照组仅麻醉不致伤,24h后分离2组小鼠脾脏DC.将2组DC分为西罗莫司阴性对照组和创伤组（不用西罗莫司处理）,以及西罗莫司阳性对照组和创伤组（用10μg/L西罗莫司处理6h）.检测各组DC自噬活性（用荧光强度值表示）及DC介导的混合淋巴细胞反应（MLR）变化（用吸光度值表示）.流式细胞仪检测细胞表面主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ与共刺激分子CD40、CD80、CD86表达.用ELISA法检测LPS刺激后DC中IL-12p40、IL-12p70和IL-10的水平.对数据进行单因素方差分析.结果（1）西罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC自噬活性（荧光强度值为13±2）及其介导的MLR强度均较西罗莫司阴性对照组（荧光强度值为22±6）明显减弱（F=212.836,P〈0.05）.与西罗莫司阴性对照组和创伤组比较,西罗莫司阳性对照组和创伤组自噬活性（45±8、44±8）均明显增强（F=212.836,P〈0.05或P〈0.01）.西罗莫司阳性创伤组MLR强度较西罗莫司阴性创伤组明显增强（F值分别为101.426、86.533,P值均小于0.05）.（2）西罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC表面的MHCⅡ[（60±9）%]及CD40[（4±1）%]表达较西罗莫司阴性对照组[（85±6）%、（8±1）%]明显降低（F值分别为37.918、40.426,P值均小于0.05）,西罗莫司阳性创伤组MHCⅡ表达[（78±7）%]较西罗莫司阴性创伤组明显提高（F=37.918,P〈0.05）.（3）两罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC的IL-12p40、IL-12p70表达水平[（120±13）、（10±3）pg/mL]较西罗莫司阴性对照组[（200±25）、（20±6）pg/mL]明显降低（F值分别为218.646、310.253,P值均小于0.05）;与西罗莫司阴性对照组和创伤组比较,西罗莫司阳性对

简介：目的:研究悬浮培养的小鼠骨间充质干细胞(MSC)对T细胞的调节作用及其机制。方法:采用低吸附细胞培养皿培养小鼠骨悬浮MSC,采用贴附细胞培养板培养小鼠贴壁MSC。在光学显微镜下观察悬浮MSC的形态并进行成骨和成脂肪诱导分化。应用以流式细胞术检测悬浮MSC的免疫表型。收获悬浮MSC和贴壁MSC的培养上清,采用流式细胞术检测和CFSE法比较悬浮MSC抑制T细胞增殖的能力。采用定量PCR分析不同培养上清对T细胞表达的免疫因子的影响。采用定量PCR检测悬浮MSC表达的免疫调节因子。结果:悬浮培养的小鼠骨MSC呈现为悬浮球状,具有成骨和成脂肪分化能力。流式细胞术检测结果表明,悬浮MSC高表达CD29、CD44、Sca-1和CD105,低表达CD11b、CD45、CD31和Ia。CFSE法结果提示,悬浮MSC培养上清能够抑制T细胞增殖。定量PCR检测结果表明,悬浮MSC上清能够抑制T细胞表达干扰素γ和白介素17A的表达。进一步分析发现,相对于贴壁MSC,悬浮MSC表达的白介素6和转化生长因子β1的水平较高。结论:悬浮法培养获得的MSC能够抑制T细胞增殖,其对T细胞调节作用与贴壁MSC不同。

简介：目的:观察双氢青蒿素对CpGODN诱导小鼠RAW264.7细胞释放细胞因子的影响.方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,用CpGODN刺激小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6,用不同浓度双氢青蒿素进行拮抗,ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量.结果:双氢青蒿素可抑制CpGODN刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6,并呈一定的量效关系,其中对IL-6最大抑制率可达到66.5%,而对TNF-α释放的最大抑制率仅为7.2%,其影响细胞因子释放的作用与细胞毒作用无关.结论:双氢青蒿素呈浓度依赖性地抑制CpGODN刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6,但对TNF-α的影响较小.

简介：背景：多项证据提示感染后肠易激综合征（PI-IBS）患者的肠道黏膜中存在T细胞介导的低度炎症.树突细胞（DC）是肠道黏膜免疫系统中最重要的抗原呈递细胞,目前关于DC在PI-IBS中作用的报道尚少.目的：研究肠道黏膜固有层DC在急性肠道感染的不同阶段对CD4＋T细胞的影响,探讨DC在肠道感染消退后维持肠道黏膜免疫系统持续激活中的作用.方法：建立旋毛虫感染后内脏高敏感小鼠模型以模拟人类PI-IBS.肠道黏膜固有层DC与脾脏CD4＋T细胞于体外共培养120h,ELISA法检测细胞培养上清液中Th17、Th2、Th1相关细胞因子IL-17、IL-4、IFN-γ水平.结果：与单独培养相比,CD4＋T细胞与DC共培养后,感染后8周组IL-17水平增加值明显高于对照组（P=0.001）和感染后2周组（P=0.279）：感染后2周组IL-4水平增加值明显高于对照组（P=0.041）和感染后8周组（P=0.204）三组间IFN-γ水平增加值差异均无统计学意义.结论：感染后内脏高敏感小鼠肠道黏膜固有层DC诱导CD4＋T细胞分化为Th17细胞并使之活化可能是肠道感染消退后维持肠道黏膜免疫系统持续激活的主要机制.

简介：摘要目的研究小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus，MCMV)感染C57BL/6小鼠诱导自然杀伤(natural killer，NK)细胞免疫应答的最佳剂量和最佳时间。方法分别根据剂量和时间效应进行分组，剂量效应：无特定病原体( specific pathogen free，SPF)级8周龄C57BL/6雌鼠15只，根据MCMV滴度分为四组，未感染的0个蚀斑形成单位(plaque forming unit，PFU)组(3只)、2.5×104PFU组(4只)、5.0×104PFU组(4只)和10.0×104PFU组(4只)，随后常规饲养7天；时间效应：将8周龄C57BL/6雌鼠14只随机分为四组，分别为0天组(4只)、3天组(4只)、7天组(4只)、14天组(2只)，建模0天腹腔注射5.0×104PFU的MCMV感染各组小鼠。在感染后对应天数处死各组小鼠，取小鼠脾脏制成单细胞悬液，并用流式细胞术分析各种组NK细胞比例、Ly49H及颗粒酶B(granzyme B，GZMB)、NK细胞溶酶体相关膜蛋白-1(CD107a)和γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的表达。结果MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×104PFU组、5.0×104PFU组和10.0×104PFU组脾脏NK细胞占淋巴细胞的比例明显下降{(1.90±0.32)%比[(0.91±0.14)%，(0.62±0.16)%，(0.85±0.26)%]，F＝21.271，P<0.05}，CD27＋CD11b＋NK细胞比例显著下降{(22.40±4.55)%比[(13.20±1.29)%，(10.78±1.21)%，(11.38±1.76)%]，F＝17.272，P<0.05}，CD11b＋NK细胞比例显著增加{(59.87±5.33)%比[(71.08±1.82)%，(74.25±1.95)%，(70.90±2.49)%]，F＝14.641，P<0.05)}，CD43＋KLRG1＋NK细胞占NK细胞的比例增加{(39.40±5.73)%比[(77.00±0.67)%，( 81.23±2.21)%，( 76.63±7.36)%]，F＝55.282，P<0.05)}，Ly49H＋NK细胞亚群数量显著增加{(42.07±1.21)%比[(63.50±1.30)%，(63.58±3.71)%，(61.68±4.84)%]，F＝32.273，P<0.05)}，组间差异具有统计学意义。在NK细胞功能方面，MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×104PFU组、5.0×104PFU组和10.0×104PFU GZMB的表达显著增加{(287.00±30.79)%比[(384.25±63.91)%，(529.75±66.08)%，(466.50±83.38)%]，F＝8.730，P<0.05}，IFN-γ分泌减少{(36.00±5.33)%比[(4.88±3.35)%，(3.03±1.56)%，(3.61±2.18)%]，F＝87.663，P<0.05}。时间效应的比较结果显示，MCMV感染3天后，NK细胞CD107a和颗粒酶B表达与0天相比显著升高[(22.98±4.58)%比(6.32±0.75)%，(5969.25±1159.86)%比(788.50±88.17)%，F值分别为41.072和67.448，P值均<0.05]，差异具有统计学意义。结论本研究表明，MCMV感染C57BL/6小鼠模型可选择的最佳感染剂量为5×104PFU，最佳建模时间为感染后3天。

简介：本报道VitB1、VitB6、VitB12 和VitC对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用,几种水溶性维生素（VitB1、VitB6、VitB12 and VitC）对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用,VitB12对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用

简介：为比较骨髓腔内（IBM）或静脉（Ⅳ）等不同途径输注小鼠造血干细胞后在受体内的分布特点及对移植效果的影响，将C57BL/6胎鼠及新生鼠外周血（FNPB）单个核细胞（MNC）移植经亚致死量^60Coγ射线辐照的BALB／c鼠。受鼠随机分为6组：单侧IBM组；双侧IBM组；Ⅳ组；双侧IBM＋Ⅳ组；照射对照组；空白对照组。用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记的FNPBMNC在受体内的分布变化，观察移植后受鼠生存状况、植入水平、造血恢复及GVHD情况。结果显示：IBM注射的供体FNPBMNC主要积聚于注射侧骨髓腔内，少量FNPBMNC可经血循环二次归巢，肺部滞留很少。单／双侧IBM组输注的FNPBMNC总数无明显差异，但经双侧IBM输入FN—PBMNC渗漏至外周血或其它组织器官的比例更少；IBM各组造血重建速度均优于Ⅳ组，尤以双侧IBM组最快，其外周血象和造血干祖细胞集落产率在移植后第21天已接近正常水平，单侧IBM组、双侧IBM＋Ⅳ组次之；IBM组各时点植入水平均明显高于Ⅳ组，双侧IBM组注射侧胫骨植入水平与单侧IBM组无明显差异，二次移植中双侧IBM组的植入水平明显高于Ⅳ组；IBM移植组90天存活率≥80％，Ⅳ组仅为50％。结论：双侧IBM有利于更多造血干细胞归巢，促进植入和造血重建，提高IBM途径移植的效果。

简介：摘要目的观察汉黄芩素对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎的影响并探讨作用机制。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，每组6只。对照组正常饮水，其他2组连续给予含2.5%DSS的饮用水7 d，治疗组在喂水第2天和第4天腹腔注射汉黄芩素。第8天处死小鼠并取材，通过测量小鼠结肠长度和HE染色评估小鼠结肠损伤和炎症水平，利用免疫荧光检测小鼠结肠组织中性粒细胞的浸润数量。另外，以25、50、100 μmol/L汉黄芩素体外干预小鼠骨髓中性粒细胞，阴性对照组不予任何干预。采用流式细胞术检测中性粒细胞的凋亡，Western blot检测中性粒细胞抗凋亡蛋白髓细胞白血病-1（Mcl-1）和细胞外信号调节激酶（ERK）表达变化。结果与模型组比较，治疗组的小鼠结肠明显较长[（7.80 ± 0.21）cm比（6.43 ± 0.10）cm，P<0.01）]，结肠组织病理损伤评分明显降低[（6.83 ± 0.98）分比（14.33 ± 1.03）分，P<0.01）]，结肠中性粒细胞浸润显著减少[（8.52 ± 0.15）个/低倍镜视野比（29.43 ± 0.43）个/低倍镜视野，P<0.01）]。阴性对照组以及25、50、100 μmol/L汉黄芩素组中性粒细胞的凋亡率分别为6.41%±0.51%、14.01% ± 0.81%、20.89% ± 0.82%、24.23% ± 0.29%；随着汉黄芩素浓度增高，中性粒细胞凋亡率明显升高，组间差异具有统计学意义（均P<0.01）。与阴性对照组比较，25、50、100 μmol/L汉黄芩素组中性粒细胞磷酸化ERK表达均明显减少（均P<0.05）。随着汉黄芩素浓度升高，中性粒细胞Mcl-1蛋白表达逐渐减少（均P<0.05）。结论汉黄芩素可浓度依赖性诱导小鼠中性粒细胞凋亡，减少结肠组织中性粒细胞浸润，减轻肠道损伤，上述作用可能通过抑制ERK磷酸化和浓度依赖性下调Mcl-1表达来实现的。

简介：摘要目的：研究小鼠视神经损伤后不同时间点视神经小胶质细胞的数目与形态变化。方法：实验研究。选取32只成年雄性健康CX3CR1—/GFP转基因杂交小鼠，按照随机数字表法将小鼠随机分为正常对照组、视神经损伤1、7、14 d组，每组8只。视神经损伤组均在左眼建立视神经夹伤模型，右眼不处理，正常对照组不做任何处理。分别于上述时间点制备小鼠视神经冰冻切片，每根视神经取3张切片（30 μm），采用共聚焦显微镜在距离眼球端500 μm处拍摄图像，比较小胶质细胞的数量和形态变化。4组小胶质细胞数目比较采用单因素方差分析。结果：正常对照组、视神经损伤1、7和14 d组的视神经小胶质细胞数目分别为（438±16）个/mm2、（323±15）个/mm2、（1 252±107）个/mm2、（1 474±113）个/mm2。视神经损伤7、14 d组小胶质细胞数量明显多于正常对照组和视神经损伤1 d组，差异均有统计学意义（均P<0.001）。正常对照组的视神经小胶质细胞均匀分布，细胞核较小，分枝细长并向四周伸展。视神经损伤1 d组，小胶质细胞分枝数量减少，细胞核形态变化不明显。损伤7 d组的视神经小胶质细胞大量激活，排列较紊乱，存在少量细胞聚集现象，分枝短而粗，且越靠近细胞核分枝越粗，细胞核体积明显增大。视神经损伤14 d组，视神经小胶质细胞形态与损伤7 d组类似。结论：小鼠视神经夹持损伤后，视神经小胶质细胞初期数目减少，随着损伤时间延长，小胶质细胞数目大量增加，且形态由分枝状变为阿米巴样。

简介：摘要目的评价犬肾细胞基质四价流感裂解疫苗(MDCK-Va)配伍不同佐剂后的免疫原性。方法将高、中、低剂量的MDCK-Va和鸡胚基质四价流感裂解疫苗(egg-Va)原液分别肌肉免疫BALB/c小鼠2次，间隔3周，小鼠眼静脉采血，分离血清，血凝抑制(hemagglutination inhibition，HI)试验检测抗体效价。不同剂量的MDCK-Va分别配伍QS21、AddVax、PolyI∶C、CpG ODN 1826以及AddVax/PolyI∶C(Add/Poly)联合佐剂，免疫小鼠，初次免疫21 d后，小鼠眼静脉采血，HI和微量中和(microneutralization，MN)试验检测抗体效价，同等剂量加强免疫21 d后，再次采血检测抗体效价。10 μg MDCK-Va配伍上述佐剂，加强免疫5 d后，取小鼠脾脏检测脾指数和脾细胞分型。结果MDCK-Va诱导的各型别(H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagate)的血清效价均非劣效egg-Va诱导的血清效价。QS21/Va、AddVax/Va、PolyI∶C/Va、CpG ODN 1826/Va，以及Add/Poly/Va诱导的小鼠血清HI抗体效价均高于MDCK-Va，尤其是QS21/Va和Add/Poly/Va诱导的保护性效价，其差异具有统计学意义。对于H1N1疫苗，血清HI抗体和MN抗体之间的Pearson相关系数为0.737~0.910；对于H3N2亚型，HI抗体和MN抗体的Pearson相关系数为0.839~0.947。QS21/Va组具有明显的脾指数增高，但淋巴细胞占比降低。QS21/Va和Add/Poly/Va对小鼠脾脏中性粒细胞和CD4/CD8细胞的刺激明显强于其他佐剂。结论Add/Poly/Va组对MDCK-Va具有较强的免疫增强作用，可作为MDCK-Va的候选佐剂。HI和MN试验检测的抗体具有很强的正相关性。

简介：目的在路易斯肺癌LLC荷瘤小鼠模型中通过删除外周血中骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）,探讨MDSCs对CD8＋T细胞数量和功能、体内肿瘤生长及小鼠生存期的影响。方法将C57小鼠皮下接种LLC,尾静脉注射Gr-1抗体删除荷瘤小鼠血液中的MDSC或注射对照抗体,于不同时间点采尾血,应用流式细胞术检测外周血中MDSC和CD8＋T细胞的变化,记录肿瘤生长情况和小鼠生存期,比较两组荷瘤小鼠的脾细胞对LLC细胞的杀伤作用。结果LLC荷瘤7d后小鼠中MDSCs比例（%）（23.870±1.350）显著高于正常小鼠（7.600±0.677）（P〈0.001）,CD8＋T细胞比例（%）（7.906±0.428）显著低于正常小鼠（11.220±0.606）（P〈0.001）;荷瘤7d注射Gr-1删除抗体或对照抗体,3d后删除组外周血MDSCs比例（%）较未删除组显著降低（分别为1.578±0.299vs38.340±3.214,P〈0.001）,CD8＋T细胞比例（%）显著高于未删除组（分别为9.464±0.820vs4.024±0.488,P〈0.001）;抗体注射10d后删除组MDSCs比例（%）较之前显著增加（31.980±3.595）,但仍然低于普通荷瘤组（63.660±5.763）（P=0.0016）,CD8＋T细胞比例（%）较之前降低（5.806±0.554）,仍高于普通荷瘤组（2.894±0.330）（P=0.0019）;MDSCs删除组小鼠肿瘤生长减缓（P〈0.05）、生存期延长（P=0.036,中位生存期46dvs53d）。结论在LLC荷瘤小鼠中删除MDSC能解除其对CD8＋T细胞的抑制,减缓肿瘤生长,延长小鼠生存期。

简介：目的观察电磁脉冲（electromagneticpulse，EMP）对中国仓鼠卵巢上皮细胞（Chinesehamsterovarycell，CHO细胞）和小鼠睾丸超微结构的影响，以探讨EMP对生殖系统影响的机制。方法电磁脉冲辐照CHO细胞和BALB／c雄性小鼠。分别干照后6h、12h和2h、12h取材。制备超薄切片。结果CHO细胞微绒毛减少，溶酶体增多，部分线粒体肿胀，胞浆出现少量空泡；小鼠睾丸组织中细胞间隙加大，有空泡、有髓鞘样结构出现，细胞膜轻度肿胀，溶酶体明显增加，线粒体肿胀、空泡化，内质网和核周间隙均扩张，核内出现空泡、髓鞘样结构。结论电磁脉冲辐照可导致CHO细胞和小鼠睾丸超微结构变化。可能是EMP引起生殖功能改变的原因之一。

简介：目的:为了探讨枸杞对皮肤及表皮郎格罕细胞(Langerhanscell,LC)的影响。方法:将单味中药枸杞溶于硅霜中,外涂小鼠皮肤。结果:枸杞可促进小鼠表皮LC数量增多、表达la抗原功能增强;图像分析表明枸杞对真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及DNA含量均有促进作用。结论:枸杞促进小鼠表皮LC数量增多,对皮肤免疫功能有增强作用。

简介：目的观察加味逍遥散对慢性应激小鼠学习记忆及免疫细胞的影响，为探讨加味逍遥散的药理作用。提供临床实验依据。方法BALB／c小鼠随机分为5组：正常对照组、应激组、逍遥散组、加味逍遥散低剂量组、加味逍遥散高剂量组。通过水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力。采用流式细胞仪检测小鼠脾组织中CD4、CD8的含量。结果加味逍遥散高、低剂量组、逍遥散组与应激组相比均能缩短逃避潜伏期（P〈0．01）、增加第一象限停留时间百分比（P（0．01）。小鼠脾淋巴细胞悬液中CD4^＋T细胞高于应激组（P〈0．05），而CD8^＊T细胞低于应激组（P〈0．05）及CD4／CD8比值低于应激组（P〈0．05）。结论逍遥散和加味逍遥散均具有显著拮抗因应激所致的学习记忆能力和免疫功能的改变。以高剂量加味逍遥散作用最佳。

简介：摘要目的探讨带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的pEGFP.N3是否能够有效转染ADSCs。方法提取pEGFP-Genesil-1质粒，采用Lipofectamine2000脂质体将绿色荧光表达质粒Genesil-1载体转染至ADSCs。镜检各个时间点含有荧光的鼻咽癌细胞数，并选取转染率最高时间点的鼻咽癌细胞，用流式检测精确的转染率。结果脂质体复合物转化ADSCs24h后，荧光倒置显微镜下可见绿色荧光，4ug/ml质粒浓度组转染48小时绿色荧光蛋白阳性细胞率达最高值。结论带有增强型绿色荧光蛋白基因的pEGFP.N3可以较为高效地转染ADSCs。

简介：摘要目的探讨鸢尾素(Irisin)对成骨细胞炎性反应的保护作用及其机制。方法2018年8月至2019年4月，往小鼠成骨细胞(MC3T3-E1，购自北京北纳生物公司)加入鸢尾素预处理后，再经脂多糖(LPS)刺激。实验分为6组：对照组(Control组)、LPS(5 mg/L)、LPS＋Irisin(25 μg/L)、LPS＋Irisin(50 μg/L)、LPS＋Irisin(100 μg/L)和LPS＋Irisin(200 μg/L)组。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量，流式细胞术检测线粒体活性与细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶-α (AMPK-α)、p-AMPK-α与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。两组比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用LSD检验。结果(1)与Control组比较(0.864±0.021)，LPS组细胞增殖明显下降(0.719±0.018)，而100 μg/L(0.760±0.033)与200 μg/L(0.809±0.025) Irisin预处理组细胞增殖的明显增加(F＝23.625，P<0.05)，差异有统计学意义；(2)与Control组比较(286.600±33.448)，LPS组ROS含量显著增加(402.600±42.694)，而Irisin预处理组(25～200 μg/L)(323.400±27.437、322.600±28.325、309.000±42.936、307.800±24.045)明显抑制ROS形成(F＝6.986，P<0.01)，差异有统计学意义；(3)与Control组比较，LPS刺激后明显降低线粒体活力[(31.800±3.242)%、(15.667±1.804)%，t＝7.532，P<0.01]，细胞凋亡率显著增加[(7.610±0.229)%、(14.057±1.631)%，t＝6.777，P<0.01]，差异有统计学意义。p-AMPK-α表达显著降低[(0.546±0.178)、(0.186±0.093)，t＝6.777，P<0.01]，而Caspase-3水平明显升高[(0.212±0.031)、(0.324±0.026)，t＝4.811，P<0.01]，差异有统计学意义；(4)与LPS处理组比较，Irisin＋LPS组中MC3T3-E1线粒体活性明显升高[(10.157±0.774)%、(27.500±1.572)%，t＝17.145，P<0.01]，细胞凋亡率显著减少[(11.927±0.385)%、(7.017±1.080)%，t＝7.417，P<0.01]，p-AMPK-α表达显著升高[(0.356±0.059)、(0.551±0.044)，t＝4.567，P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3显著下降[(0.384±0.071)、(0.202±0.031)，t＝4.051，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论Irisin抑制LPS诱导的小鼠成骨细胞凋亡，这一机制可能与激活AMPK信号有关。