简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法选取南阳市中心医院2017年5月到2019年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常肝细胞LO2、肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721和Huh7中miR-597表达水平；采用慢病毒在肝癌细胞系HepG2构建对照miRNA和miR-597过表达细胞系，分别为对照组和观察组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和异体移植瘤实验分析肿瘤细胞的增殖能力；采用流式细胞术分析细胞周期和凋亡水平；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-597的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测靶蛋白表达水平。组间计量资料比较采用t检验。结果肝细胞LO2中miR-597表达水平(1.09±0.15)明显高于肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和Huh7 (0.37±0.14、0.45±0.16、0.58±0.14)，差异有统计学意义(t＝4.011、3.714、3.281，P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.87±0.26)明显高于观察组(1.53±0.22)，差异有统计学意义(t＝3.091，P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(71.23±8.29)%]明显高于观察组[(38.54±4.98)%]，差异有统计学意义(t＝5.220，P<0.05)。对照组小鼠体内肿瘤体积[(1 284.59±209.32) mm3]明显高于观察组[(799.58±109.43) mm3]，差异有统计学意义(t＝5.530，P<0.05)。对照组小鼠肿瘤重量[(3.98±0.29) g]明显高于观察组[(1.42±0.19) g]，差异有统计学意义(t＝3.218，P<0.05)。对照组细胞S期比例[(34.21±4.58)%]明显高于观察组[(44.58±5.87)%]，差异有统计学意义(t＝4.719，P<0.05)。对照组细胞G2期比例[(32.14±4.28)%]低于观察组[(20.37±4.29)%]，差异有统计学意义(t＝3.612，P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.76±1.09)%]明显低于观察组[(24.54±3.68)%]，差异有统计学意义(t＝4.006，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因结果显示，Rab23是miR-597的靶基因。对照组细胞Rab23蛋白表达水平(1.48±0.18)明显高于观察组(0.79±0.15)，差异有统计学意义(t＝2.976，P<0.05)。结论miR-597通过Rab23调控肝癌细胞的增殖、周期和凋亡。

简介：摘要目的探讨特发性肺纤维化急性加重患者血浆天冬氨酸蛋白酶A(novel aspartie proteinase A, Napsin A)、表面活性蛋白A（surfactant protein A, SP-A）、表面活性蛋白D（surfactant protein D, SP-D）、血浆微小RNA29b-3p（miR29b-3p）、miR30c-5p、血浆外泌体miR21-5p和血浆游离线粒体DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）的表达变化及其意义。方法本研究为前瞻性研究，纳入2014年5月至2019年10月在河南省胸科医院就诊的特发性肺纤维化患者，记录其临床表现、肺功能情况和高分辨率CT。采用ELISA法检测血浆Napsin A、SP-A和SP-D，采用RT-PCR法检测血浆外泌体miR21-5p、血浆miR29b-3p、miR30c-5p和mtDNA。采用方差分析、非参数检验和卡方检验比较两组间上述指标的表达差异。Logistic回归分析AE-IPF的预测因素，并做ROC曲线分析上述指标诊断AE-IPF的价值。结果本研究共纳入45例特发性肺纤维化患者，其中男性37例，女性8例，年龄为（63.1±8.5）岁。两组间年龄、性别及疾病构成进行比较，差异无统计学意义（均P>0.05）。AE-IPF组游离线粒体DNA表达水平高于IPF组[10 143.48（8 045.85，12 609.65）copies/μL vs. 6 404.22（2 671.50，9 386.00） copies/μL，P<0.05]。AE-IPF组的抗"O"抗体（ASO）水平高于IPF组[（88.04±52.25）IU/mL vs.（32.38±19.91）IU/mL，P<0.01]。Logistic回归结果显示ASO是发生AE-IPF的独立预测因子（OR=1.068，95%CI：1.007~1.131，P<0.05）。联合mtDNA和ASO作ROC曲线，曲线下面积为0.884，敏感度为87.5%，特异度为85.7%。结论IPF急性加重时，mtDNA及ASO水平均升高，ASO可作为AE-IPF发生的独立预测因子。

简介：摘要目的探讨重症肺炎患者支气管肺泡灌洗液微小RNA-127-5p的表达特征。方法采集2016年4月至2017年5月20例重症肺炎患者与20例非呼吸道感染患者的支气管肺泡灌洗液（BALF），采用miRNA芯片技术对两组患者BALF中的微小RNA-127-5p表达特征进行分析。结果重症肺炎患者的微小RNA-127-5p表达量明显低于非呼吸道感染患者，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论通过测量微小RNA-127-5p表达量能够有效的诊断重症肺炎疾病，具有较高的临床推广价值。

简介：摘要目的探讨2型糖尿病患者外周血微小RNA-34c(miR-34c)表达与糖尿病足溃疡(DFU)以及糖尿病足骨髓炎(DFO)发病的相关关系。方法共入选60例新诊断2型糖尿病无足溃疡患者(T2DM组)、112名2型糖尿病合并足溃疡患者(DFU组)和60名糖耐量正常的对照人群(NC组)。根据有无合并骨髓炎，将112例DFU患者再分为2组：骨髓炎组(DFO组)64例，非骨髓炎组(NDFO组)48例。应用实时定量PCR(qRT-PCR)方法测定受试者外周血miR-34c水平，并对DFU以及DFO的临床特点以及危险因素进行分析。结果T2DM组外周血miR-34c表达水平较NC组显著增高[2.99(1.45～6.22)对1.01(0.89～1.52), P<0.05]，DFU组外周血miR-34c表达水平较T2DM组显著增高[9.65(6.15～18.63)对2.99(1.45～6.22), P<0.01]。此外，与NDFO组相比较，DFO组外周血miR-34c表达水平也显著增高[13.46(8.89～19.11)对6.02(5.93～14.72), P<0.01]。DFU患者外周血miR-34c表达水平与足溃疡的截肢率呈正相关(P＝0.030)，与8周后足溃疡愈合率呈负相关(P＝0.025)。多因素logistic回归分析显示高表达的miR-34c均为DFU以及DFO的独立危险因素(OR值分别为3.52，4.13；均P<0.01)。结论2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-34c表达水平增高，可能与DFU以及DFO的发生发展以及预后相关。

简介：摘要目的探讨微小RNA-325(miRNA-325)在肾小管上皮细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型中的作用及其机制。方法选取人肾小管上皮细胞HK-2，建立适当的肾小管上皮细胞H/R模型(缺氧24 h复氧2 h)。将HK-2细胞分为对照组、H/R组、H/R+抑制剂(inhibitor)组和H/R+抑制剂阴性对照(inNC)，转染miRNA-325 inhibitor和inNC后进行缺氧复氧处理，然后进行后续实验。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测HK2细胞在H/R后活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)等的表达水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HK2细胞中miRNA-325、Caspase-3和XIAP mRNA表达水平。使用双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-325与XIAP 3’端非编码区(3’UTR)之间的关系。组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞凋亡率高于对照组[(12.11±1.65)%比(3.88±0.24)%，t＝8.311，P<0.05]；H/R+Inhibitor组细胞凋亡率低于H/R组[(7.60±3.07)%比(12.11±1.65)%，t＝4.557，P<0.05]。Western blot结果显示，实验组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)、(0.63±0.01)、(0.61±0.02)比(0.41±0.01)，F＝212.095，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)、(0.63±0.01)、(0.64±0.04)比(0.41±0.02)，F＝105.138，P<0.05]蛋白表达量显著高于对照组，bcl-2[(0.57±0.02)、(0.52±0.02)、(0.49±0.01)比(0.62±0.02)，F＝89.498，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)、(0.24±0.03)、(0.24±0.01)比(0.33±0.03)，F＝27.575，P<0.05]表达量显著低于对照组；H/R+Inhibitor组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)比(0.61±0.02)，t＝11.437，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)比(0.64±0.04)，t＝7.253，P<0.05]的表达低于H/R组，bcl-2[(0.57±0.02)比(0.49±0.01)，t＝9.471，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)比(0.24±0.01)，t＝4.231，P<0.05]的表达量高于H/R组，差异均有统计学意义。qRT-PCR结果显示，实验组miRNA-325[(7.27±0.30)、(4.66±0.21)、(7.11±0.25)比(1.05±0.13)，F＝1453.045，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.52±0.05)、(1.26±0.06)、(1.53±0.05)比(1.00±0.01)，F＝241.375，P<0.05]表达水平显著高于对照组，而XIAP mRNA[(0.38±0.01)、(0.76±0.02)、(0.39±0.02)比(1.01±0.02)，F＝2569.583，P<0.05]表达低于对照组；H/R+Inhibitor组miRNA-325[(4.66±0.21)比(7.27±0.30)，t＝24.236，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.26±0.06)比(1.52±0.05)，t＝11.451，P<0.05]低于H/R组，而XIAP mRNA[(0.76±0.02)比(0.38±0.01)，t＝45.678，P<0.05]高于H/R组，差异均有统计学意义。荧光素酶活性检测表明共转染miRNA-325的野生型组酶活性低于对照组[(0.69±0.03)比(1.01±0.02)，t＝22.809，P<0.05]，而突变型组酶活性无明显变化[(1.04±0.11)比(0.99±0.06)，t＝0.983，P>0.05]。结论XIAP是miRNA-325的靶基因之一，抑制miRNA-325可以下调凋亡蛋白的表达，降低细胞凋亡率，从而保护肾小管上皮细胞。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-150与胆囊癌肿瘤上皮-间充质转化(EMT)的关系及其作用机制。方法实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测河北医科大学第二医院2018年1月至2019年5月手术切除的30例胆囊癌肿瘤组织中miR-150的表达，以30例慢性胆囊炎组织为对照；qPCR法同时检测组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA表达，分析miR-150与这些基因的关系。应用miR-150 mimics转染人胆囊癌细胞株GBC-SD，划痕实验及Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭的改变；qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各基因mRNA和蛋白的变化。两样本均数比较采用t检验。多样本均数比较时采用方差分析，方差分析后续的两两比较采用最小显著差异法(LSD)。两样本之间相关性比较采用线性相关分析。结果胆囊癌组织中miR-150和E-cadherin的mRNA表达均低于慢性胆囊炎组织(t＝-7.035、-14.146，P<0.01)；PCNA、N-cadherin、MMP-9的mRNA与慢性胆囊炎组织比较均明显增强(t＝3.813、9.339、5.616，P<0.01)。miR-150表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(t＝3.228、2.396、-2.604，P<0.05)。Pearson相关分析显示，miR-150与E-cadherin呈正相关(r＝0.630，P<0.05)，与PCNA、N-cadherin、MMP-9表达呈负相关(r＝-0.769、-0.628、-0.616，P<0.05)。转染miR-150 mimics后GBC-SD细胞的迁移侵袭能力减弱(F＝1 965.860、114.940，P<0.01)；转染后PCNA、N-cadherin、MMP-9表达降低，而E-cadherin表达增高(P<0.05)。结论胆囊癌组织中miR-150表达降低是肿瘤进展的因素，其机制可能在于miR-150通过调节一些基因表达参与肿瘤EMT过程。

简介：无

简介：摘要目的探讨缺血性心力衰竭患者血清微小RNA-133a(micro RNA-133a，miR-133a)表达浓度与心力衰竭各指标的关系及其临床应用价值。方法选取2018年1月至2019年9月在沈阳市第四人民医院确定诊断为缺血性心力衰竭的80例患者临床资料进行前瞻性分析，根据美国纽约心脏病协会(New York Heart Association，NYHA)分级分为NYHAⅠ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组各20例，选取同期健康体检者20名为健康对照组，采用全自动免疫分析仪检测外周血脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)浓度，采用超声心动图检测心功能各项指标，采用qRT-PCR检测血清miR-133a表达，比较不同心功能分级miR-133a表达浓度差异，对miR-133a与BNP浓度及超声心动图指标相关性进行分析。结果血清miR-133a表达在健康对照组(0.167±0.024)、NYHAⅠ级组(0.289±0.012)、NYHAⅡ级组(0.415±0.034)、NYHAⅢ级组(0.981±0.217)、NYHAⅣ级组(1.238±0.249)之间比较，差异有统计学意义(F＝106.4，P<0.001)；Pearson相关分析显示，miR-133a在NYHAⅡ、Ⅲ、Ⅳ级别中表达浓度均与BNP浓度呈现正相关性(r＝0.815，95%CI：0.582～0.924，P<0.001；r＝0.465，95%CI：0.029～0.753，P<0.05；r＝0.749，95%CI：0.459～0.895，P<0.001)。miR-133与射血分数值为负相关(r＝－0.811，95%CI：－0.875～－0.719，P<0.001)，与左心室后壁厚度值为正相关(r＝0.331，95%CI：0.120～0.513，P<0.01)，与左心室内径值为正相关(r＝0.845，95%CI：0.764～0.896，P<0.001)，与舒张末期容积值为正相关(r＝0.705，95%CI：0.572～0.803，P<0.001)。结论缺血性心力衰竭患者miR-133a表达浓度升高，并与心功能不良指标具有相关性，具有一定的诊断及预后判断价值。

简介：摘要外泌体是由细胞主动分泌的胞外囊泡，内含多种细胞特异的蛋白质、脂质、核酸等。外泌体作为细胞间通讯的载体，参与了调节脑梗死后中枢神经系统修复及功能重塑的过程。随着研究深入，越来越多研究表明，外泌体来源的微小RNA(miRNA)在脑梗死诊断和治疗中扮演重要角色，现就外泌体的生物学特性及其miRNA的研究应用做一综述。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-15b在胰腺癌(PC)的表达及其对胰腺癌细胞株增殖、迁移、凋亡的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-15b在4种购自中国科学院细胞库的胰腺癌细胞株[SW1990、人胰腺癌细胞株(CFPAC-1)、PANC-1、BxPC-3]和购自美国ATCC细胞库的人正常胰腺导管上皮细胞细胞株(HPDE6c7)的表达量。将稳定转染miR-15b短发卡RNA(shRNA)的CFPAC-1、PANC-1作为实验组，以转染阴性对照(NC)正常表达miR-15b的CFPAC-1、PANC-1作为对照组。转染后细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测CFPAC-1、PANC-1的增殖能力；Transwell迁移实验检测CFPAC-1、PANC-1的迁移能力；流式细胞术检测CFPAC-1、PANC-1的凋亡率。应用SPSS 19.0统计软件分析，计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示，多组资料间比较使用单因素方差分析和LSD-t检验，计数资料采用率值表示，组间比较采用χ2检验。结果miR-15b在4株胰腺癌细胞株(SW1990、CFPAC-1、PANC-1、BxPC-3)的表达量(3.63±1.02、5.28±0.76、6.72±1.39、4.68±1.56)较HPDE6c7的表达量(1.08±0.23)明显增高，差异有统计学意义(t＝9.944、10.326、12.013、15.877，P<0.01)。低表达miR-15b组的CFPAC-1在2、3、4 d细胞增殖能力shRNA(0.51±0.04、0.94±0.06、1.25±0.15)比对照组的CFPAC-1(0.68±0.06、1.21±0.09、1.95±0.12)显著下降，差异有统计学意义(t＝8.256、6.350、7.002，P<0.05)；低表达miR-15b组的PANC-1在2、3、4 d细胞增殖能力shRNA(0.48±0.05、0.76±0.13、1.44±0.25)比对照组的PANC-1(0.58±0.07、0.98±0.13、1.86±0.14)显著下降，差异有统计学意义(t＝9.988、10.022、13.050，P<0.01)。低表达miR-15b组的CFPAC-1、PANC-1穿过Transwell小室的细胞数量[(38.47±4.69)个、(47.83±12.47)个]比对照组细胞数[(62.39±7.39)个、(68.97±8.44)个]明显减少，差异有统计学意义(t＝5.798、8.465，P<0.05)。低表达miR-15b组CFPAC-1、PANC-1细胞凋亡率[(14.68±3.21)%、(11.57±2.52)%]较对照组细胞凋亡率[(4.29±1.42)%、(4.73±0.38)%]明显增高，差异有统计学意义(t＝6.350、8.669，P<0.05)。结论miR-15b在PC细胞中高表达，低表达miR-15b会降低PC细胞的增殖和迁移能力，促进PC细胞凋亡。

简介：摘要目的研究血清中微小核糖核酸(miRNA)的特异性表达与儿童扩张型心肌病(DCM)发生的相关性。方法收集2013年11月至2016年3月就诊于北京安贞医院小儿心脏中心且被确诊为DCM的儿童血清(DCM组，16例)及同期于北京安贞医院体检的年龄性别匹配的健康儿童血清(健康对照组，12例)，并进行miRNA测序。后期扩大样本量(DCM组扩大为30例，对照组扩大为16例)，对测序结果中有统计学意义的11种miRNAs行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证。结果血清miRNA测序结果，DCM组患儿较健康对照组儿童有172个miRNAs上调(fold change>2，P<0.001)，未发现下调的miRNAs。选择显著上调的top11miRNAs进行qRT-PCR试验验证，发现DCM组患儿血清中8个miRNAs(let-7f、let-7g、miR142-5p、miR143-3p、miR26a、miR27a-3p、miR27b-3p、miR126-3p)显著上调，差异均有统计学意义(均P<0.05)。在诊断DCM的受试者工作特征(ROC)曲线中，血清miR142-5p、miR143-3p、miR27b-3p、miR126-3p的曲线下面积分别为0.983、0.992、0.915、0.950，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论本研究发现4个血清miRNAs(miR-142-5p、miR-126-3p、miR-143-3p和miR-27b-3p)可用来区分DCM患儿和健康儿童。循环miRNAs可作为有效的儿童DCM筛查工具。

简介：摘要目的探讨微小RNA-29b对老年冠心病患者左心室肥厚(LVH)的诊断价值。方法研究对象为2015年1月至2018年12月于我院心血管内科住院的老年冠心病患者140例，其中以单纯冠心病(无LVH)患者70例作为NLVH组，以冠心病合并LVH患者70例作为LVH组，选择同期于我院进行健康检查的70例老年无冠心病人群为对照组。观察并比较3组人群之间的室间隔厚度(IVSD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、微小RNA-29b的相对表达量；分析微小RNA-29b与IVSD、LVPWD的相关性；分析微小RNA-29b对老年冠心病伴LVH患者的诊断价值。结果3组间IVSD、LVPWD、微小RNA-29b相对表达量比较差异均具有统计学意义(F＝22.838、22.147、114.096，均P＝0.000)；LVH组IVSD、LVPWD、微小RNA-29b的相对表达量明显高于NLVH组(t＝3.479、3.206、9.852，均P＝0.000)，也高于对照组(t＝3.904、3.553、10.792，均P＝0.000)；NLVH组微小RNA-29b的相对表达量明显高于对照组(t＝2.306，P＝0.420)。微小RNA-29b诊断老年人冠心病伴LVH的ROC曲线分析结果显示，Youden指数的最大切入点为0.80，微小RNA-29b诊断老年人冠心病伴LVH的最佳临界值为3.52，诊断LVH的敏感度为91.73%、特异度为88.27%；Pearson相关分析结果显示，微小RNA-29b表达水平与IVSD、LVPWD呈明显正相关关系(r＝0.63、0.61，均P＝0.000)。结论老年冠心病伴LVH患者微小RNA-29b的表达明显升高，微小RNA-29b表达水平与IVSD、LVPWD呈正相关，对老年人冠心病伴LVH诊断具有较高的灵敏度与特异度。

简介：摘要目的观察微小RNA(microRNA，miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达，探讨其作用靶点，明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本，3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异，用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量，应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达；采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll4 3’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性，采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480，运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响，Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA)，独立样本t检验比较蛋白表达量差异，统计学方法分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析。结果结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜，而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜，分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003) (t＝3.116、2.374，P<0.05)，差异均有统计学意义，体外转入miR-195后，Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002，t＝4.305，P<0.01)，差异有统计学意义，miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路，抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%，t＝4.232，P<0.01)，差异有统计学意义，诱导其凋亡(13.7%比48.3%，t＝8.355，P<0.01)，两者具有协同作用(t＝7.474，P<0.01)，差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达，与其病理学特征密切相关，Dll4为miR-195调控的下游靶基因，miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。

简介：摘要目的观察微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胰腺癌的增殖、迁移、侵袭、凋亡的调控作用。方法选取AsPC-1和SW1990胰腺癌细胞株[均购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)细胞库]作为研究对象。将miR-490-3p模拟物(75 pmol)转染至胰腺癌细胞株AsPC-1和SW1990中，分别构建miR-490-3p过表达组，空载体作为阴性对照组，48 h后，利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-490-3p的表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-490-3p对细胞增殖的作用，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力，原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测细胞的凋亡能力。此研究时限为4个月。组间数据比较采用独立样本t检验。结果miR-490-3p在胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞中相对表达低于正常胰腺细胞(0.58±0.06、0.40±0.20比1.00±0.11，t＝5.886、4.656，P<0.01)；转染miR-490-3p模拟物后，胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞内miR-490-3p相对表达量明显升高(2 173 099.24±385 195.63、1 842 351.45±498 269.21，t＝9.771、6.404，P<0.01)，差异有统计学意义。过表达miR-490-3p后，CCK-8实验结果显示，明显降低AsPC-1和SW1990细胞的增殖(1.63±0.06比2.13±0.02，t＝3.333，P<0.05；1.09±0.04比1.63±0.03，t＝3.119，P<0.05)，差异有统计学意义；划痕实验结果显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞迁移对照组[(48.16±6.17) μm比(18.34±3.26) μm，t＝9.564，P<0.01；(48.49±6.98) μm比(23.02±3.26) μm，t＝7.390，P<0.01]，差异有统计学意义；Transwell细胞侵袭实验显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞侵袭[(36.00±2.45)个比(15.33±2.94)个，t＝13.220，P<0.01；(99.00±15.67)个比(46.17±11.07)个，t＝6.745，P<0.01]，差异有统计学意义；TUNEL细胞凋亡实验结果显示，(17.75±1.71比6.75±4.03，t＝5.025，P<0.01；23.25±3.40比10.25±2.63，t＝6.045，P<0.01)，差异有统计学意义。结论过表达miR-490-3p后抑制AsPC-1和SW1990细胞株的增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞凋亡的作用。

简介：目的通过增强型体外反搏治疗急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）患者,观察其对血浆微小RNA-126（miR-126）表达量的影响。方法将116例已行经皮冠状动脉介入（percutaneouscoronaryintervention,PCI）治疗的AMI患者按随机数字表法分为两组：标准治疗组56例,给予标准药物治疗;反搏治疗组60例,除标准药物治疗外,于PCI治疗后1周即予以36h（每天1h、每周治疗6d、连续6周）的反搏治疗。另外,选择20名门诊健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）法测定PCI治疗后1d、2周、7周后miR-126血浆表达量,同时全程记录患者心绞痛的发作情况。结果与健康对照组比较,AMI患者血浆miR-126表达量明显降低,差异有统计学有意义（P〈0.05）。反搏治疗组血浆miR-126表达量在反搏治疗前与标准治疗组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;反搏治疗后血浆miR-126表达量明显高于标准治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）;并且疗效优于标准治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论增强型体外反搏促进miR-126的表达,血浆miR-126表达量将成为评价心肌梗死患者预后的新标志物。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA CDKN2BAS(lncRNA CDKN2BAS)是否通过靶向微小RNA(miRNA，miR)-98-5p影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞hFOB1.19(购自上海通派生物科技有限公司)与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1(购自美国典型菌种保藏中心)中CDKN2BAS、miR-98-5p的表达水平；按照随机数字表法随机分组为si-con组、si-CDKN2BAS组、miR-con组、miR-98-5p组、si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组、si-CDKN2BAS ＋anti-miR-98-5p组，噻唑蓝(MTT)法检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞增殖活力的影响；流式细胞术检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞凋亡能力的影响；Transwell小室实验检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响；双荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS是否靶向miR-98-5p；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)的表达量。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果hFOB1.19细胞与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1中CDKN2BAS的表达水平分别为1.05±0.28、4.26±0.42、3.65±0.56、4.02±0.46、3.75±0.41，miR-98-5p的表达水平分别为0.98±0.06、0.41±0.05、0.64±0.07、0.57±0.06、0.47±0.05，与hFOB1.19细胞比，骨肉瘤细胞株中CDKN2BAS表达明显上调(F＝80.889，P<0.05)，miR-98-5p表达明显下调(F＝130.868，P<0.05)，差异均有统计学意义；沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞存活率分别为(68.57±8.63)%、(64.68±7.24)%，迁移细胞数分别为(98.43±11.51)、(93.46±12.54)个，侵袭细胞数分别为(47.93±6.84)、(38.64±6.69)个，沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞增殖活力明显降低(F＝37.873、60.131，P<0.05)，细胞迁移及侵袭能力明显减弱(F＝159.281、189.097，167.638、302.502，P<0.05)，Ki-67、MMP-2、MMP-9、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显降低(F＝101.455、161.465、196.590、149.229、157.759、55.555，P<0.05)，而细胞凋亡率明显升高(F＝260.694、270.939，P<0.05)，p21、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高(F＝88.672、448.342、202.034、118.338、121.661、290.273，P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实CDKN2BAS靶向抑制miR-98-5p的表达；与si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组比较，si-CDKN2BAS＋anti-miR-98-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强(t＝4.546、10.682、5.648，P<0.05)，细胞凋亡能力明显减弱(t＝6.996，P<0.05)，差异均有统计学意义。结论lncRNA CDKN2BAS通过靶向负调控miR-98-5p的表达影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA 565686(lncRNA-565686)对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法收集武汉大学人民医院2017年1月至2020年1月行前列腺癌根治术的33例前列腺癌组织和同期行经尿道前列腺电切术的45例良性前列腺增生组织标本，采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测lncRNA-565686在前列腺组织和前列腺癌细胞的相对表达水平。在前列腺癌细胞(PC-3)中转染lncRNA-565686短发卡RNA，分别将未转染短发卡RNA、转染空载体和转染短发卡RNA细胞分为未转染组、空载体转染组和转染组。分别采用细胞克隆增殖实验检测细胞增殖能力；采用细胞迁移和侵袭实验(Transwell实验)检测细胞迁移和侵袭能力；采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA-565686与微小RNA-195(miR-195)的靶向调控关系。组间比较采用t检验。结果前列腺癌组织中lncRNA-565686的相对表达水平高于良性前列腺增生组织，差异有统计学意义(2.51±0.19比0.99±0.13，t＝39.826，P<0.05)；前列腺癌淋巴结细胞(LNCaP)、PC-3细胞中lncRNA-565686表达水平高于人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)细胞，差异有统计学意义(2.36±0.04和3.58±0.06比0.99±0.06，t＝40.257、68.757，P<0.05)；干扰lncRNA-565686表达后，转染组细胞增殖、迁移和侵袭能力均低于未转染组和空载体转染组。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA-565686与miR-195之间的直接调控关系。结论lncRNA-565686在前列腺癌中高表达，下调lncRNA-565686的表达可明显抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，其机制可能与直接负向调控miR-195的表达相关。

简介：摘要目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因(TUG1)靶向作用于微小RNA(microRNA，miR)-145/锌指E-盒结合同源异形盒-1 (ZEB1)对细胞侵袭能力的影响。方法实验标本选自2018年4月至2019年12月间河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收集的甲状腺乳头状癌及癌旁标本共30例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)的方法观察乳头状甲状腺癌及其癌旁组织中lncRNA TUG1及miR-145的表达水平；将lncRNA TUG1 shRNA和miR-145 mimics分别转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中，利用Transwell细胞侵袭实验观察lncRNA TUG1和miR-145对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响。应用生物信息学及双荧光素酶报告基因分析lncRNA TUG1和miR-145的关系及miR-145的靶基因。同时，利用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测lncRNA TUG1和miR-145对靶蛋白表达水平的影响。两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果实时荧光定量PCR实验结果显示，lncRNA TUG1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平(4.43±0.07)高于癌旁组织(1.13±0.06)，差异有统计学意义(t＝3.124，P<0.05)，miR-145的表达水平(0.39±0.08)低于癌旁组织(1.08±0.04)，差异有统计学意义(t＝2.937，P<0.05)；甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中转染lncRNA TUG1 shRNA组及miR-145 mimics组侵袭细胞数[(292.4±48.2)、(234.2±42.4)个]低于各自对照组侵袭细胞数[(452.9±50.8)、(439.4±39.8)个]，差异有统计学意义(t＝3.205，P<0.05；t＝3.186，P<0.05)；生物信息学及双荧光素酶报告基因分析结果显示，lncRNA TUG1可以与miR-145互补结合，ZEB1是miR-145的靶基因；lncRNA TUG1 shRNA组细胞ZEB1蛋白表达水平(0.33±0.12)低于lncRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.17±0.12)，差异有统计学意义(t＝3.320，P<0.05)，miR-145 mimics转染组细胞蛋白表达水平(0.46±0.11)低于miRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.05±0.12)，差异有统计学意义(t＝3.450，P<0.05)。结论lncRNA TUG1能够靶向作用于miR-145/ZEB1调控甲状腺癌细胞的侵袭能力。

简介：目的研究雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）成骨分化以及对微小RNA（miR-20a、miR-29a）表达水平的影响。方法分离培养大鼠BMSC,将细胞分3组分别进行处理,使用完全培养基培养组作为空白对照记为CM,成骨诱导液培养组作为对照记为OM,成骨诱导液＋17β雌二醇（E2）培养组作为实验组记为E2。细胞处理第1、5、9天进行碱性磷酸酶（ALP）活性检测;第5、9天,蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测成骨相关蛋白如Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、骨桥蛋白（OPN）的表达情况,定量聚合酶链反应（PCR）检测miR-20a及miR29a的表达情况;第19天,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。两组数据的结果进行两组独立样本的t检验,两组以上的数据进行单因素方差分析,检验水准为P〈0.05。结果处理1d后,各组ALP活性较低,组间差异无统计学意义（CM1d：3.49,OM1d：2.82,E21d：2.92;F=2.002,P=0.216）;5d后,E2组及OM组ALP活性较1d时明显提高（E21d：2.92,E25d：15.83;t=5.065,P=0.007;OM1d：2.82,OM5d：8.38;t=13.39,P=0.0002）,5d时E2的值为OM组的2倍、CM组的4倍,差异有统计学意义（F=13.95,P=0.0055）;9d后,各组ALP活性水平有明显增高（CM9d：14.66,OM9d：22.17,E29d：45.99）,约为5d时的3倍（CM：t=11.830,P=0.0003;OM：t=8.068,P=0.0013;E2：t=9.332,P=0.0007）,组间差异变化不明显,OM组约为CM组1.5倍,E2组约为OM组2倍,差异有统计学意义（F=119.1,P〈0.0001）。第5、9天,E2组成骨相关蛋白表达水平在均比OM、CM组高。第19天,E2组比OM组形成更多矿化结节。E2组miR-20a-5p表达水平在第5天为OM组的2倍（Mann-WhitneyU=20.000,P=0.013）,在第9天为OM组的1.5倍（Mann-WhitneyU=32.000,P=0.079）;而miR-29a-3p的表达水平相比OM组无明显变化（5d：Mann-WhitneyU=0.000,P〉0.999,Mann-WhitneyU=10.000,9d：P=0.680）。结论E2能促进大鼠BMSC的成骨分化,同时提高miR-20a-5p�

简介：摘要目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中微小RNA(miR)-25表达水平与病灶内癌基因表达变化的相关性。方法选择海南省人民医院2018年3月至2020年12月期间NSCLC患者为NSCLC组，以同期健康志愿者作为对照组，测定外周血中miR-25的表达水平以及肺癌组织、癌旁组织中miR-25、抑癌基因、增殖侵袭基因的表达水平，应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺癌细胞株和正常肺上皮细胞BEAS-2B中的miR-25表达水平。不同组间计量资料的分析采用独立样本t检验。相关分析采用Pearson检验。结果NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平高于对照组(1.88±0.24比1.03±0.14，t＝22.432，P<0.05)，肺癌病灶内miR-25的表达水平高于癌旁病灶(2.19±0.32比1.05±0.17，t＝21.797，P<0.05)且NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平与肺癌病灶内miR-25的表达水平呈正相关(r＝0.641、P<0.01)。miR-25在NSCLC细胞株中的表达量高于正常人肺上皮细胞(2.05±0.35比1.01±0.15，t＝15.237，P<0.05)；肺癌病灶内Krüppel样因子4(KLF4)、B细胞易位基因2(BTG2)、含F-框及WD重复域蛋白7(FBXW7)、Kazal基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白(RECK)的mRNA表达量水平均低于癌旁病灶(分别0.44±0.08比1.04±0.17、0.64±0.07比1.01±0.15、0.59±0.08比0.98±0.13、0.48±0.06比1.02±0.14，t＝22.407、15.681、18.053、24.827，P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈负相关(r＝-0.574、-0.625、-0.512、-0.663，P<0.05)。肺癌病灶内细胞周期蛋白(Cyclin) D1、c-Myc、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA表达量水平均高于癌旁病灶(分别2.33±0.32比0.97±0.14、1.93±0.24比1.04±0.18、2.08±0.28比0.99±0.11、2.27±0.31比1.02±0.15、2.55±0.38比1.03±0.17，t＝28.771、21.567、26.832、26.756、26.966，P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈正相关(r＝0.564、0.692、0.503、0.672、0.485，P<0.05)。结论NSCLC患者外周血中miR-25的高表达与抑癌基因表达下调、增殖侵袭基因表达上调密切相关，NSCLC细胞株中的miR-25的表达也高于正常肺上皮细胞。